沉默CTGF对肝星状细胞凋亡及胞外基质表达的影响

目的 观测沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)HbeAg-positive chronic infection基因对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC＿T6)的生长与凋亡，以及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、CTGF、整合素α5(integrin alpha 5,Itgα5)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ, ColⅠ)表达的影响。方法 将CTGF-shRNA病毒感染HSC＿T6(实验组)。空病毒感染的HSC＿T6(空病毒组)或未感染的HSC＿T6(正常组)作对照。在显微镜下观测被感染HSC＿T6的生长与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, BMN 673 MWGFP)的表达变化；采用CCK-8(cell count kit-8))比色检测被感染HSC＿T6的增殖情况；流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检GSK1349572说明书测被感染HSC＿T6的凋亡情况。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学分别检测PCNA、CTGF、Itgα5和ColⅠ的表达变化。结果 在显微镜下观察到被感染的HSC＿T6高表达GFP。CCK-8结果表明，与对照相比，沉默CTGF基因的HSC＿T6生长显著受抑，72 h开始其差异具统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示，沉默CTGF基因可诱导HSC＿T6凋亡。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学结果证实，沉默CTGF基因可在mRNA及蛋白水平明显下调HSC＿T6的PCNA、CTGF、Itgα5与ColⅠ的表达，与对照比较，差异均具统计学意义(P<0.05)。结论 沉默CTGF基因可下调HSC＿T6的PCNA、CTGF、Itgα5及ColⅠ的表达，抑制HSC＿T6的生长，诱导HSC＿T6凋亡，其机制可能和HSC＿T6的CTGF/Itgα5信号通路受阻紧密相关。