PDK1信号通路

为明确蓝星睡莲(Nymphaea colorata)蓝色、白色两种花色花瓣在不同发育时期的类黄酮物质含量、成分及其代谢途径中的关键基因，本研究采用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技术，分析了蓝星睡莲5个发育时期花瓣的花青苷和黄酮醇苷含量和成分.结果表明，蓝、白花瓣中类黄酮含量差异明显，白花花瓣花青苷和黄酮醇苷含量均保持在较低水平，尤其是在S4,S5时期与蓝花达到了显著性差异，可能是造成蓝白花色差异的物质成因.在蓝星睡莲花瓣中，两种花色花瓣类黄酮成分相同，共鉴定出3种花青苷selleck NMR和11种黄酮醇苷.花青苷为飞燕草素-3-O-β-半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷)和飞燕草素-3′-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷);黄酮醇苷主要有槲皮素3-O-半乳糖苷、杨梅素3-O-α-BelnacasanL-(3″-O-丙二酰)-Immunomodulatory action鼠李糖苷、杨梅素3-O-α-L-鼠李糖甘、杨梅素3-O-α-L-(3″-O-乙酰)-鼠李糖苷、槲皮素3-O-α-L-(3″-O-丙二酰)-鼠李糖苷等.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术进一步分析了类黄酮代谢途径相关基因在两种花色花瓣中的转录表达情况，结果表明，在蓝花花瓣5个发育时期，类黄酮3′5′-羟化酶基因(F3′5′H)、黄酮醇合成酶基因(FLS)、二氢黄酮醇4-还原酶基因(DFR)的转录表达变化与花青苷积累趋势一致，推测其可能是蓝色花瓣花青苷积累的关键结构基因；F3′5′H和糖基转移酶基因(GT)在蓝花中的表达量均明显高于白花，推测其是造成蓝白花色差异的重要基因.本研究为进一步解析蓝星睡莲花色形成分子机理提供了新的证据，为睡莲蓝色花分子育种提供了参考.

盐酸小檗碱具有良好的抗炎活性,但口服吸收差,注射给药会引起严重的副作用。脂质体等纳米递送系统可靶向递送药物,若选择合适的靶向配体与盐酸小Metabolism抑制剂檗碱脂质体偶联,可以实现靶向递送,达到减少毒性,提高抗炎效果的作用。由于炎症部位的血管内皮细胞会高表达P-选择素,低分子量岩藻多糖对P-选择素有良好的结合能力,将盐酸小檗碱包进脂质体中,再用低分子量岩藻多糖修饰脂质体,使脂质体能特异性的与能表达P-选择素的活化血管内皮细胞结合,可以实现盐酸小檗碱的炎症靶向递送。本研究鉴于P-选择素与岩藻多糖的特异性结合,拟制备低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,并对其被摄取量、摄取方式、全身分布以及抗炎作用展开研究,评价盐酸小檗碱炎症靶向递送作用。本研究主要内容如下。1.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备主要包括:盐酸小檗碱含量测定方法的建立、盐酸小檗碱脂质体包封率方法的建立、盐酸小檗碱脂质体处方优化、脂质体的表征。结果显示:(1)高效液相色谱法检测盐酸小檗碱含量在浓度范围为0.25-50μg/m L时,线性关系良好,回归曲线方程为Y=33.34X–7.939,R~2=0.9994,并且稳定性符合标准;(2)采用葡聚糖凝胶柱法分离盐酸小檗碱脂质体与未包封的盐酸小檗碱,两者出峰间隔为3 min,且回收率符合标准,此方法适合盐酸小檗碱脂质体的分离,进而可以计算包封率;(3)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的最佳处方与工艺:磷脂浓度10 mg/m L、磷脂胆固醇比1:1、磷脂药物比35:1、水化p H=6.0。制备过程:将膜材按照比例溶解在10 m L氯仿中,40℃旋转蒸发彻底除去溶剂,随后加入10 m L p H=6.0的PBS溶液,水化30 min,将洗下的膜材在冰水浴的条件下,用探头超声条件为400 W超声2 s,间隔2BMS-907351半抑制浓度 s,超声10 min,得到的脂质体经0.22μm微孔滤膜过滤后,用脂质体挤出器将脂质体反复挤出通过100 nm的聚碳酸酯膜,然后使用Na OH调节脂质体外水相p H到7,加入低分子量岩藻多糖,室温反应过夜,最终得到黄色半透明低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体;(4)最优处方制备的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体粒径为104.13±1.18 nm,Zeta电位为-12.2±0.46 m V,包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。2.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体外靶向人脐静脉血管内皮细胞的作用研究用LPS激活人脐静脉血管内皮细胞,评价低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的细胞毒性、被摄取量、被摄取方式以及抗炎效果。结果显示:(1)≤80μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对活化的人脐静脉血管内皮细胞活性无显著影响(P>0.05);(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体被活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取量是未修饰的盐酸小檗碱脂质体的1.5倍;(3)活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的方式主要通过小窝蛋白和Medium Frequency网格蛋白介导的内吞作用,且需要能量;(4)以盐酸小檗碱计,10μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著(P<0.01)抑制活化的人脐静脉血管内皮细胞产生IL-1β和IL-6。以上结果表明,以盐酸小檗碱计,低于80μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对活化的血管内皮细胞无明显细胞毒性,10μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体具有良好的抗炎能力,效果优于同浓度的游离盐酸小檗碱或未被修饰的盐酸小檗碱脂质体,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能与P-选择素结合,然后被活化的人脐静脉血管内皮细胞主动摄取,具有炎症靶向潜力。3.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体内炎症靶向作用研究研究了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在大鼠足肿胀模型中,在炎症部位与各个脏器中分布、体内抗炎效果以及组织病理变化影响。结果显示:(1)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在肿胀的右足中的浓度高于未修饰的盐酸小檗碱的浓度,也高于其在无炎症的左足中的浓度,而低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体与未修饰的脂质体在各脏器中分布无显著差别;(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著缓解(P<0.01)大鼠足肿胀模型中血浆中白细胞计数及单核细胞计数升高,IL-1β与IL-6显著升高,足趾重量增加等趋势;(3)3 mg/kg的游离盐酸小檗碱或盐酸小檗碱脂质体尾静脉注射给药7 d后,大鼠心脏出现少量炎性细胞浸润,肝脏出现局部坏死,肝细胞发生脂肪变性,而注射相同浓度低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的大鼠各脏器无明显病变。以上结果表明,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对大鼠足肿胀炎症模型与未修饰的脂质体或游离盐酸小檗碱相比,能提高抗炎效果,具有靶向作用。综上所述,本研究制备了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,获得了最优处方和制备工艺,其包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。在体外,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能通过与血管内皮细胞上P-选择素特异性结合并被内吞,提高了摄取量、逃避溶酶体降解;在体内,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体通过靶向炎症部位血管内皮细胞提高炎症部位药物浓度,降低非炎症部位脏器浓度,最终提高盐酸小檗碱抗炎效果,发挥炎症靶向作用。

脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是全世界意外死亡的重要原因之一。即使是幸存者,也可能存在严重的神经功能障碍,造成巨额医疗费用和沉重的社会负担。脑基底节区富含白质纤维束,而脑出血最可能发生在基底节区。因此,脑出血后常常发生白质损伤(White matter injury,WMI),导致神经功能障碍和长期不良预后。然而,到目前为止,解决这一问题的有效策略仍然有限。研究表明,神经炎症发生在脑出血的早期,是导致WMI的主要因素之一。血红蛋白降解引起的炎症因子释放和小胶质细胞活化是导致WMI的重要原因。此外,炎症引起的脑血屏障损伤也会导致巨噬细胞浸润和脑水肿,从而加剧炎症反应。然而,对由炎症反应引起的WMI的干预措施同样是有限的。本文中我们发现了钾通道Kv1.3可能是改善脑出血后神经炎症,促进预后的关键靶点。早期文献报道,钾离子通道Kv1.3可能参与了脑出血后的炎症反应,使用Kv1.3的特异性阻断剂5-(4-苯氧基丁氧基)补骨脂素(PAP-1)能够引发炎症抑制效应,机制可能与血肿周小胶质细胞从M1亚型向M2亚型的转变有关。Kv1.3阻断尚未在ICH早期神经炎症小鼠模型中进行过测试,而抑制Kv1.3可能是促进ICH小鼠预后的潜在靶点。此外,血红蛋白富含铁。随着ICH介导的神经炎症进展到中后期,血红蛋白会逐渐降解,血红蛋白中的铁由是被释放,这种释放出的二价铁离子能够通过芬顿反应诱导活性氧(ROS)的产生,后者将导致髓鞘的降解。同时,血红蛋白释放的铁也可以成为脂质过氧化酶的组成部分,导致少突胶质细胞铁死亡和WMI。因此,靶向ICH后血肿周铁及其引发的氧化应激反应可能是减轻小鼠WMI的新方法。在本文中,我们发现了神经外科常用药右旋普拉克索(DPX)可能会减少白质纤维束铁介导的过氧化损伤及少突胶质细胞的铁死亡并改善WMI。这是一种用于不宁腿综合征,以及帕金森的辅助用药,已经被FDA批准上市,但在脑出血领域从未有报道使用。从机理上讲,DPX可能通过减轻铁沉积,ROS产生,增加谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁死亡抑制蛋白(FSP1)的表达而发挥作用。一.钾离子通道Kv1.3阻断在小鼠脑出血模型早期通过抑制神经炎症减轻WMI。目的探讨ICH后神经炎症引起的WMI以及PAP-1阻断Kv1.3的作用。方法通过向C57BL/6J小鼠(9-10周龄,24-26g)的基底节注射15μL血液建立ICH模型。然后将小鼠随机分为三组:ShamPacemaker pocket infection、ICH和ICH+PAP-1组。使用实时聚合物链反应(PCR)(n=3)、蛋白质印迹(WB)(n=3)和免疫荧光(IF)(n=3)检测ICH引起的Kv1.3随时间的表达变化情况。采用开放场试验(OFT)(n=8)、巴氏小鼠评分(BMS)(n=8)和小鼠体重变化(n=8)进行行为学评估。WB(n=3)、IF(n=3)和透射电子显微镜(TEM)(n=3)用于检测白质损伤。PCR、WB和酶Mirdametinib化学结构联免疫吸附试验(ELISA)(n=3)用于检测炎症因子。PCR(n=3)、WB(n=3)和IF(n=3)用于评估M1-M2小胶质细胞组成。结果1.与Sham组相比,ICH D3血肿周围Kv1.3表达显著增加。2.ICH后小鼠体重下降,尤其在D1-D3。Kv1.3阻断剂PAP-1缓解了体重下降。与Sham组相比,ICH组小鼠的BMS评分在D3时降低。而与ICH组相比,ICH+PAP-1组的小鼠BMS有所增加。OFT也具有相同的变化趋势,从不同剂量组的结果来看,40 mg/kg/d的PAP-1效果最佳。3.ICH组D3白质纤维束损伤明显,使用PAP-1 40mg/kg/d可减轻损伤。IF和WB均显示ICH中MBP表达减少,而ICH+PAP-1组与ICH组相比MBP表达增加。与Sham组相比,TEM D3脱髓鞘现象明显,G-比率显著增加,PAP-1在脱髓鞘和G-比率方面显示出强有力的保护作用。4.WB、PCR和ELISA实验均证实,相比于Sham组,ICH组小鼠脑血肿周炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)表达增加,而PAP-1治疗组表达相对减少。5.相比于Sham组,ICH组抗炎因子如白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)表达增加,但在ICH+PAP-1组中,这些分子表达更高。6.与Sham组相比,ICH后血肿周围M1样小胶质细胞的数量增加,而PAP-1的应用减少了M1样小胶质细胞。7.与Sham组相比,ICH后血肿周围M2样小胶质细胞的数量增加,而PAP-1的应用使M2样小胶质细胞的数量甚至高于ICH组。8.ICH后NF-κB信号被激活,体现为p65和p50的磷酸化增多,这些l磷酸化可以通过使用PAP-1来消除。结论使用Kv1.3阻断剂PAP-1能够通过抑制NF-κB信号通路促进小胶质细胞极化为M2样小胶质细胞,减少了促炎细胞因子的积累,并上调了抗炎和神经营养因子的水平。以上药理作用最终缓解了WMI。二.普拉克索通过抑制小鼠脑出血模型中晚期铁介导的白质纤维束过氧化损伤促进预后目的检测右旋普拉克索在小鼠脑出血模型中的白质保护和铁介导的氧化应激抑制作用。方法小鼠生存率(n=10)和体重变化(n=8)用于DPX的效果和毒性评估。行为学测试,如BMS(n=8)、OFT(n=8)、衡量行走(BWT)(n=8)和前肢力量(n=8),用于评估是否服用DPX的预后差异。WB(n=3)、IF(n=3)、TEM(n=3)和苏木精伊红(HE)染色(n=3)用于白质纤维束损伤评估。Perl’s染色(n=3)和DHE染色(n=3)用于评估血肿周围的铁离子和自由基水平。TEM(n=3)用于寻找铁死亡特征性线粒体。WB(n=3)、IF(n=3)用于检测ICH后铁介导氧化应激分子机制。结果1.ICH组小鼠在BMS中的行为状况、OFT中小鼠的平均速度、前肢力量和BWT表现均比Sham组显著降低。DPX各剂量组均能改善小鼠的行为失能。5mg/kg/d的DPX在各剂量组中显示出最好的结果。2.相比于selleckchem diABZI STING agonistSham组,ICH组生存率和体重显著下降。ICH+DPX组与ICH组相比生存率和体重有所增加。3.ICH组白质损伤明显,MBP表达减少,血肿大小明显,脱髓鞘增加。相比于ICH组,DPX在ICH的D7能够发挥保护作用。4.ICH组第7天铁和ROS均增加。与ICH组相比,DP减轻了ICH D7上的铁和ROS积累。5.与Sham组相比,ICH组的线粒体皱缩百分比在D7时显著增加,DPX减少了收缩的线粒体。6.与Sham组相比,ICH D7时铁介导氧化应激相关基因的表达增加。DPX降低了铁介导氧化应激相关基因的表达结论ICH可引起长期WMI,在ICH的中晚期,白质纤维束可发生铁介导的氧化应激损伤。5mg/kg/d的DPX具有保护此种损伤的作用。机制可能与稳定线粒体膜电位,提高抗氧化分子GPX4和FSP1表达有关。

防风(Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk)为伞形科防风属多年生草本植物,是我国东北大宗道地药材之一。由于施肥技术等相关基础研究不足,目前防风种植栽培中存在多种药肥盲施、滥施、施肥技术缺乏等问题,对药材质量、产量都是严峻的挑战。为保障道地产区药材种植业科学合理发展,带动药农脱贫致富,探索兼顾药材种植、资源与环境安全的可持续发展途径,本研究以吉林省白城关防风自然分布地区为主要试验地,开展了土壤供肥能力、防风需肥规律、化肥与有机肥配施与减施等施肥技术研究,主要研究结果如下:1.分析白城地区防风立地土壤供肥能力,检测结果表明该区内土壤呈碱性,交换性盐基离子含量高,有机质含量较低,氮、磷、钾含量空间分布变异程度大(变异系数49.86-126.85%)。以全国第二次土壤普查土壤肥力标准为参考,各样地中土壤有机质含量符合五等地标准的占比为100%;碱解氮含量符合四等地、五等地标准的占比分别为35.00%、65.00%;有效磷含量符合一、二、三等地标准的占比分别为50.00%、45.00%、5.00%;速效钾含量符合一、二、三等地标准的占比分别为65.00%、10.00%、25.00%,表现出磷、钾含量丰富,而有机质与氮素含量不足的特点。采用主成分分析对该区防风立地土壤进行综合分析,结果显示土壤质量指数SQI变化范围介于0.27～0.52,以三、四等地为主。2.分析不同年生防风生长动态与需肥规律,结果显示出苗后100-130d、410-490d分别是一、二年生防风干物质积累高峰期。出苗后100 d、440 d(8月中下旬),一、二年生防风地下部分干物质积累量超过地上部分,同时防风AY-22989中氮磷钾含量均迅速增加,表明该时期防风生长中心发生了转移,植株内氮磷钾进入了旺盛积累期。从需肥量来看,一年生防风氮磷钾需求量呈现出为钾>磷>氮。需肥量分别为:N 230.68 kg/hm~2,P_2O_5240.34 kg/hm~2,K_2O 257.90 kg/hm~2;二年生防风氮磷钾需求量呈现出为氮>磷>钾。需肥量分别为:N 484.05 kg/hm~2,P_2O_5400.63 kg/hm~2,K_2O 159.74 kg/hm~2。3.采用农业部推荐的3414施肥方案探究氮磷钾配施对防风生长状况及土壤质量的影响。结果表明合理施用氮、磷、钾肥有利于防风增产提质。其中,处理N_2P_3K_2、N_2P_2K_2是取得最高产量、最优Biogas yield质量的施肥组合。防风对氮肥依存度最大,其次为钾肥、磷肥。采用产量频率分析法,计算出防风施肥优化产量y=1463.16 kg/hm~2,优化后氮肥(N)、磷肥(P_2O_5)、钾肥(K_2O)推荐施肥量分别为75.77～134.35 kg/hm~2、176.56～377.79 kg/hm~2、73.49～140.97 kg/hm~2,肥料施肥配比为N:P_2O_5:K_2O=1:2.33～2.81:0.97～1.05。4.化肥减施、有机肥替代对防风产量、品质与土壤质量的影响研究表明,化肥减施YHT15处理下防风增产44.43%,显著高于有机肥替代模式。化肥减施与有机肥替代的2种施肥模式下防风药材质量均高于中国药典标准,增施生物质炭有助于药材质量的提高。CRITIC法分析显示药材品质综合得分较高的施肥处理为YHT15、YH30、YH15。2种施肥模式下土壤质量均高于对照,土壤质量综合得分较高的施肥处理为YHT15、YHT3Puromycin临床试验0、YHT。适宜吉林省西部白城地区发展防风种植的具体施肥方式为:基肥为过磷酸钙361 kg/hm~2+硫酸钾110 kg/hm~2+有机肥82 kg/hm~2+稻壳生物质炭10000 kg/hm~2;以尿素追肥3次,分别为29 kg/hm~2、29 kg/hm~2、20 kg/hm~2。5.对适宜防风生长的有机肥类型进行筛选,结果表明施入不同种类有机肥后,防风根干重增加6.67%～145.33%,其中有机鸡粪肥处理下防风根干重增长量达到1.84 g,药效成分达到最大值0.79%,高于《中国药典》标准的3.29倍;施用不同种类有机肥可显著降低土壤容重、增加土壤孔隙度、提高土壤肥力及土壤酶活性均有不同程度的提高。综合考虑产量、质量及土壤三方面的影响效果,采用鸡粪有机肥与化肥配施可显著提高栽培防风产量、质量以及土壤肥力水平。

目的:于免疫学角度探讨赖氨酰氧化酶2(LOXL2)基因对宫颈癌发生发展及预后的影响和机制。方法:将从UCSC Xena下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库中宫颈癌的临床数据和RNA-seq基因表达数据,进行LOXL2与宫颈癌生存曲线差异分析、预后分析评价以及发生发展相关关系分析。从基因表达总表(GEO)数据库中获取宫颈癌的微阵列数据(GSE63514和GSE9750)进行宫颈癌中LOXL2表达水平分析。将从TIMER2.0下载TCGA样本的免疫细胞浸润评估,通过使用TIMER、MCPCOUNTRE、CIBERSORT、CIBERSORT-ABS、QUANTISEQ、EPIC和XCELL计算的TCGA样本的免疫细胞浸润丰度。从GEO获取单细胞数据,进行LOXL2单细胞水平相关分析及细胞间通讯分析。从Cell Miner数据库获取药物数据进行LOXL2与药物敏感性分析。结果:LOXL2在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织且差异具有统计学意义(P=0.00042,P=1.3e-06),LOXL2高表达的患者总生存率和疾病特异性生存率较差具有统计学差异Gel Doc Systems(P=0.00032,P=0.0051),单因素及多因素Cox回归分析LOXL2是宫颈癌患者总生存率独立的预后因素(HR=2.36,P=0.001;HR=2.51,P=0.002)。LOXL2表达水平与宫颈癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织学分级、淋巴血管侵犯指标、远处转移和区域淋巴结受累情况等均无显著差异(P>0.05)。基因集富集分析(GSEA)提示LOXL2基因的表达可能与细胞外基质(ECM)的形成、铁死亡相关代谢途径、免疫相关通路等有关。此外,LOXL2的表达与M0型巨噬细胞https://www.selleck.cn/products/BAY-73-4506.html、CD8+T细胞等免疫相关细胞以及IDO1等免疫检查点之间存在显著相关性。单细胞分析LOXL2主要高表达于肿瘤相关成纤维细胞(CAFs),细胞间通讯分析CAFs可能通过特异的ANXA1-FPR1介导巨噬细胞浸润,通过CXCL12-CXselleck ElexacaftorCR4介导CD8~+T细胞及NK细胞的浸润。LOXL2与他莫昔芬等化疗药物的半数最大抑制浓度(IC50)相关具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.LOXL2在宫颈癌组织中高表达;2.LOXL2表达水平与宫颈癌患者总生存率和疾病特异性生存率具有相关性;3.LOXL2是宫颈癌患者总生存率的独立预后因素;4.LOXL2表达水平与宫颈癌患者临床病理因素无相关性;5.LOXL2与宫颈癌中细胞外基质(ECM)的形成、铁死亡相关代谢途径、免疫相关通路等具有相关性;6.LOXL2与M0型巨噬细胞、CD8~+T等免疫细胞具有相关性并参与宫颈癌肿瘤微环境的调节;7.LOXL2与化疗药物的敏感性具有相关性。

目的:用球囊对大鼠的颈总动脉进行均匀扩张,建立扩张损伤后的血管模型,再对模型大鼠给予程序性死亡-1(Programmed death-1,PD-1)抗体,观察大鼠颈总动脉内膜与单纯模型组血管内膜的变化,研究PD-1抗体对大鼠颈总动脉球囊损伤后,血管内膜增生的早期防治作用及其原理。方法:选取36只SD大鼠(体重300g左右)。采用随机数表法分为3组:假手术组(Sham,n=12)、损伤组(Model,n=12)、PD-1抗体+损伤组(PD-1,n=12)。损伤组及PD-1抗体+损伤组利用球囊建立颈动脉损伤后再狭窄模型;假手术组除无Biomass bottom ash扩张球囊并抽拉损伤外,其余处理与其他两组一致。治疗组模型制作后注射PD-1抗体(4mg/kg);其余两组注射等体积生理盐水(含二甲亚砜)。14天后取各组颈总动脉行苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色,免疫组化染色检α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ki67表达变化,免疫荧光检测核因子-κbp65(Nuclear factor kappa beta,NF-κB)表达变化,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测各组胞浆磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Phosphorylates extracellular signal regulated kinase1/2,p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节酶1/2(PhosphorylNVP-TNKS656研究购买ates extracellular regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2)及c-myc含量变化。结果:结果HE染色显示颈动脉狭窄模型建立成功,新生内膜成分主要为平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)。与损伤组相比,治疗组显著下调增殖蛋白Ki67表达(P<0.05),抑制新生内膜中VSMCs的增殖(P<0.05);与损伤组相比,治疗组显著下调炎症因子NF-κBp65表达(P<0.05),减轻了新生内膜的炎症反应;降低丝裂原活化蛋白激酶级联通路-细胞外信号调节酶(Mitogen-activated protein kinases-Extracellular regulated protein kinase,MAPK-ERK)通路活化(P<0.05),减少c-myc活化(P<0.05)确认细节。结论:PD-1抗体能够缓解大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄,其机制可能是通过抑制MAPK/ERK通路活化,降低增殖蛋白Ki67表达,减少c-myc活化,从而抑制新生内膜中VSMCs的过度增殖,下调了炎症蛋白NF-κBp65表达,减轻了新生内膜的炎症反应。本研究为我们评估和控制动脉硬化内膜增生提供了十分有效的参考指标,为指导我们对难治性动脉硬化患者进行免疫治疗提供新的方向和靶点。

目的 探讨D-二聚体/血小板(PLT)比值(DPR)对重症脑卒中患者下肢深静脉血栓(LDVT)的预测价值。方法 选取2019年1月至2022年6月商丘市第三functional symbiosis人民医院收治的216例重症脑卒中患者为观察组，根据有无LDVT形成分为非LDVT组(120例)和LDVT组(96例)。选取100例健康体检者作为对照(对照组)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估DPR对重症脑卒中患者LDVT的预测价值，多因素logistic回归分析重症脑卒中患者LDVT的相关因素。结果 LDVT组D-二聚体、话化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fib)、DPR、Wells评分高于非LDVT组和对照组，PLT、平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)低于非LDVT组和对照组(P<0.05);非LDVT组D-二聚CL13900体、PT、APTT、Fib、DPR高于对照组，PLT、MPV、PDW低于对照组(P<0.05)。DPR预测重症脑卒中患者LDVT的AUC为0.908(0.884～0.932)。DPR≥1.19×10~(-2)(OR=8.612,95%CI:3.804～19.505)为重症脑卒中患者LDVT的相确认细节关因素之一(P<0.05)。结论 重症脑卒中并发LDVT患者DPR升高，且DPR高表达为重症脑卒中患者LDVT的相关因素，DPR可作为预测重症脑卒中患者LDVT的生物标志物。

研究背景与目的:急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)已成为临床危重病学研究的热点和难点。其发病机制复杂,目前尚缺乏有效的药物治疗。核因子-红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)是一种重要的抗氧化因子,在改善包括急性肺损伤在内的各种炎症和氧化应激相关疾病中发挥着重要作用。黄柏酮(Obacunone,OB)是一种广泛存在于柑橘类水果中的天然黄酮类化合物,具有抗炎和抗氧化等活性。然而,黄柏酮在ALI中的治疗作用及其潜在机制尚不清楚。铁死亡是一种脂质过氧化、铁离子依赖的级联程序性细胞死亡方式。区别于凋亡、自噬和焦亡等程序性细胞死亡形式,铁死亡的主要特征是脂质过氧化和氧化物积累,细胞内线粒VP-16生产商体萎缩,线粒体嵴减少或消失。已有研究表明,包括ALI在内的多种疾病的发生发展与铁死亡密切相关,而Nrf2介导的抗氧化应激具有明显的抑制铁死亡作用,因此通过激活Nrf2靶向抑制铁死亡有望成为ALI新的治疗手段。本研究通过构建脂多糖诱导BEAS-2B细胞损伤及小鼠肺急性损伤模型,重点探讨黄柏酮是否可通过Nrf2途径抑制铁死亡进而缓解急性肺损伤。材料与方法:1.黄柏酮对急性肺损伤细胞及动物模型的保护作用在人肺上皮细胞BEAS-2Medical ScribeB上用脂多糖处理,构建急性肺损伤细胞模型。CCK-8检测细胞活力和LDH释放实验评价Obacunone治疗后细胞存活情况;ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子释放情况;EDU实验、7-AAD流式细胞染色计数评价细胞损伤情况。运用脂多糖处理构建急性肺损伤动物模型。肺组织外观充血情况、HE染色、TUNEL染色实验等检测评价小鼠肺损伤情况;ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子释放情况。分别在人肺上皮细胞BEAS-2B及小鼠急性肺损伤模型上,Dihydroethidium(DHE)荧光染色评价黄柏酮处理前后ROS释放情况,并在组织水平检测氧化应激相关指标MDA、CAT、GSH和SOD的活性。2.铁死亡在黄柏酮减轻急性肺损伤中的作用研究脂多糖处理人肺上皮细胞BEAS-2B构建急性肺损伤细胞模型。在细胞水平上,免疫荧光检测GPX4、4-HNE的表达;免疫印迹检测GPX4和SLC7A11的表达;Fe~(2+)检测试剂盒检测Fe~(2+)的表达情况;透射电镜检测铁死亡的发生情况。在LPS处理构建急性肺损伤动物模型上,免疫组化检测GPX4、4-HNE的表达,免疫印迹检测GPX4和SLC7A11的表达。3.黄柏酮抑制铁死亡的机制研究在急性肺损伤细胞及动物模型上,通过免疫荧光和免疫组化检测黄柏酮对Nrf2表达的影响;同时,使用免疫印迹法检测细胞及肺组织中Nrf2的表达情况。Nrf2抑制剂(ML385)联合黄柏酮处理,小鼠肺组织DHE荧光染色、HE染色、GPX4和4-HNE免疫组化染色;ELISA检测IL-1β,IL-6,TNF-α的表达水平、Fe~(2+)检测试剂盒检测Fe~(2+)更多的表达情况、透射电镜检测铁死亡的发生情况,明确黄柏酮减轻急性肺损伤是否通过Nrf2。在急性肺损伤细胞模型上,WB检测Nrf2相关机制通路中Nrf2、Keap1的表达;q PCR检测Nrf2相关机制通路中Nrf2的m RNA水平。Nrf2合成抑制剂(cycloheximide)和蛋白酶体抑制剂(MG132)分别联合黄柏酮处理,结合CO-IP等技术方法评价黄柏酮对Nrf2的调控作用。结果:1.黄柏酮对急性肺损伤细胞及动物模型的保护作用细胞水平:与对照组相比,脂多糖诱导BEAS-2B细胞活力在一定时间和剂量范围内显著降低,并且在一定时间和剂量范围内LDH释放增加。黄柏酮处理后,显著逆转了脂多糖诱导的BEAS-2B细胞活力下降。为了进一步分析黄柏酮的保护效果,我们在脂多糖诱导前使用不同浓度的黄柏酮预处理BEAS-2B细胞,结果显示,BEAS-2B细胞活力随着黄柏酮浓度增加而增加,LDH释放以剂量依赖性方式减少。此外,黄柏酮处理后脂多糖诱导BEAS-2B细胞分泌的炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α在一定剂量范围内减少,EDU染色和流式细胞术结果表明黄柏酮对脂多糖诱导BEAS-2B损伤具有保护作用。动物水平:基于课题组前期研究,成功构建小鼠脂多糖诱导急性肺损伤模型。与对照组相比,脂多糖诱导后小鼠肺大体明显水肿充血,小鼠肺泡灌洗液中IL-6、1L-1β、TNF-α的分泌增加,以及上调肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞数和蛋白含量。黄柏酮处理显著改善了小鼠肺组织细胞凋亡和损伤、间质充血水肿增厚、组织结构丢失炎性反应。分别在人肺上皮细胞BEAS-2B及小鼠急性肺损伤模型上,与对照组相比,脂多糖诱导后Dihydroethidium(DHE)荧光染色增强,细胞和组织水平ROS释放增加,在肺组织水平检测MDA活性增加,然而肺组织中CAT、GSH和SOD的活性明显降低。值得注意的是,黄柏酮处理后能够逆转脂多糖对人肺上皮细胞BEAS-2B及小鼠急性肺损伤模型的损伤情况。2.铁死亡在黄柏酮减轻急性肺损伤中的作用研究在脂多糖诱导的急性肺损伤模型中,通过铁离子检测试剂盒检测Fe~(2+)及免疫印迹检测GPX4、4-HNE和SLC7A11水平来评估BEAS-2B细胞和肺组织中的铁死亡情况。与对照组相比,脂多糖组BEAS-2B细胞中GPX4蛋白水平及其GPX4m RNA水平显著降低,4-HNE和Fe~(2+)水平显著升高。此外,在黄柏酮处理后,BEAS-2B细胞和小鼠肺组织中GPX4和SLC7A11水平均升高;同样,脂多糖组小鼠GPX4水平显著降低,4-HNE水平显著升高。免疫组化染色和透射电镜(TEM)分析显示,TEM可观察到明显的线粒体收缩,线粒体嵴减少或消失。接下来,我们用铁死亡抑制剂(Fer-1:5 mg/kg)预处理小鼠后,我们发现,在脂多糖诱导的急性肺损伤的小鼠模型中,黄柏酮显著抑制了铁死亡指标和炎症反应,这与Fer-1治疗的效果相似。3.黄柏酮抑制铁死亡的机制研究通过细胞免疫荧光、肺组织免疫组化分析和免疫印迹分析Nrf2的水平和定位。用黄柏酮处理促进了Nrf2的进入细胞核,用Nrf2抑制剂(ML385 30 mg/kg)预处理后ML385显著逆转了黄柏酮对铁死亡、氧化应激和炎症反应的保护作用。我们在有无黄柏酮处理情况下评估了Keap1和Nrf2的蛋白质水平和Nrf2 m RNA水平,发现Keap1蛋白水平以及Nrf2 m RNA水平没有明显的差异。值得主义的是,我们发现在使用黄柏酮处理后Nrf2泛素化降解减少。综上,我们的研究结果显示黄柏酮通过泛素-蛋白酶体途径抑制Nrf2泛素化并减少其降解,从而起到的抗氧化作用减轻脂多糖诱导的小鼠肺炎性损伤。结论:我们的研究表明,黄柏酮通过降低脂多糖导致的肺组织中ROS和MDA的产生,降低了小鼠肺湿/干重比(W/D),以及肺组织中SOD和GSH等氧化指标的消耗,显著减轻了脂多糖诱导的小鼠肺的氧化损伤。此外,黄柏酮显著减轻了肺组织病理损伤,降低了炎症细胞因子的分泌、Fe~(2+)和4-HNE水平,并上调了GPX4、SLC7A11和Nrf2的表达。在机制上,黄柏酮通过抑制Nrf2的泛素化蛋白酶体降解来激活Nrf2,Nrf2抑制剂ML385可逆转黄柏酮对脂多糖诱导的ALI的保护作用。综上,黄柏酮通过Nrf2途径抑制铁死亡,进而发挥对急性肺损伤的保护作用,使其成为一种潜在的急性肺损伤治疗药物。

研究目的:二甲双胍是nonalcoholic steatohepatitis一种常用的降糖药。美国临床回顾性研究证实二甲双胍治疗可降低糖selleckchem尿病患者开角型青光眼的患病率;然而印度一项队列研究认为二甲双胍治疗和糖尿病患者青光眼的患病率没有相关性。二甲双胍是否真的能预防或治疗青光眼缺少基础研究证据。本研究旨在探讨二甲双胍对急性青光眼小鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用及其机制。研究方法:本研究以成年雄性小鼠(C57BL/6J)为对象,分别设置4组。小鼠按照每天一次皮下注射二甲双胍(MET)或对照缓冲液PBS,连续注射7天,第8天通过眼部注射生理盐水逐步将小鼠眼压升高至110 mm Hg诱导视网膜缺血1小时(HIOP),正常眼压的眼睛作为对照。造模后继续按照每天一次皮下注射二甲双胍或对照缓冲液,连续注射3天,最后采集各组小鼠眼球或视网膜。研究结果:1、HE染色结果显示,HIOP+MET组与HIOP+PBS组相比,二甲双胍可显著减轻高眼压模型selleck Galunisertib造成的视网膜厚度损伤,并且降低损伤率可达24.2%。2、免疫荧光结果显示,HIOP+MET组与HIOP+PBS组相比,二甲双胍可显著降低RGCs的丢失,并且降低的丢失率可达46.9%。3、免疫荧光和免疫蛋白印记定量结果显示,二甲双胍不仅上调了高眼压模型中GPX4的表达,而且还降低了高眼压模型中神经纤维层胶质细胞的增殖。4、免疫蛋白印迹定量结果显示,二甲双胍提高了高眼压模型中视网膜AMPK的Ser182磷酸化水平。结论:二甲双胍可能通过抑制RGCs铁死亡和减少视网膜炎症来减少急性青光眼小鼠模型中RGCs的丢失。这些结果支持二甲双胍未来可能成为一种新的青光眼预防或治疗策略。

目的探讨脑胶质瘤的多序列影像组学特征及临床相关参数预测脑胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1 (isocitrate dehydrogenase, IDH1)基因突变的价值。材料与方法 回顾性分析81例经组织病理学证实并有IDH1基因突变状态信息的脑胶质瘤患者。应用T2WI、T1WI、扩散加权成像（diffusion weighted imaging, DWI）、表观扩散系数（apparentTGF-beta/Smad抑制剂 diffusion coefficient, ADC）和对比增强MRI(contrast enhancement MRI, CE-MRI)五种图像进行影像组学特征提取，每个序列可提取107个影像组学特征，以上特征经单因素秩和检验、相关性分析及最小绝对收缩和选择算子（least absolute shrinkage selection operator, LASSO）降维筛选后，剩余特征采用多因素logistic回归分别建立各序列模型及多序列融合模型，包括T2WI模型、T1WI模型、DWI模型、ADC模型、CE-MRI模型和多序列影像组学模型。最后将多序列影像组学模型输出的组学分数与临床多因素模型结合建立联合模型。上述模型采用受试者工作特征（receiver operating characteristic, Rbioorganic chemistryOC）曲线分析各模型的预测效能，并采用DeLong非参数检验比较曲线下面积（area under the curve, AUC）的差异。此外，采用决策曲线分析（decision curve analysis, DCA）评估多序列影像组学模型和联合模型鉴别IDH1基因突变状态的临床收益。结果 联合模型在胶质瘤IDH1基因突变预测中表现出最佳的效能（AUC为0.928）。多序列影像组学模型的AUC值均高于T2WI、DWI和ADC模型（分别为0.865 vs. 0.752、0.656、0.631,P值均<0.05）；联合模型的AUC值高于T2WI、T1WI、T1增强和多序列影像组学模型（分别为0.928 vs. 0.752、0.827、0.829、DS-3201纯度0.865,P值均<0.05）；但联合模型和临床模型之间的AUC值差异无统计学意义（分别为0.928和0.880,P>0.05）。决策曲线分析表明，联合模型较多序列影像组学模型鉴别IDH1基因突变的临床收益高。结论 多序列影像组学特征、临床及MRI影像学特征的结合对术前鉴别脑胶质瘤IDH1基因突变有重要价值。