甘草酸通过HIF-1α/VEGF对高糖条件下肾小球系膜细胞炎症因子以及纤维化因子的影响

目的研究甘草酸(Glycyrrhizic acid,GA)是否能够通过影响缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)的表达而抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子以及纤维化因子的表达,从而为糖尿病肾病的治疗提供理论依据。方法体外培养小鼠肾小球系膜细胞系为SV40 MES 13,该实验分为两部分进行研究。第一部分,将SV40 MES 13细胞分为三个组,NG组,HG组,以及HG+GA组,通过显微镜观察不同组别的细胞生长情况以及形态发生的变化,采用Western blot,免疫荧光,Elisa检测IL-1β,IL-6,IL-8,TNF-1α以及α-SMA的表达情况。第二部分,1,将SV40 MES13细胞分为三个组,NG组,HG组,以及HG+GA组,通过Western blot,免疫荧光检测不同组别HIF-1α,VEGF的表达情况。2,将SV40 MES 13细胞分为NG组,HG组,HG+GA组,HG+KC7F2组,HG+GA+KC7F2组,HG+DMOG组,HG+GA+DMOG组,通过CCK-8检测细胞增殖水平,通过Western blot,Elisa检测不同组别IL-1β,IL-6,IL-8,TNF-1α以及α-SMA的表达情况。结果第一部分,1,Western blot,免疫荧光实验表明,与NG组相比,HG组炎症因子相关蛋白IL-1β,TNF-α、IL-6、IL-8在HG组中的表达水平增加(P<0.05),HG组中细胞内IL-1β、TNF-α的荧光强度增加(P<0.05),与HG组相比,HG+GA组炎症因子蛋白表达水平降低(P<0.01),HG+GA组IL-1β,TNF-α、IL-6、IL-8蛋白表达量降低(P<0.01),HG+GA组细胞内IL-1β、TNF-α因子荧光强度均下降(P<0.05)。此外,Elisa与WB的实验结果一致。2,Western blot,免疫荧光实验表明,HG组纤维化因子α-SMA表达水平明显升高(P<0.05),相较于HG组而言,GA明显抑制了纤维化因子α-SMA的表达水平。第二部分1,Western blot,免疫荧光实验表明,GA能够抑制信号通路HIF-1α/VEGF因子的表达水平(P<0.05)。2,体外高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞分别采用2.5,5,7.5μmol/L的HIF-1α的激活剂DMOG干预处理,以及5,15,25μmol/L的HIF-1α抑制剂KC7F2干预处理之后,结果表明DMOG和KC7F2以浓度依赖性的方式分别激活或Roxadustat作用抑制HIF-1α的表达。3,分别采用浓度为7.5μmol/L的激活剂DMgenetic mappingOG,以及25μmol/L的抑制剂KC7F2对小鼠肾小球系膜细胞进行干预处理,CCK8实验表明,HIF-1α的上调促进了小鼠肾小球细胞的增殖,甘草酸能够进一步抑制激活剂DMOG所诱导的细胞增殖水平,甘草酸能够协同抑制剂KC7F2进一步抑制肾小球系膜细胞的增殖水平。Western blot实验结果表明,甘草酸能够抑制DMOG诱导的HIF-1α/VEGF蛋白水平,也能够协同抑制剂KC7F2共同下调HIF-1α/VEGF的Nirogacestat半抑制浓度表达。Western blot,Elisa实验结果表明,通过激活剂DMOG以及抑制剂KC7F2药物对小鼠肾小球系膜细胞干预,甘草酸抑制了激活剂DMOG诱导的小鼠肾小球系膜细胞IL-1β,TNF-α、IL-6、IL-8以及纤维化因子α-SMA的表达,也能协同KC7F2抑制IL-1β,TNF-α、IL-6、IL-8以及纤维化因子α-SMA的表达。结论:1.GA能够抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子以及纤维化因子的表达。2.GA抑制高糖条件下系膜细胞炎症因子以及纤维化因子表达的机制可能与HIF-1α/VEGF信号通路的异常有关,GA可能通过下调HIF-1α的表达而对高糖诱导的系膜细胞发挥保护作用。