由SARS-CoV-2引起的COVID-19疫情席卷全球,给全世界人民的正常生活和全球经济带来了严重影响。国外防疫政策的放开将巨大的压力导向了中国,鉴于国内的人口体量庞大,贸然采取放开式的防疫政策必然会对医疗体系造成巨大冲击,目前“动态清零”总方针最适合中国国情。除了“外防输入”外,国内采取“防反弹”需要对传染源进行高精度定位和对感染人群精准筛选。构建快速、灵敏度高、特异性好的核酸检测方法意义重大。核酸检测作为病原体感染诊断的金标准,是疫情防控中重要环节,承担着巨大的社会责任,但目前常用的qPCR核酸检测法需要在具有资历的实验室经过相关技术人员使用高精密仪器才能完成;另外,离心柱法作为核酸检测过程中所采用的核酸前处理方法,存在试剂消耗量大,人工成本高和耗费时间长等问题。本文首先构建了简易式核酸提取装置,该装置一次可同时处理16个样本,并优化前处理步骤,且无需洗脱,将前处理时间缩短至10 min。其次构建基于免疫磁珠法的比色法RT-LAMP核酸恒温检测方法,无需借助专业仪器。添加57.5μg免疫磁珠至600μL待测样本中,仅需10 min即可富集病毒颗粒;随后将磁珠分散于扩增反应体系中直接反应,检测GX/P2V的检测限可以达到2.7×10~3 copies/mL。使用SARS-CoV-2 RNA标准品,对比了SARS、MERS、HCoV-NL63、GX/P2V,没有出现交叉反应,特异性高。建立了免提取可视化快速的病原体检测方法,未来可推向POCT领域,拓展核酸检测应用领域。最后探究基于粘性末端介导的链置换可视化核酸检测方法。构建Genetic and inherited disorders三明治结构金纳米颗粒AM-2282试剂链置换探针(SNC Probe),当体系中存在目标物ssDNA时,在常温下就能够把SNC Probe中的金纳米颗粒置换下来,磁分离后金纳米颗粒分散于上清液中显示粉红色,实现对核酸的可视化检测。使用合成的110 nt SARS-CoV-2的ssDNA进行JQ1小鼠核酸可视化检测可达到16 nM的检测限,使用Nanodrop One可将检测限提高至5 nM。基于PCR扩增的链置换反应可以达到400 aM的检测限。对比SARS、MERS、HCoV-HKU1、HCoV-NL63,未出现交叉反应,特异性高。基于粘性末端介导的链置换可视化核酸检测方法,未来可结合恒温扩增技术进行可视化快速核酸检测,无需高精密仪器即可应用于家庭或者社区医院等场景。