目的:皮肤黑色素瘤是皮肤肿瘤中最具有侵袭性的肿瘤之一,预后差,死亡率高,目前黑色素瘤的发生发展机制尚未阐明。铁死亡是一种近年来新发现的细胞死亡形式,广泛参与多种肿瘤的发生、发展和治疗,探索黑色素瘤发生发展中铁死亡的作用及调节机制已经成为研究黑色素瘤恶性进展的热点。葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)作为70k Da热休克分子伴侣(Heat shock protein 70,HSP70)家族的一员,参与细胞内质网(ER)应激过程且与黑色素瘤的进展以及更高的死亡率相关。本研究中,我们探索了GRP78对黑色素瘤铁死亡的作用及调控机制,为黑色素瘤的精准治疗提供了一定理论基础。方法:1、选取我院黑色素痣、皮肤原位黑色素瘤,淋巴结转移黑色素瘤样本,通过免疫组化检测GRP78的表达。2、选取不同黑色素瘤细胞系,使用CCK8检测其在铁死亡诱导下的生存情况,WB检测细胞GRP78蛋白水平,并分析其与铁死亡耐受的相关性。3、通过慢病毒构建干涉/过表达GRP78的黑色素瘤细胞系模型。4、使用CCK8检测干涉/过表达GRP78的黑色素瘤细胞系在铁死亡诱导下的细胞活性。5、在建立好的铁死亡诱导模型中,通过WB检测细胞内铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的水平;使用MDA试剂盒检测细胞内脂质过氧化物积累的水平;使用GSSG/GSH试剂盒检测细胞内GSH、GSSG的水平。6、使用划痕实验、transwell迁移实验检测干涉/过表达GRP78后黑色素瘤细胞的迁移能力变化。结果:1、免疫组化的结果显示,原位皮肤黑色素瘤以及淋巴结转移黑色素瘤组织中均检测到GRP78的表达,且相比较于良性黑色素痣GRP78的水平上升。2、CCK-8结果提示不同黑色素瘤细胞系对铁死亡的敏感性存在差异,进一步通过WB检测发现对铁死亡相对耐受的黑色素瘤A375、UACC257细胞系的G获悉更多RP78蛋白含量高于对铁死亡相对敏感的黑色素瘤451lu、A2058细胞系。3、使用CCK-8检测慢病毒干涉/过表达GRP78的黑色素瘤细胞铁死亡敏感度,发现过表达GRP获悉更多78的黑色素瘤细胞系在铁死亡刺激下细胞存活数量增多,而干涉GRP78则会导致细胞对铁死亡刺激更敏感。4、分别通过MDA试剂盒和GSSG/GSH试剂盒检测铁死亡诱导下的细胞内MDA和GSH水平,结果提示与对照组相比,过表达GRP78的黑色素瘤细胞在受到铁死亡刺激时细胞内GSH下降程度更低、脂质过氧化物含量更少;干涉GRP78的黑色素瘤细胞则表现为脂质过氧化物积累增加和GSH耗竭加剧。5、WB检测发现,黑色素瘤细胞受到铁死亡刺激时GPX4水平下降,过表达GRP78能抑制GPX4蛋白水平的下降;干涉GRP78时则促进GPX4下降。6GABA-Mediated currents、划痕实验和transwell实验的结果表明:干涉GRP78表达的A375细胞系迁移能力下降。结论:1、GRP78在皮肤黑色素瘤中表达显著增高,并与其转移密切相关。2、高表达GRP78的黑色素瘤表现为铁死亡更加耐受。3、GRP78-GPX4途径通过逆转细胞内GSH水平下降,降低细胞脂质过氧化物积累,最终促进黑色素瘤铁死亡耐受。4、抑制黑色素瘤的GRP78表达可以抑制黑色素瘤迁移。