目的:探讨丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)是否通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻碘普罗胺(iopromide)诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)损伤。方法:选取不同浓度iopromide(50、100、150、200 mg I/m L)作用于HK-2细胞3h后,通过CCK-8法检测HK-2细胞的细胞活力,最终以150 mg I/m L iopromide诱导HK-2细胞建立造影后急性肾损伤(post-contrast acute kidney injury,PC-AKI)体外模型。用不同浓度Sal B(10、50、100μmol/L)对细胞进行预处理,采用CCK-8法检测其细胞活力,分别用DCFH-DA染色和罗丹明123染色后,在显微镜下观察各组细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm),并分别用流式细胞仪进行检测。DAPI染色观察细胞核形态变化,Western blot检测各组细胞Toll样受体4重组蛋白(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、磷酸化核因子(p-NF-κB)、白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。由Molecular Operating Environment(MOE)软件对配体(Sal B)与靶蛋白(TLR4、NLRP3)的对接自由能进行计算,并分析其对接氨基酸残基。另外,引入TLR4抑制剂(TAK-242)对细胞进行预处理,并对细胞活力、ROS、MMP、细胞凋亡率,以及上述蛋白表达水平进行检测。结果:1.iopromide可通过激活TLR4/NF-Adavosertib试剂κB/NLRP3导致HK-2细胞损伤:与control组相比,iopromide组细medium entropy alloy胞活力显著降低,ROS水www.selleck.cn/products/mln-4924平明显提高,而△Ψm水平降低。凋亡细胞数、cleaved caspase-3蛋白表达水平,Bax/Bcl-2比值明显增加。TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1、p-NF-κB、IL-18、IL-1β、TNF-α等蛋白表达水平显著提高。TAK-242可以提高碘普罗胺诱导的细胞活力,降低细胞凋亡率,下调NLRP3炎症小体相关组分表达。2.Sal B可减轻iopromide诱导的HK-2细胞炎症性损伤:用不同浓度Sal B处理后,100μmol/L Sal B组细胞活力显著降低,ROS水平明显提高,而△Ψm水平降低。凋亡细胞数、cleaved caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值均降低,TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1、p-NF-κB、IL-18、IL-1β、TNF-α等蛋白表达水平明显降低,与5μmol/L TAK-242作用相似。但同时使用TAK-242和Sal B进行预处理组,细胞活力及细胞凋亡率较单独使用TAK-242或Sal B的预处理组无显著性差异。结论:1.iopromide可能通过激活TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路诱导HK-2细胞损伤。2.Sal B可减轻iopromide诱导的HK-2细胞损伤,减少凋亡及ROS生成,增强△Ψm水平,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路。