背景与目的:地中海贫血是一组常见的遗传性溶血性疾病,其分子病理学机制是由珠蛋白基因缺陷引起α/β珠蛋白肽链比例失衡,导致无效红细胞生成和慢性溶血性贫血。临床上主要分为α-地贫和β-地贫两种类型,其临床表型具有明显的异质性,严重程度从接近正常到需要终身输血不等。目前,临床上地贫暂无有效治疗手段,控制此病公认的最有效措施是通过人群筛查和对高风险夫妇的胎儿进行产前诊断以避免重型地贫患儿出生。由于引起α-和β-地贫的突变类型多,临床亟需一种检测通量高,检测速度快,操作简便的地贫基因快速分型方法以促进地贫防控工作的开展。本研究是采用MALDI-TOF核酸质谱平台,建立一种同步检测中国人群α-和β-地中海贫血基因突变热点新方法,以满足我国地中海贫血防治人群筛查和分子诊断的需求。方法:以中国人群地中海贫血突变热点(α-地贫:4种缺失突变,3种点突变,β-地贫:21种点突变)为靶点,设计特异性PCR引物扩增HBA2/HBB基因和4种缺失截短序列,并针对每个突变设计核酸质谱单碱基延伸探针。经PCR引物和单碱基延伸探针的有效性和特异性验证,以及检测体系中PCR引物和添加剂等组分的优化后,建立了基于MALDI-TOF质谱的α-和β-地中海贫血突变检测新方法。应用更多此方法检测28例和394例已知基因型样本评价其灵敏度和准确性,并通过对9例和19例已知基因型样本的检测评价批内重复性和批间稳定性,同时收集2835例临床样本使用此方法与传统gap-PCR和RDB平行检测而进行临床应用评价。结果:经反应体系PCR引物和单碱基延伸探针的有效性和特异性验证,以及体系组分优化,建立了中国人群地中海贫血突变热点的MALDI-TOF核酸质谱检测新方法。方法学评价结果显示其灵敏度和准确性均达100%,体系的检测限至15.62 ng/μL gDNA,并具有很好的重复性和稳定性。2835例临床应用评价结果显示本方法与传统方法检测结果一致,说明本方法能对地中海贫血中国人群的突变热点https://www.selleck.cn/products/Cisplatin.html进行快速基因分型,能满足大规模人群筛查和常规分子诊断的需求。结论:本研究建立了一种基于MALDI-TOF核酸质谱的地中海贫血基因分型新方法,可同时对中国人群中28种α-/β-地中海贫血基因突变热点进行快速分析。此方法具有操作简单,成本低,通量高的优点,适用于大规模人群筛查和临床常规分子诊断。同Immunotoxic assay时,本研究的TASP-SBE策略可为基于MALDI-TOF核酸质谱平台的基因检测方法学研发提供借鉴和参考。