目的:在细胞水平、分子水平探究槲皮素对人非小细胞肺癌A549细胞的生长、增殖、凋亡以及铁死亡的影响及其分子调控机制。方法:1.CCK-8(Cell counting kit-8)法摸索实验最佳条件,检测槲皮素对A549细胞增殖能力的影响,探索槲皮素对A549细胞的半数抑制浓度(IC50),并以此为依据确定后续各实验组的药物作用浓度;2.使用平板克隆形成(Colony formation)实验检测细胞集落形成能力并统计克隆形成率;3.使用试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量;4.采用Western blot法检测细胞内铁死亡相关蛋白P53、SLC7A11、GPX4以及线粒体凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyt c的蛋白表达情况;5.利用流式细胞术检测细胞内线粒体活性氧(mtROS)、脂质过氧化物水平及细胞凋亡;6.使用荧光显微镜检测细胞内亚铁离子(Fe2+)的含量;7.平板光度法以及Western blot实验检测联合铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)或ROS生成抑制剂(NAC)后,细胞活力、GSH及铁死亡相关蛋白的表达情况。结果:1.CCK-8实验结果表明,槲皮素体外作用于细胞后,显著抑制A549细胞的生长与增殖,其抑制率具有作用浓度和时间的相关性(P<0.01);2.平板克隆形成实验表明,槲皮素作用于细胞后,A549细胞集落形成的克隆斑点数量显著减少(P<0.01),并具有槲皮素作用浓度的依赖性;3.使用谷胱甘肽检测试剂盒结果显示,槲皮素作用于细胞后,A549细胞内GSH含量降低(P<0.selleckchem01),且具有槲皮素作用浓度的依赖性;4.Western blot实验结果表明,经槲皮素作用后,在A549细胞中,铁死亡相关蛋白P53的表达水平升高(P<0.0Median sternotomy5、0.01),对GPX4、SLC7A11蛋白的表达均有抑制作用(P<0.01);线粒体凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Cyt C、Bcl-2以及Bax的表达升高(P<0.05、0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01);5.流式细胞术结果显示,经槲皮素处理后,A549细胞内mtROS含量增加(P<0.05、0.01)、脂质过氧化物水平上调(P<0.05、0.01)以及细胞凋亡数目显著增加(P<0.01);6.荧光显微镜结果显示,与对照组比较,槲皮素作用于细胞后,A5www.selleck.cn/products/Docetaxel(Taxotere)49细胞内Fe2+含量增加(P<0.01),且具有槲皮素作用浓度的依赖性;7.平板光度法结果显示,相比槲皮素单加组,槲皮素+Ferrostatin-1组与槲皮素+NAC组均可不同程度恢复槲皮素引起的细胞存活率下降(P<0.05、0.001),槲皮素+Ferrostatin-1组可回调细胞内GSH的表达水平(P<0.05)。8.Western blot实验结果表明,相比槲皮素单加组,槲皮素+Ferrostatin-1组可上调GPX4及SLC7A11蛋白表达水平(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制A549细胞活力以及增殖能力,作用机制与诱导铁死亡发生有关,并可导致细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤作用,为探究治疗非小细胞肺癌的作用机制提供新的思路。