目的 自主研发一种快速简单的轮状病毒核酸检测免核酸提取试剂,再与探针法逆转录环介导等温扩增(Reverse 更多Transcription Loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)体系相结合,建立一种快速、敏感、特异性高selleck VX-765的轮状病毒免核酸提取的探针法RT-LAMP检测方法,用于实时、快速的检测粪便中的轮状病毒(Rotavirus.RoV)。方法①通过正交试验组建3种免核酸试剂组分,分别提取血液标本中乙肝病毒DNA和尿液标本解脲支原体RNA,采用PCR方法检测核酸提取的效果,验证该免核酸提取试剂的敏感性、重复性、准确性。②设计轮状病毒的特异性LAMP引物及拉链式探针,利用正交设计对三对LAMP引物比例、探针比例、酶量、Mg2+浓度、模板量进行优化筛选,建立轮状病毒实时荧光探针法RT-LAMP体系,并对其特异性、灵prokaryotic endosymbionts敏度和重复性进行评价。③将上述的免核酸提取试剂与实时荧光探针法RT-LAMP体系相结合,建立免核酸提取探针法RT-LAMP方法检测轮状病毒,验证其重复性和特异性,并用临床标本比较普通PCR、免核酸提取探针法RT-LAMP检测方法阳性率的差异。结果①三种免核酸提取试剂仅有一种试剂能成功提取核酸,其最优pH为9,组分为:1.5%Tween20、0.5%Triton100、1.5%鼠李糖脂;核酸免提试剂与样本加样量比例为6:1,提取时间为10 min。②轮状病毒探针法RT-LAMP方法的检测下限为10 Copies/μL,未出现非特异性扩增,重复性实验的扩增曲线Ct值平均值变异系数均小于5%。③50例轮状病毒标本基于免核酸提取的探针法检测结果与普通PCR检测结果一致,灵敏度高于临床轮状病毒抗原检测方法。结论①本研究建立的免核酸提取方法可从尿液、血液、粪便等不同类型样本中提取RNA或DNA,且耗时短,提取率高,提取的核酸满足PCR、LAMP等分子生物学检测方法要求。②本研究建立的探针法RT-LAMP方法可以实时检测轮状病毒,且该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。③本研究建立的基于免核酸提取的探针法RT-LAMP方法能作为一种快速、特异、灵敏、可靠的检测轮状病毒方法。