基于RhoA/ROCK1信号通路探讨隔药饼灸调控MMP-9及胶原纤维稳定AS易损斑块的作用机制

目的:通过观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA、ROCK1、MMP-9表达及胶原纤维含量的影响,探究隔药饼灸稳定易损斑块的可能作用机制。方法:70只新西兰大白兔,体质重2±0.2kg,适应性饲养1周,随机分为对照组(10只)和手术组(60只),手术组兔采用高脂饲料+球囊损伤+基因转染+药物诱发的方式制备AS易损斑块兔模型。对MLN4924研究购买兔腹主动脉行球囊损伤术后,将手术组随机平均分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组、抑制剂组五组。分组后,对各组实施相应干预,连续8周。对直接灸组和隔药饼灸组兔分别实施直接灸和隔药饼灸;阿托伐他汀组兔服用阿托伐他汀;抑制剂组兔耳缘静脉注射盐酸法舒地尔;对照组和模型组只捆绑不干预。治疗结束后,对除对照组外所有兔采用Ad5-p53重组载体进行基因转染两周,并在处死前24和48小时注射斑点蝰蛇毒和组胺诱发易损斑块形成。运用ELISA法检测血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量,HE染色观察兔腹主动脉内膜和中膜形态,免疫组化法检测腹主动脉RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达,天狼猩红染色检验腹主动脉胶原纤维含量。结果:1.血清血脂含量:与对照组相比,模型组血清TC、TG、LDL-C含量明显提高(P<0.01),HDL-C含量明显下降(P<0.01)。与模型组相比,直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组和抑制剂组血清TC、TGfoetal immune response、LDL-C含量显著降低(P<0.01,P<0.05),直接灸组、隔药饼灸组和阿托伐他汀组HDL-C含量显著升高(P<0.01,P<0.05)。2.腹主动脉形态:HE染色观察到模型组兔腹主动脉结构紊乱,内膜增生,细胞结构不完整,且斑块内出现少量红细胞;干预后,各治疗组及抑制剂组兔斑块中均未见红细胞,细胞形态较模型组更为完整,内膜中膜界限更为明显。3.腹主动脉中RhoA、ROCK1、MMP-9表达:与对照组相比,模型组RhoA、ROCK1和MMP-9阳性表达显著增加(P<0.01)。与模型组相比,直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组和抑制剂组RhoA和ROCK1阳性表达均显著减少(P<0.01),隔药饼灸组、阿托伐他汀组和抑制剂组MMP-9表达显著下降(P<0.01)。4.腹主动脉中胶原纤维含量:与对照组相比,模型组兔腹主动脉胶原纤维含量大幅减少(P<0.01);与模型组相比,直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组和抑制剂组胶原纤维含量均大幅上升(P<0.01,P<0.05),抑制剂组胶原纤维含量呈上升趋势但无明显差异(P>0.05)。结论:1.隔药饼灸可以有效调节AS易损斑块兔血脂水平。2.隔药饼灸稳定AS易损斑块的作用机制可能与抑制RhoA/ROCselleckchem LapatinibK1和MMP-9表达及增加胶原纤维含量相关。