PDK1信号通路

褐藻胶裂解酶通过β-消除反应降解褐藻胶,在非还原端C4和C5之间形成双键,生成具有多种生物活性的功能性褐藻胶寡糖(alginate oligosaccharides,AOS)。然而,目前褐藻胶裂解酶的热稳定性难以满足其在工业上的应用。本研究提出一种基于HotSpot Wizard 3.0分析和计算机辅助计算Δselleck产品ΔGfold的有效合理设计策cholestatic hepatitis略,利用定点突变获得了12个突变体。在50℃条件下孵育3 h后,突变体Q246L和K249P可保留60%以上酶活,而Q246V和K249V可保留70%以上的酶活性,显著提高了褐藻胶裂解酶AlyMc(保留45%酶活)的热稳定性。TLC结果表明AlyMc降解褐藻胶的产物以DP2-4的寡糖为主,其中三糖含量最高。综合分析了酶的三维结构和分子动力学模拟,发现突变增强了突变位点处残基与周围残基之间的疏水相互作用。分子动力学模拟结果显示,突变体Q246V降低了176-178残基的自由度;K249V突变降低了188-192残基的自由度。突变引起疏水作用力的增强和结构灵活性的降低可能是酶热BYL719稳定性提高的原因。

猪流行性腹泻病毒(PEDV)为αselleck合成属冠状病毒,引起猪的呕吐、腹泻、脱水而死的接触性肠道传染病,给全球生猪产业造成了灾难性的影响。PEDV包括G1型毒株和G2型毒株,当今主要流行G2型毒株。PEDV存在变异快、防控难的问题,其疫苗主要为灭活苗和减毒活疫苗,但灭活苗存在免疫原性差,以及灭活不彻底的缺点;而减毒活疫苗也存在返强的风险。因此开发一种安全、有效、免疫原性强的疫苗迫在眉睫。本研究主要从以下三个方面对PEDV亚单位疫苗进行设ABT-199半抑制浓度计和优化:1、与截短蛋白相比,PEDV刺突(S)蛋白三聚体免疫效果最佳。根据PEDV刺突蛋白结构及区域划分,构建并真核表达了PEDV-S三聚体及截短蛋白,发现与各截短蛋白相比,PEDV-S三聚体免疫小鼠后可以诱导更强的中和保护,并发现当前流行的G2亚型毒株S蛋白免疫后的血清对G1亚型毒株也有中和保护效果。2、2P(I1074P,Medicare AdvantageL1075P)突变能够提升PEDV-S蛋白的表达量和稳定性。通过PEDV-S蛋白与SARS-Co V-2-S蛋白结构比较,确定了影响PEDV-S蛋白由融合前构象向融合后构象转变的脯氨酸(P)突变位点,且构建并表达了脯氨酸突变体及野生型(WT)蛋白。与WT蛋白相比,2P突变体蛋白具有更高的表达量与稳定性,因此选定2P突变体蛋白进行进一步研究。3、铁蛋白纳米颗粒可以进一步提高PEDV-S蛋白的免疫原性。以2P突变体蛋白为模型,对其进行了铁蛋白(Ferritin)纳米粒子的改造,构建并表达了PEDV-S-Ferritin蛋白,负染电镜观察及纳米粒径分析表明其为均质的纳米颗粒。与WT相比,证明了2P-Ferritin蛋白免疫小鼠后可以诱导更强的中和保护,且偏向于TH1型,为临床应用提供了理论依据。综上所述,本研究主要对PEDV的亚单位疫苗进行研究,为获得更安全、有效的PEDV疫苗提供理论基础和技术支持。

目的 通过对《心理学》和《精神病学》的教学内CCRG 81045细胞培养容进行适当调整，加强医学生对心理学知识的学习，以期优化医学Immunosupresive agents生《精神病学》学习效果以及心理健康教育。方法 根据入学分班，随机将两个大班学生分别作为实验组和对照组。实验组学生在《医学心理学》学习过程中，重点倾向于“基础心理学”内容的学习，对照组学生则按照原教学大纲内容不做课程内容调整。在学习《精神病学》课程时，实验组加入《变态心理学》内容，强调精神障碍的心理学病因及心理治疗，对照组不做相关内容的调整。学期结束时对比两组学生期末结业考试笔试成绩。在学生毕业前压力最大时，进行两组学生HAMA和HAMD评分，比较两组间焦虑抑郁评分结果。结果 两组学生之间《医学心理学》课程成绩无显著性差异(t=1.48,P=0.14)。实验组《精神病学》成绩高于对照组，有显著性差异(t=2.13,P=0.03)。实验组HAMA与HAMD评分值均较对照组selleck Dorsomorphin低，有显著性差异(t=-9.51,P=0.00;t=-6.66,P=0.00)。结论 在医学生的教育培训过程中，加强心理学内容学习，不但可以提高他们的《精神病学》考试成绩，还可以减轻他们面临毕业前压力时的焦虑和抑郁情绪。

目的 探讨“二孩”或“三孩”高龄疤痕子宫孕妇再次剖宫产产后出血状况及相关影响因素。方法 选取2019年5月至2023年5月于武义县中医院行剖宫产生育“二孩”或“三孩”的高龄疤痕子宫产妇398例为研究对象，统计其产后出血的发生情况，并通过单因素及多因素Logistic分析产后出血发生的影响因素。结果 398例剖宫产生育“二孩”或“三孩”的高龄疤痕子宫产妇中，有59例(14.82%)发生产后出血。单因素及多因素Logistic分析结果表明：年龄≥40岁(OR=4.011)、剖宫产生育三孩(OR=4.035)、合并妊娠期高血压(OR=3.364)、既往流产≥3次(OR=6.760)、前置胎盘(OR=11.3selleck Tamoxifen48)、胎盘植入或粘连(OR=9.143)及子宫收缩乏力(OR=10.633)是产后出血发生的危险因素(P<0.05),而距前次剖宫产时间≥24个月是避免产后出血发生的保护性因素(SCH772984试剂OR=0.381,P<0.05)。结论 生育“二孩”或“三孩”高龄疤痕子宫孕妇再次剖宫产产后出血发生率较properties of biological processes高，产后出血与年龄、生育孩次、合并妊娠期高血压、既往流产次数、前置胎盘、胎盘植入或粘连、子宫收缩乏力及距前次剖宫产时间等有关，临床上应引起关注。

FLOWERING LOCUS T(FT)亚家族在植物生长发育过程中发挥着重要作用。为探究毛竹FT基因的表达特性及生物学功能，本研究通过反转录PCR(RT-PCR)从毛竹中克隆到1个FT同源基因PheFT12a，该基因编码区序列长度为522 bp，包含典型的4个外显子和3个内含子，编码173个氨基酸，编码蛋白包含完整的磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）结构域expected genetic advance。系统进化树分析结果显示，PheFT12a与水稻（Oryza sativa）OsFTL12的亲缘关系最近，与Blebbistatin试剂OsFTL2(Hd3a)和拟南芥（Arabidopsis thaliana）FT的亲缘关系相对较远。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示，PheFT12a基因在毛竹实生苗叶片中表达最高，茎次之。亚细胞定位结果显示，PheFT12a蛋白定位于细胞核和细胞质，主要富集于细胞核。转化拟南芥ft突变体表型结果NSC 127716作用显示，PheFT12a能明显回补ft突变体的晚花表型，可提高回补植株的主茎数和侧枝数。本研究为进一步分析PheFT12a的生物学功能提供了参考依据，并为毛竹开花及芽发育的分子机制提供了基础资料。

目的:评价不同生长期刺山柑果的质量,制备刺山柑果两种经皮给药制剂,并研究其体外透皮特性。方法:1.采用AZD2281化学结构《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立14批次不同生长期刺山柑果的HPLC指纹图谱并分析相似度。使用SPSS 25.0和SIMCA-P 14.1软件进行聚类分析、主成分分析和PLS-DA分析。通过对照品比对指认化学更多成分并进行定量测定。2.采用Box-Behnken设计-响应面法优化软膏剂的最佳基质,并通过体外透皮试验、HPLC法以盐酸水苏碱为指标筛选制剂中促渗剂的用量。3.采用单因素实验确定凝胶剂的处方,并通过体外透皮试验、HPLC法以盐酸水苏碱为指标筛选制剂中促渗剂的用量。4.通过体外透皮试验探究盐酸水苏碱在两种经皮给药制剂中的体外透皮规律以及透皮实验参数,并采用UPLC-MS/MS技术对两种经皮给药制剂透皮前后化学成分进行研究和对比。结果:1.14批次不同生长期的刺山柑果HPLC指纹图谱共匹配出14个共有峰,分别指认出2号峰为原儿茶酸、13号峰为芦丁、14号峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷,指纹图谱相似度范围为0.933～0.Hepatitis B990。聚类分析将14批次刺山柑果分为4类;主成分分析得刺山柑成熟果质量较好;经PLS-DA分析筛选出了芦丁和山柰酚-3-O-芸香糖苷等9个差异成分。样品中原儿茶酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、盐酸水苏碱的含量分别为0.0323～0.0594 mg/g、0.1157～0.4640mg/g、0.0629～0.3307 mg/g、33.2686～66.7430 mg/g。2.软膏剂的基质类型选择O/W型,采用响应面法对软膏剂成型影响较大的3个因素进行优化,得最佳基质比例为十二烷基硫酸钠-丙二醇-RH40(0.46:14.62:10.00),载药量为10%,体外透皮试验选择软膏剂中促渗剂的用量为2%。3.凝胶剂的基质选择卡波姆980NF,用量为1.2%,p H调节剂选择三乙醇胺,丙二醇用量为12%,载药量为10%,体外透皮试验选择凝胶剂中促渗剂的用量为3%。4.软膏剂中盐酸水苏碱的体外透皮规律符合一级动力学方程,24 h的单位面积累积渗透量为2934.1192μg/cm~2,透皮速率为0.2516μg/cm~2/h,累积渗透率为79.0425%,制剂残留率为4.4696%,皮内滞留率为0.2653%,损失率为16.2226%。凝胶剂中盐酸水苏碱的体外透皮规律符合一级动力学方程,24 h的单位面积累积渗透量为3308.4727μg/cm~2,透皮速率为0.1746μg/cm~2/h,累积渗透率为90.1289%,制剂残留率为0.5483%,皮内滞留率为0.2380%,损失率为9.0848%。UPLC-MS/MS化学成分分析得,在刺山柑果软膏剂和凝胶剂透皮接收液中可检测到水苏碱、芦丁、槲皮素等化学成分。结论:1.建立的刺山柑果HPLC指纹图谱操作简便、结果可靠,原儿茶酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和盐酸水苏碱可以作为刺山柑果质量评价的指标性成分。2.刺山柑果软膏剂和凝胶剂的制备工艺稳定可靠,具有缓释作用,可在一定程度上延长药效时间。3.刺山柑果软膏剂和凝胶剂体外透皮规律均符合一级动力学方程,其中的水苏碱、芦丁、槲皮素等化学成分可能透过皮肤从而发挥抗炎作用。

肺癌在世界范围内发病率和死亡率都位居前列,是最常见的恶性肿瘤之一。肺癌的发生发展与免疫调节,炎性浸润有着很重要的关系。昼夜节律是指机体持续约24小时的内源性生物行为周期,对免疫功能具有正面和负面的影响。临床调查显示昼夜节律紊乱容易导致机体免疫稳态失衡,增大机体炎症反应甚至是癌症发生的概率。酸枣仁,是鼠李科植物酸枣的种子,是一味治疗失眠难寐,烦Adezmapimod躁焦虑的经典中药。酸枣仁皂苷是酸枣仁的主要成分,具有镇静催眠,抗炎抗氧化,提高免疫,抗癌的作用。因此本文基于昼夜节律紊乱对机体的影响作用,从肺癌发病因素方面入手,探讨昼夜节律紊乱对肺癌的影响以及酸枣仁皂苷通过调节昼夜节律紊乱对肺癌的改善作用。首先我们探讨昼夜节律紊乱对肺癌的影响作用。我们先后建立了三个动物模型,即使用对氯苯丙氨酸(PCPA)建立睡眠障碍型昼夜节律紊乱模型,使用香烟烟雾联合乌拉坦建立肺癌模型,然后使用对氯苯丙氨酸联合香烟烟雾以及乌拉坦建立昼SCH772984纯度夜节律紊乱合并肺癌模型。对三个模型分别以酸枣仁皂苷高中低三个剂量灌胃给药,检测小鼠一般体征。使用戊巴比妥钠睡眠实验以及松果体细胞HE染色,检测睡眠障碍型昼夜节律紊乱模型的建立以及酸枣仁皂苷对昼夜节律紊乱的调节作用;使用小动物能量代谢仪系统检测小鼠肺通气量变化、小动物活体成像技术检测小鼠肿瘤生长情况、HE染色检测小鼠肺部病理结构来验证肺癌模型、昼夜节律紊乱合并肺癌模型的建立。根据小鼠静息代谢,荧光染料IR783在肿瘤部位聚集的荧光强度、肺组织表面病变情况以及HE染色病理切片,免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中血管内皮生长因子(VEGF),增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的情况等,评估昼夜节律紊乱对肺癌模型小鼠肿瘤生长的影响以及酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱对肺癌的改善。然后我们探讨了昼夜节律紊乱促进肺癌发展的原因。我们使用碳粒廓清以及溶血空斑实验评估昼夜节律紊乱对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力,体液免疫的影响;使用血常规检测小鼠外周血细胞数量,ELISA检测小鼠血清和肺泡灌洗液中IL-6,IL-1β,TNF-α,评估昼夜节律紊乱对正常小鼠炎性细胞和炎性因子表达的影响;而后用宿主抗异种移植瘤实验评价昼夜节律紊乱对正常小鼠整体免疫水平的影响。根据小鼠腹腔巨噬细胞碳粒吞噬指数、溶血空斑生成量,外周血炎症细胞数目,血清和肺泡灌洗液中IL-6,IL-1β,TNF-α炎性因子表达量,异种移植瘤生长情况评价昼夜节律紊乱对小鼠的影响以及酸枣仁皂苷调节昼夜节律对小鼠的改善作用。最后我们探讨酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱的机制。我们使用网络药理学、分子对接技术预测酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱的graphene-based biosensors生物功能作用以及相关作用通路;使用T/B淋巴细胞增殖实验,荧光探针DCFH-DA检测小鼠脾细胞ROS以及Western Blot实验检测小鼠脾组织IL-6,STAT3的表达情况来验证网络药理学预测结果。在评估昼夜节律紊乱对肺癌小鼠中的作用以及药物改善情况的研究中,通过戊巴比妥钠睡眠实验和松果体病理切片,我们发现昼夜节律紊乱模型小鼠相较于对照组睡眠潜伏期变长,睡眠持续时间缩短,松果体细胞排列分布紊乱,细胞核固缩,细胞数量明显减少,空泡性增多。酸枣仁皂苷给药后,昼夜节律紊乱模型小鼠睡眠潜伏期变短,睡眠持续时间变长,松果体细胞间隙变小,细胞数量增加,说明酸枣仁皂苷对昼夜节律紊乱有调节作用;通过静息代谢,小动物活体成像实验,我们发现肺癌模型小鼠以及昼夜节律紊乱合并肺癌模型小鼠潮气量均下降30%以上,肺部区域有大面积肿瘤荧光成像;通过小鼠肺部病变照片,HE染色,免疫印迹实验,我们发现,与肺癌模型小鼠对比,昼夜节律紊乱合并肺癌模型小鼠第五周时肺部充血水肿严重,肺部大量炎性细胞浸润,肺损伤严重,第十周时肺部有大量肿瘤结节,且肺叶严重充血变形;HE染色后,昼夜节律紊乱合并肺癌模型小鼠肺部肿瘤病灶面积更大,肺泡壁增厚,肺泡壁间隔断裂明显,肺泡塌陷严重,PCNA,VEGF蛋白高度表达,说明昼夜节律紊乱加剧肺部炎性浸润,增大肺损伤程度,加重肺癌的恶化。在肺癌模型中,酸枣仁皂苷对提高小鼠自主活动、肺通气量,降低小鼠肺部荧光强度,减少炎性浸润、肿瘤结节数,修复肺损伤,改善肺癌方面有一定作用。在昼夜节律紊乱合并肺癌模型中,酸枣仁皂苷呈剂量依赖性地显著提高小鼠自主活动、肺通气量,降低肺部荧光强度,减少肺部炎性浸润以及肿瘤结节数,促进肺部损伤修复,改善肺部病理结构进而起到改善肺癌的作用。在探讨昼夜节律紊乱促进肺癌发展的原因中,我们发现昼夜节律紊乱小鼠体重和自主活动次数均下降;小鼠碳粒廓清吞噬指数显著升高,溶血素和溶血空斑形成均显著升高;脾脏肿大;外周血炎性细胞,血清和肺泡灌洗液中炎性因子增多;异种移植瘤增长速度快,体积大,这些现象表明昼夜节律紊乱会导致小鼠体液免疫功能亢进,整体免疫下降;随后我们对昼夜节律紊乱的小鼠进行酸枣仁皂苷不同剂量给药,与未给药组相比,给药后的小鼠自主活动次数,碳粒廓清吞噬指数、溶血素以及溶血空斑形成均下降,并且昼夜节律紊乱小鼠外周血炎症细胞数量以及血清和肺泡灌洗液中IL-6,IL-1β,TNF-α炎性因子表达量减少。说明酸枣仁皂苷能够抑制体液功能亢进,减少炎性细胞和炎性因子的产生,逆转免疫低下,提升小鼠整体免疫应答能力。在探讨酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱的机制中,我们首先通过网络数据库筛选并得到酸枣仁皂苷与昼夜节律紊乱的交集靶点,根据交集靶点得到与酸枣仁皂苷发生相互作用的相关靶点以及酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱生物功能分析以及相关通路。根据Swiss Dock在线网站预测出酸枣仁皂苷与IL-6,STAT3有较高分子对接分数,然后将酸枣仁皂苷与IL-6,STAT3进行分子对接,并使用Pymol软件对作用位点进行可视化分析。我们发现网络药理学预测酸枣仁皂苷调节昼夜节律紊乱是通过细胞增殖的正向调节以及炎症反应等生物功能,以及癌症通路中的IL-6/STAT3生物信号轴;分子对接技术表明酸枣仁皂苷与IL-6、STAT3有氢键连接,有较好的结合。然后我们通过生物实验进行验证预测结果。我们发现在脾淋巴细胞增殖实验以及脾淋巴细胞ROS检测实验中,昼夜节律紊乱可以抑制小鼠T淋巴细胞增殖,促进B淋巴细胞增殖,促进脾淋巴细胞ROS增多,酸枣仁皂苷干预后,可促进小鼠脾T淋巴细胞增殖,抑制B淋巴细胞增殖,减少脾淋巴细胞ROS。蛋白免疫印迹法实验表明昼夜节律紊乱可以促进IL-6/STAT3的蛋白表达,酸枣仁皂苷干预后,抑制IL-6/STAT3的表达。以上实验结果表明酸枣仁皂苷通过作用于IL-6/STAT3生物信号轴,促进细胞增殖,调节炎症反应来调节昼夜节律紊乱,这与网络药理学预测结果一致。综上所述,昼夜节律紊乱促进肺癌的发展。酸枣仁皂苷通过调节昼夜节律紊乱减轻小鼠炎症反应,减缓体液免疫功能亢进,促进T淋巴细胞增殖,提高小鼠整体免疫能力,减轻肺部损伤,减少肺肿瘤结节数,调节肺部病理结构进而达到改善肺癌的目的。其调节昼夜节律紊乱的作用机制可能与酸枣仁皂苷阻断昼夜节律紊乱调控IL-6/STAT3生物信号轴有关。

禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)可引起禽类多种疾病。近年来,我国鸡群感染ARV有增加趋势,而且临床症状也表现多样,给我国养殖业造成巨大经济损失。一些免疫过ARV疫苗的鸡群也出现较高发病率,给ARV的防控增加了难度。为了解近年来我国ARV流行状况及流行毒株分子遗传进化、致病性和疫苗保护性等情况,本研究采集2019年1月-2022年9月华东地区的疑似ARV样本,对ARV的流行病学、基因组遗传进化、致病性及疫苗保护等方面进行研究。具体内容如下:1.2019年1月-2022年9月我国华东地区流行病学调查采集2019年1月-2022年9月我国山东、福建、江苏、浙江和安徽华东5省份256个鸡场疑似ARV的组织样本2076份以及71个鸡场的2631份血清样本进行检测。RT-PCR检测结果显示69个鸡场的277份样本ARV核酸阳性(阳性率为13.34%),感染日龄主要集中在2-6周龄(占比84.8%),易感品种主要为白羽肉鸡,其次是肉种鸡。血清样本的ELISA抗体检测结果显示,59个鸡场的2160份样品为ARV抗体阳性(阳性率为82.10%)。按照年度统Rapamycin说明书计,2019年至2022年度,采集样本中ARV病原阳性率分别为5.4%、11.2%、20.1%和12.8%;抗体阳性率分别为84.73%、78.28%、87.5%和70.23%。277份ARV核酸阳性样本进一步利用LMH细胞进行病毒分离,共分离获得90株KPT-330ARV病毒。结合σC基因遗传进化特征及ARV病毒血清学分型规律,将ARV经典的1、2、3、4、5、6总共6个分支(基因型)进一步细分为1.1、1.2、1.3、2.1、2.2、3、4.1、4.2、4.3、5和6共11个小分支(基因型)。根据新的划分标准,本研究分离的90株毒株分属于1.2、1.3、2.1、2.2、3、4.2、4.3和5共8个基因型,其中1.3、2.2、4.3和5分支毒株最多,为华东地区主要流行基因型。2.不同基因型ARV全基因组测序分析筛选华东主要流行的1.3、2.2、4.3和5分支代表毒株20191774、201910415、20206919和20209560进行全基因组测序。基因序列比对结果表明所测4株病毒的10个基因组片段均来自鸡源呼肠孤病毒,但与Gen Bank中ARV有一定差异,均发生了不同程度的片段重组或核苷酸位点突变,其中201910415毒株在L2基因发生基因片段内重组。3.ARV Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法建立通过对Gen Bank中ARV序列信息以及本研究测得不同基因型ARV序列信息进行比对分析,在M3基因的保守区设计引物和探针,制备标准品,建立检测所有基因型ARV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法标准曲线线性关系良好,相关系数R~2达到0.999,扩增效率为108.196%;敏感性高,检测最低病毒模板浓度为1.0×10~1copies/μL,是普通RT-PCR的100倍;特异性强,与其他常见禽病不发生交叉反应;重复性好,组间组内重复变异系数小于1%;检测范围广,能检测S1133疫苗株和目前我国华东地区流行的所有基因型毒株。说明本研究建立的方法可广泛应用于我国各省份样品中ARV的定性和定量检测。4.动物感染模型的建立本研究测定20191774、201910415、20206919和20209560这4株流行代表株的ELD_(50)。选取ELD_(50)最低的20206919做为攻毒毒株,以脚垫接种、口服和口服同居三种方式对1日龄SPF鸡和5日龄白羽肉鸡进行攻毒试验,结果表明SPF鸡脚垫攻毒可以引起脚垫肿胀症状可作为攻毒模型,SPF鸡经口服和口服non-alcoholic steatohepatitis同居感染未发生明显临床症状,但是抗体转阳,肉鸡通过不同接种方式攻毒均出现典型的临床症状可作为致病性模型。5.不同基因型ARV对肉鸡致病性研究本研究对20191774、201910415、20206919和20209560进行肉鸡致病性研究。结果表明这4株毒株均能引起白羽肉鸡脚垫及关节肿胀等与临床相似症状,但并未发生死亡。4株ARV流行株可引起肉鸡病毒性关节炎、生长抑制等症状,其中20191774(1.3分支)毒株对体重的影响以及造成脚垫肌腱损伤最严重,排毒量和组织病毒载量也最高,表明其致病力最强,其次是201910415(2.2分支),而20209560(5分支)和20206919(4.3分支)致病力相对较轻。6.两种商品疫苗对不同基因型ARV的攻毒保护性研究为验证目前商品疫苗是否能保护当前流行ARV毒株的感染,本研究选取市场上常用的两种ARV疫苗对SPF鸡进行免疫,其中疫苗A为国产多价苗,疫苗B为进口疫苗。利用当前流行代表株20191774(1.3分支)、201910415(2.2分支)、20206919(4.3分支)和20209560(5分支)毒株进行攻毒。结果表明,疫苗A对1.3、4.3和5分支毒株的保护率为100%,而对2.2分支毒株的保护率仅为20%;免疫疫苗B对1.3、2.2、4.3和5分支毒株的攻毒保护率均为0%。7.实验室制备ARV候选疫苗对不同基因型毒株保护性试验研究本研究从90株流行株中筛选出毒力较强的,2019-2022年流行较多的1.3、2.2和5分支代表株20191774、201910415和20209560作为疫苗候选株。这三株毒株经LMH细胞增殖,按照1:1:1比例制备油乳剂灭活疫苗。制备好的灭活疫苗免疫SPF鸡,利用1.3、2.2、4.3、5分支代表株20191774、201910415、20206919和20209560毒株进行攻毒。结果表明,免疫灭活多价苗的SPF鸡均未发病,免疫保护率为100%,制备的候选苗对不同基因型毒株的保护效果较好。

随着人口的老龄化,骨质疏松症导致骨折的患者也随之增加,每年都有着数百万的患者遭受着折磨。由于中老年人耐受性差,骨骼自愈能力差,一旦发生骨质疏松性椎体压缩性骨折,会造成严重的精神压力和经济费用,同时还会增加短期死亡率。聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥优异性能使得其成为人工关节锚固的理想材料。但与自体生命组织相比,PMMA骨水泥植入人体后感染风险更高,如今实际应用通常是外加抗生素来解决,同时也有研究者通过改性显影剂等方法使PMMA骨水泥具有抗菌性,但仍存在微生物耐药性以及显影剂添加量限制等问题。基于以上Liraglutide临床试验背景,本研究通过Menschutkin法合成三种既有阳离子季铵盐官能团,同时也具有碳碳双键的QAMs抗菌单体,以及合成不同QAMs取代量的抗菌微球,分别从液体端和粉体端制备出抗菌型PMMA骨水泥,具体研究内容如下:(1)通过Menschutkin法合成DMADDM、DMAHDM和DMAPPA三种QAMs抗菌Pollutant remediation单体,对其结构和抗菌性能进行分析。实验表明三种QAMs合成成功,QAMs具有广谱抗菌性,其中DMAPPA抗菌效果最佳,对三种菌种的MIC值均小于0.03μg/m L,MBC值在0.03～0.06μg/m L之间。(2)通过分散聚合合成不同DMADDM和DMAHDM取代量的抗菌微球,并分别用这两种单体和相应的抗菌微球,从液体端和粉体端对PMMA骨水泥进行抗菌改性,对抗菌微球形貌和元素进行研究,对改性骨水泥的固化性能、机械性能、抗菌性能和细胞毒性进行测试。实验表明,抗菌微球表面存在较大孔隙;卤素原子以游离的离子形式存在;抗菌改性对骨水泥性能的影响较为明显,但都在国际标准限制以内,但除DMADDM和相对应的抗菌微球以外,DMAHDM改性骨水泥细胞毒性较大。(3)研究了DMAPPA添加量梯度对PMMA骨水泥性能的影响,实验发现DMAPPA改性骨水泥具有强抗菌性能、无细胞毒性和细胞相容性好等特点,同时可以改善骨水泥的亲水性和固化性能,少量添加对骨水泥的性能影响较小,添加量不低于30%时,骨水3-MA采购泥向弹性体转变。添加量为20%时,其综合性能最佳。

采用硅胶柱层析法从多脂鳞E-616452使用方法伞（Pholiota adiposa）子实体中分离纯化出化合物F1-3，并通过电子轰击质谱及核磁方法鉴定其化学结构，确定该化合物为麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮（NavitoclaxETO）。应用CCK8法测定ETO对HepG2、MCF7、He La及A549细胞增殖抑制率。在H22荷瘤小鼠体内进行ETO抗肿瘤实验，将小鼠随机分为模型组、阳性组（环磷酰胺CTX,0.1×10~(-3) mmol·kg~(-1)）及ETO组（低、中、高剂量分别为0.025、0.05、0.1 mmol·kg~(-1)），计算脏器指数和抑瘤率；采用ELISA法测定小鼠血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6和VEGF含量，采用HE染色法观察肿瘤组织细胞排序、细胞完整度和细胞核数量，采用TUnear-infrared photoimmunotherapyNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡程度，采用免疫组化法检测VEGF、Bcl-2和BAX蛋白表达水平。结果表明ETO对Hep G2、MCF-7和He La细胞增殖具有抑制作用，100μg·m L~(-1)ETO对HepG2细胞的抑制率高达91.04%；在H22荷瘤小鼠体内实验中，ETO高剂量组抑瘤率达72.06%，且对小鼠胸腺、脾脏指数具有明显恢复作用，表现出抑制肿瘤生长的作用；免疫组化实验表明模型组小鼠肿瘤组织细胞排列整齐紧密，生长状态良好，凋亡率较低；ETO组小鼠肿瘤组织细胞出现不同程度的变形、破裂及模糊不清和大面积凋亡现象；与模型组相比，ETO可提高小鼠血清中IFN-γ、IL-2及IL-6含量，降低VEGF含量，通过降低VEGF、Bcl-2及升高BAX蛋白表达水平表现出较好的抗肿瘤作用。