目的：探究葫芦素B（cucurbitacin B， CuB）抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法：采用Cell Counting Kit-8 细胞计数（CCK-8）实验检测不同浓度的CuB（0、40、80、120、购买LY2835219160、200、400、800nmol·L~(-1)）对HuCCT1细胞增殖的影响；采用平板克隆实验检测不同浓度的CuB（5CL 3189520、100、200nmol·L~(-1)）对HuCCT1细胞集落形成能力的影响；采用流式细胞术检测不同浓度的CuB（50、100、200nmol·L~(-1)）对HuCCT1细胞周期的影响；采用可见分光光度法检测不同浓度的CuB（50、100、200nmol·L~(-1)）给药后HuCCT1细胞中糖酵解关键酶己糖激酶（hexokinase， HK）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase， PK）活性，以及葡萄糖消耗量、乳酸生成量和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）生成量的变化；采用蛋白印迹法（Western Blotting）检测CuB对细胞周期相关蛋白、增殖相关蛋白、糖酵解关键蛋白以及Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况的影响。结果：CuB可以抑制HuCCT1细胞增殖，其半数抑制浓度为200 nmol·L~(-1)，并呈时间和剂量依赖性（P<0.05， P<0.01）；CuB可以呈剂量依赖性的抑制HuCCT1细胞集落形成能力（P<0.01）；CuB能够将HuCCT1细胞周期阻滞在G2期（P<0.05， P<0.01）；CuB可以抑制糖酵解关键酶HK、PK的活性，并降低细胞葡萄糖消耗量以及乳酸和ATP的生成量（P<0.05， P<0.01）；Western Blotting结果显示，CuB可以抑制周期相关蛋白Cyclin B_(1)、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen， PCNA）、己糖激酶1（hexokinase 1， HK1）、己糖激酶2（hexokinase 2， HK2）、丙酮酸激酶1（pyrugenetic associationvate kinase 1， PKM1）、丙酮酸激酶2（pyruvate kinase 2， PKM2）、磷酸化蛋白激酶B（phospho-protein kinase B， p-Akt~(Thr308)）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phospho-mammalian target of rapamycin， p-mTOR）以及磷酸化核糖体蛋白（phospho-RPS6， p-RPS6）的蛋白表达水平（P<0.05， P<0.01）。结论：CuB可能通过调控Akt/mTOR通路抑制HuCCT1细胞糖酵解进而影响细胞增殖。