水资源的污染和养殖密度的增加,导致维氏气单Dolutegravir抑制剂胞菌更易在养殖群体中流行暴发感染。目前不应再依靠使用各种化学药物和抗生素,来解决当前的疾病问题。使用微生态制剂、免疫刺激剂、接种疫苗等措施对于疾病综合治理,在新生态农业模式中更为倡导。因此,接种疫苗作为一种绿色生态防治手段,已成为全球水生动物疾病防治的主流技术。目前,大多数商业水产疫苗仍是灭活疫苗,然而灭活疫苗具有免疫持续时间短、接种剂量大、接种针次多和不良反应严重的缺点。相比于灭活疫苗,减毒活疫苗具有疫苗接种简单、制造成本低、快速交付、免疫剂量低、接种针immediate hypersensitivity次少和免疫力延长等优点。但有时单一减毒疫苗的免疫刺激能力不够强,或者在特定的条件下(如个体免疫功能不全)不足以激发理想的免疫应答,所以通过添加佐剂的方法来提高减毒疫苗的免疫效果。维氏气单胞菌TH0426 hisJ基因缺失株为实验室前期构建完成的菌株,其致病力明显减弱,可作为减毒疫苗候选菌株。因此本研究将hisJ基因缺失株制备为减毒疫苗,同时选择蜂胶提取物、氢氧化铝凝胶、β-葡聚糖和木耳多糖四种佐剂分别与减毒疫苗配伍使用,筛选出可提高减毒疫苗保护效果的佐剂。在制备减毒疫苗前,先验证四种佐剂是否会影响hisJ基因缺失株生长。确定佐剂未有抑菌效果后,将四组佐剂与减毒疫苗配伍使用,设置为氢氧化铝凝胶佐剂组、蜂胶提取物佐剂组、β-葡聚糖佐剂组和木耳多糖佐剂组共四个佐剂试验组,同时设置无佐剂减毒疫苗组与空白对照组。健康鲫鱼经过空养观察两周后,于饲喂的第1d,第14d进行腹腔注射免疫鲫鱼,并在第0d、7d、14d、21d、28d、35d随机挑选一定数量鲫鱼进行采血与采集组织。部分血液加入抗凝剂,制备为抗凝血,用作白细胞吞噬活性试验。其余血液制备成血清,用于血清指标检测;结果发现,所有佐剂组血清中都产生了较高水平的非特异性抗体(Ig M),同时血清中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)、过氧化氢酶(CAT)等活性均呈上升趋势,且各佐剂组血清指标都显著高于减毒疫苗组;采取肝脏、脾脏、肾脏和鳃组织,通过荧光定量PCR技术,检测不同组织中的IL-1β、TNF-α、IL-10及IFN-γ基因的转录水平,证实了接种添加免疫佐剂的减毒疫苗可以促进机体的炎症反应,表明佐剂与减毒疫苗配伍使用可以增强鲫鱼免疫反点击此处应。通过白细胞吞噬活性试验及免疫保护率的结果,进一步验证了各佐剂组对鲫鱼免疫力增强的能力。其中蜂胶提取物佐剂组免疫保护率最高为77.14%,其次是氢氧化铝凝胶佐剂、木耳多糖佐剂和β-葡聚糖佐剂,减毒疫苗组免疫保护率最低为65.71%。综上结果显示:接种了添加蜂胶提取物佐剂减毒疫苗的鲫鱼整体免疫效果最好;氢氧化铝凝胶佐剂减毒疫苗的鲫鱼免疫效果次之;木耳多糖佐剂和β-葡聚糖佐剂免疫效果略低于前两种佐剂,两者不分伯仲,但免疫效果均优于无佐剂减毒疫苗。本研究综合评价了四种佐剂对hisJ基因缺失减毒疫苗的免疫增强作用,有助于为今后的疫苗佐剂研究奠定基础。同时,将进一步促进预防维氏气单胞菌感染的疫苗研究,也为后续开发水生疫苗提供新的理论依据。