落实天然橡胶有效供给和质量提升,优先保障关键领域用胶安全水平是农垦天然橡胶产业发展的重要工作之一。天然橡胶是保障国家安全的战略物资,世界上98%以上的天然橡胶来源于巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)。橡胶树红根病是我国橡胶树最重要的根部病害,目前,生产上种植品种缺乏抗性,抗病机制不明确,限制了对该病害的预测预报以及防治措施精准实施。近年来,高通量测序技术不断在发展,越来越多的研究从微生态视角探究橡胶树红根病菌侵染的驱动因素。本研究通过分析在橡胶树红根病菌侵染过程中起主要作用的细胞壁降解酶类型及其对橡胶树根部的侵染过程,研究细胞壁相关酶活性及相关基因表达变化,确定细胞壁降解酶是否为橡胶树红根病菌主要的致病生化因子,明确起关GSK J4体内实验剂量键性作用的细胞壁降解酶,为橡胶树红根病的防控和抗红根病育种奠定理论基础。主要结果如下:1.对中国热带农业科学院试验场三队的患病橡胶树树根采样,进行真菌分离,分离出一株病原真菌,对病原真菌进行形态特征、致病性判定,并测定病原菌的r DNA-ITS序列进行比对鉴定,从而确定导致橡胶树根部感病,最终死亡的病原真菌,是橡胶树红根病真菌(Ganoderma pseudoferreum),为灵芝属相关真菌。橡胶树红根病菌侵染橡胶树组培苗后第3 d可见根部表皮外层细胞已被破坏,第7 d表皮Trichostatin A配制细胞均被菌体结构占据。2.利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法和紫外分光光度计法检测橡胶树红根病菌侵染过程中细胞壁降解酶活性的变化。通过测定酶处理后橡胶树根部渗透性还原糖和相对电导率以及对根系活力的影响,分析细胞壁降解酶对橡胶树根部的损伤致病作用。在检测的细胞壁降解酶中,中性木聚糖酶活性最高,β-葡萄糖苷酶次之,中性蛋白酶、果胶甲基反式消除酶等其他酶活性较低。橡胶红根病菌产生的细胞壁降解酶单一酶和混合酶均可导致橡胶树根组织明显受损,并影响其根系活力。3.利用RT-PCR从橡胶树中红根病菌中克隆得到纤维素酶Gp TR6079全长adult medulloblastoma序列为1302 bp,编码433个氨基酸,纤维素酶Gp TR6079蛋白存在信号肽的概率为0.9945,信号肽位置在GAA和AS之间。β-葡萄糖苷酶Gp TR894全长序列为1563 bp,编码520个氨基酸,β-葡萄糖苷酶Gp TR894蛋白存在信号肽的概率为0.9483,信号肽位置在ARG和AY之间。木聚糖酶Gp TR1774全长序列为780 bp,编码259个氨基酸。采用qRT-PCR分析红根病菌侵染橡胶树组培苗材料后纤维素酶GpTR6079、β-葡萄糖苷酶Gp TR894、木聚糖酶Gp TR1774基因相对表达量的变化。分别以橡胶树组培苗材料的0 d为对照,q RT-PCR显示接种橡胶树红根病菌后纤维素酶Gp TR6079、β-葡萄糖苷酶Gp TR894、木聚糖酶Gp TR1774表达量整体趋势为先上升后下降,侵染第3 d和4 d表达量极显著上升,4 d达到最高水平。