目的Preformed Metal Crown:免疫抑制肿瘤微环境为胆管癌转移创造有利条件,与预后不良密切相关。本文基于前期基础,探究a PKC-ι诱导胆管癌CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞变化及免疫抑制的相关机制。方法:利用单细胞测序数据分析胆管癌组织中CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞的分布(包括细胞亚群和组织分布)及功能,并通过多重免疫组化染色和流式实验验证上述分析结果。利用CFSE稀释实验检测a PKC-ι过表达胆管癌细胞诱导的CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞的免疫抑制功能。通过体外实验检测a PKC-ι对胆管癌细胞HIF-1α/TGF-β1信号通路的调控作用。利用流式检测HIF-1α/TGF-β1在a PKC-ι诱导的胆管癌CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞数目变化及免疫抑制中的作用。收集临床标本,验证a PKC-ι、HIF-1α与TGF-β1之间表达关联及其与胆管癌患者预后的相关性。利用IP实验、蛋白降解实验和泛素化实验探究a PKC-ι影响HIF-1α表达的具体调控机制,并通过体内外实验验证该机制对a PKC-ι/HIF-1α/TGF-β1信号轴的调控作用,及其对共培养体系中CD4~+CD25~-FOXP3~+T细Entinostat临床试验胞数目与免疫抑制因子表达变化的影响。结果:胆管癌组织CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞数目增多,且高表达CTLA4、BATF和TNFRSF4/9/18等基因,与调节性T细胞的分布及功能相似。a PKC-ι过表达胆管癌细胞诱导的CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞具有免疫抑制功能。在胆管癌细胞内a PKC-ι与HIF-1α结合,经去泛素化途径诱导HIF-1α蛋白累积入核并促进HIF-1下游靶基因TGF-β1表达,进而诱导胆管癌CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞增多,促进肿瘤免疫抑制。结论:(1)胆管癌组织中CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞比例较癌旁组织显著增加,且免疫抑制相关基因表达上调。(2)a PKC-ι过表达胆管癌细胞诱导的CD4~+CD25~-FOXRSL3P3~+T细胞具有免疫抑制功能。(3)a PKC-ι经去泛素化途径调控HIF-1α/TGF-β1信号通路,诱导CD4~+CD25~-FOXP3~+T细胞增多,促进胆管癌免疫抑制。(4)a PKC-ι、HIF-1α、TGF-β1在胆管癌组织中表达上调并呈正相关,与预后不良密切相关。