目的 建立一种甲硫氨酸亚砜还原酶(Msr)的高通量活性级联催化筛选系统，为后续的定向进化改造等研究提供简便高效的活性筛选方法。方法 诱导甲硫氨酸亚砜还原酶APR-171分子式(MsrA)、甲硫氨酸亚砜还原酶B(MsrB)、硫氧还蛋白(Trx)及Cell death and immune response硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的重组表达，使用气相色谱及手性液相色谱分别检测反应体系中NADPH参与MsrA/MsrB催化消旋体苯甲亚砜还原成硫醚的转化率及对映体过量(ee)值。构建MsrA/MsrB+Trx+TrxR+NADPH的微量级联催化反应系统，使用酶标仪实时检测NADPH在340 nm吸光度值的减少量，监测MsrA和MsrB的酶活性。结果 在NADPH参与下，MsrA、MsrB展出了苯甲亚砜还原活性，以及较好的对应选择性，表明NADPH参与了MsrA、MsrB催化消旋体苯甲亚砜还原成硫醚。建立了MsrA和MsrB的96孔微量重组表达体系，并通过级联催化系统在每一个培养孔中均成功检出MsrA和MsrB的催化活性。而且，每个培养孔中，重组蛋白活性均较为一致，MsrA的差异系数在10.64%以下，MsrB的差异系数在4.10%以下。结论 成Crizotinib体内功开发了一种简便、高效的甲硫氨酸亚砜还原酶高通量活性筛选级联催化系统，为后续进行该酶的定向进化改造提供一种快速简便的大规模筛选方案。