研究背景:EZH2(enhancer of zeste homolog 2)是多梳抑制复合物2(PRC2)的三个核心亚单位之一。medicines reconciliation它具有组蛋白甲基转移酶活性,特异性催化目标基因启动子上组蛋白3赖氨酸27(H3K27)甲基化。KDM6A(lysine-specific demethylase 6A)是EZH2的一种重要的拮抗基因,正常情况下二者功能处于动态平衡,当KDM6A缺失或者EZH2过表达的情况下,这种平衡就会被打破,从而可能导致多种肿瘤的发生与发展。现有研究表明,EZH2可能成为多种KDM6A缺陷的肿瘤的治疗靶点。虽然KDM6A和EZH2在多种肿瘤中均得到不同程度的研究,但是在食管鳞状细胞癌(ESCC)中仍然缺乏相关的研究。本项研究将EZH2和KDM6A联合食管鳞状细胞癌的放射治疗进行研究,了解KDM6A在ESCC中的突变情况,以及靶向EZH2对KDM6A缺陷型ESCC放疗敏感性的影响及其机制的初步探讨。研究目的:初步探讨EZH2基因的铁死亡调控效应与KDM6A缺陷型ESCC的放疗敏感性之间的关系研究方法:为了检测人食管鳞状细胞癌细胞株中的KDM6A的突变情况,选用Sanger法测序和WB检测食管鳞癌细胞的KDM6A的突变情况。选择KDM6A缺陷型细胞株KYSE180和KDM6A野生型细胞株TE1,采用慢病毒干扰技术构建EZH2稳定沉默株或用EZH2抑制剂Tazemetostat(EPZ-6438)抑制EZH2。将细胞进行辐射处理后,检测ESCC细胞的EPZ-6438 IC50和G2/M细胞周期阻滞情况,用平板克隆形成实验计数各组的细胞集落数,用线性二次模型(L-Q model)对细胞的存活率进行拟合,计算出放射增敏比(SER),进而定量化沉默EZH2或抑制EZH2对KDM6A缺陷型ESCC细胞的放射敏感性的影响。免疫荧光检测γ-H2AX和53BP1在各组细胞中的表达,比较各组细胞DNA的损伤情况,分析干扰或抑制EZH2基因对辐射引起的KDM6A缺陷型ESCC细胞的DNA损伤的影响。差异分析和富集分析筛选沉默EZH2对KDM6A缺陷型ESCC的放射增敏性的调控通路,检测前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)在各组中的水平,观察干扰或抑制EZH2对KDM6A缺陷型细胞株PTGS2的影响。研究结果:Western blot检测发现KDM6A在食管鳞状细胞癌中出现突变,EPZ-6438IC50的检测发现,KDM6A野生型ESCC细胞株较缺陷型ESCC细胞株对EPZ-6438表现出更高的抗性。G2/M细胞周期阻滞测定和平板克隆实验结果显示,干扰EZH2或抑制剂抑制EZH2可以明显增加KDM6A缺陷型细胞株KYSE180的放疗敏感性,但是对TE1细胞株的放射敏感性的影响较弱。免疫荧光染色检测γ-H2AX和53BP1的实验结果证明了相对KDM6A野生型细胞株TE1,干扰或抑制EZH2可以明显增加辐射诱导的KYSE180细胞株的DNA损伤。差异和富集分析筛选结果得出,沉默EZH2增加KDM6A缺陷型ESCC细胞KYSE180的放射敏感性是通过激活铁死亡通路来调控的。通过检测细胞中PTGS2,发现抑制或干扰EZH2可以增加KDM6A缺陷型细胞株中的PTGS2水平,但是对野生型的细胞株则没有影响。研究结论:KDM6A在食管鳞状细胞癌细Laduviglusib试剂胞中存在突变,沉默EZH2或抑制EZH2可以明显增加KDM6A突变型ESCC细胞的放射敏感性,并且可以增D-Lin-MC3-DMA分子量强辐射诱导的铁死亡通路的激活,初步证实抑制EZH2增加KDM6A缺陷型ESCC细胞的放疗敏感性是通过增加辐射诱导的铁死亡效应来实现的。