目的 研究制备去外泌体血清的超速离心方法，并评估对成骨细胞与破骨细胞生物活性的影响，为研究成骨、破骨细胞来源外泌体相关研究提供理论参考。方法 用NTA技术比较目前3种主流超速离心法以及商品化去外泌体血清的纳米颗粒去除效果，筛选最佳方法，并用Western blot验证。然后将最佳去外泌体血清作为Exo-free组，普通胎牛血清作为对照组分别培养原代成骨细胞与破骨细胞，利用ALP染色法、茜素红染色法观察成骨细胞成熟与矿化，EdU法检测成骨细胞增殖活性，流式细胞仪分析凋亡情况；应用TRAP评估破骨细胞诱导情况，并记录骨吸收陷窝数量分析骨吸收功能。结果 NTA显示方法一(纯胎牛血清，100 000×g,4℃,离心18 h)所得去外泌体血清效果最佳，纳米颗粒清除率达99.31%,优于商品化血清及其他两种方法，差异具有显著统计学意义(P<0.01);Western blot结果表明方法一所得血清中外泌体标志蛋白CD9、CD63、TSG101表达均明显下降。Exo-free组成骨Staurosporine价格细胞ALP染色阳性面积、矿化结节面积和增殖活性均略低于对照组，而早期与晚期凋亡率略高于对照组，但New bioluminescent pyrophosphate assay上述差异均无显著统计学意义(P>0.05);Exo-free组与对照组骨髓单核细胞均在第5天呈现出明显融合迹象，且两组TRAP染色阳性面积及骨吸收陷窝数量不存在显著统计学差异(P>0.05)。结论 方法一超速离心法(纯胎牛血清，100 000×g,4℃,离心18 h)可高效去除血清外泌体，降低后续实验干扰，且去外泌体血清对成骨、破骨细Belumosudil纯度胞生物活性无明显影响。