目的观察黄芪多糖(astragalus polysaccharidinfectious periodes,APS)对KK-IDN-6556体内Ay小鼠肾脏组织SUR2B、Kir6.1mRNA及ET-1、vWF、NT蛋白表达的调节以及肾脏组织形态的改变,探讨黄芪多糖通过调节SUR2B/Kir6.1亚型K_(ATP)通道进而防治糖尿病KK-Ay小鼠的肾脏损伤机制。方法10～12周龄SPF级雄性KK-Ay小鼠50只、C57BL/6J小鼠10只。适应性喂养1周后,随机监测KK-Ay小鼠血糖以及尿蛋白,当出现尿蛋白,尾尖取血测KK-Ay小鼠随机血糖≥13.9mmol/L糖尿病肾病模型建立。选取C57BL/6J小鼠作为空白组(CT)(n=8),KK-Ay小鼠随机分为模型组(MD)(n=8)、黄芪多糖低剂量组(LAP)(n=8)、黄芪多糖中剂量组(MAP)(n=8)、黄芪多糖高剂量组(HAP)(n=8)、厄贝沙坦组(IS)(n=8),C57BL/6J小鼠给予普通饲料,KK-Ay小鼠给予高脂高糖饲料,黄芪多糖低、中、高剂量组:按100mg、200mg、400mg/kg灌胃;空白组、模型组:灌服相同体积的生理盐水;厄贝沙坦组:按25mg/kg灌服厄贝沙坦。每日1次,连续4周。每日观察小鼠的一般状态,每周检测小鼠的体重、血糖。给药干预4周后,心脏取血。检测小鼠血清胰岛素水平(INS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)以及尿白蛋白(U-ALB)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;通过HE染色光镜观察各组小鼠肾脏组织形态变化;采用免疫组织化学染色方法测定各组小鼠肾组织中内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、血管性血友病因子(von Willebrand Factor,v WF)的表达水平;Western-blot蛋白定量分析小鼠肾组织中NT蛋白的表达水平;RT-PCR检测小鼠肾组织中SUR2B/Kir6.1m RNA的表达水平。结果(1)生化结果显示:干预4周后,较空白组相比,模型组高密度脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均上升,胰岛素水平、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平下降,同时尿白蛋白(U-ALB)、肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平均上升(P<0.01),而与模型组相比厄贝沙坦组、黄芪多糖高剂量组、黄芪多糖中剂量组的胰岛素水平、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)均明显下降,以及尿白蛋白(U-ALB)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平均显著下降(P<0.01)。(2)病理组织形态变化结果显示:给药4周后,模型组小鼠肾小管上皮细胞呈现出脱落、空泡变性状态;肾间质有淋巴细胞和单核细胞浸润,动脉管壁增厚,偶见肾间质的纤维化;肾小球可见炎症细胞浸润,系膜增生。(3)免疫组化结果显示:实验给药4周后,ET-1、vWF在DN小鼠肾脏组织中高表达,与空白组相比,模型组小鼠小鼠肾组织中ET-1、vWF的表达显著升高;与模型组相比,厄贝沙坦组、黄芪多糖高剂量组肾组织中ET-1、v WF水平出现明显下降,有统计学差异(P<0.01)。(4)Western Blot结果显示:发现与空白组小鼠相比,模型组小鼠肾组织中NT蛋白的表达量灰度值明显增高,黄芪多糖高剂量组小鼠肾组织中的NT蛋白表达量较模型Tamoxifen生产商组小鼠出现显著下降,并具有统计学差异(P<0.01)。(5)Real-Time PCR结果显示:与空白组小鼠相比,模型组小鼠肾组织中SUR2B/Kir6.1mRNA表达强度明显减弱;与模型组相比,厄贝沙坦组及黄芪多糖高、中、低剂量组肾组织中SUR2B/Kir6.1m RNA表达强度增高,具有统计学差异(P<0.01)。结论(1)黄芪主要活性提取物APS能够提高DN小鼠胰岛素水平,较好控制糖尿病KK-Ay小鼠体血糖的升高,减少TC、TG、LDL-C水平,增加HDL-C水平,改善糖脂代谢,降低U-ALB、Scr、BUN,改善肾功能。(2)APS可以降低DN小鼠肾组织中ET-1、vWF以及肾脏NT蛋白表达量,改善肾组织血管内皮损伤。(3)DN小鼠肾组织中存在SUR2B/Kir6.1亚型K_(ATP)通道,该通道能够影响DN小鼠肾脏血管内皮受损程度。(4)APS通过对影响SUR2B/Kir6.1亚型K_(ATP)通道,抑制血管内皮损伤,保护肾脏血管内皮功能,降低早期DN小鼠肾脏损伤,延缓DN进展。