非洲猪瘟病毒p34蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪或野猪而引起的一种高度接触性传染病。ASFV编码超过150种蛋白，其中大多数蛋白的功能有待鉴定。本研究旨在表达ASFV p34蛋白，并制备其单克隆抗体，为p34蛋白的功能研究提供材料。首先构建了重组原核表达质粒pET-21a-p34，将质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IAlpelisib IC50PTG诱导后，通过SDS-PAGE以及Western blot鉴定，结果显示，得到了可溶性表达的His-p34重组蛋白。将纯化的蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合以及ELISA筛选，获得了一株能够稳定分泌p34蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经Western blot鉴定，该抗体能够特异性识别通过转染质粒过表达的外源p34蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的内源p34蛋白；免疫荧光试验表明，外源转染以及内源表达的p34蛋白均能被特异bioactive dyes性标记；免疫沉淀（IP）试验结果显示，该单克隆抗体能够特异性的结合HEK293T细胞中外源表达Dorsomorphin纯度的p34蛋白以及ASFV感染PAMs中内源表达的p34蛋白。综上所述，本研究成功制备了p34蛋白的单克隆抗体，该抗体可以用于内源性p34蛋白的鉴定，为该蛋白的功能研究奠定了基础。