目的：从中华大蟾蜍（Bufo gargarizans Cantor）肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因（BgCPR,GenBank登录号：OQ572435）进行生物信息学分析，并进行功能验证。方法：基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列，使用SnapGene软件设计BgCPRlymphocyte biology: trafficking基因两端特异性引物，以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增。利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树；基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组，利用聚乙二醇法制备转化子微粒体，验证其对细胞色素C的还原功能。结果：克隆得到全长2 043 bp的BgCPR基因cDNA，编码680个氨基酸，相对分Ipatasertib IC50子质量77 852 Da。结构预测显示，BgCPR蛋白为非分泌蛋白；有一段跨膜螺旋区，位于蛋白的selleck合成第24～46位氨基酸之间；亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上。采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能。结论：本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因，并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞，为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础。