PDK1信号通路

研究背景塑料作为一种人造材料,因成本低、坚固耐用且易于生产,被广泛应用于各行各业当中。微纳塑料(Micro-/nano-plastics,MNPs)在陆地、水生和大气系统等自然生态系统中无处不在。由于MNPs具有较大的比表面积和较强的表面疏水性,它们很容易吸附和富集重金属和有机污染物等。此外,大多数塑料产品在成型过程中添加了一些塑料添加剂以改变聚合物的性能,使塑料产品更耐用和可持续。邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(Di-(2-ethylhexyl Phthalate),DEHP)是一种广泛用于塑料制品生产的增塑剂,被应用于塑料产品、化妆品、玩具以及medical reference app医疗器具等产品中,这些塑料添加剂可以在塑料制品破碎过程中以微塑料的形式释放到环境中。聚苯乙烯(Polystyrene,PS)产量高、分布广泛且对疏水性有机污染物具有较强吸附能力,因此,PS和DEHP在生态环境中极有可能造成复合污染,然而目前PS与DEHP联合暴露毒性研究仍然非常有限,PS能否载带和释放DEHP到体内以及联合暴露是否会给神经系统带来更大的危害,目前尚不清楚。研究目的本研究依据环境暴露浓度选择三种微、纳尺度PS粒子和DEHP,通过建立小鼠亚慢性长期口服暴露模型,评价PS与DEHP联合暴露对小鼠神经行为的影响,并探究其毒性作用的分子机制,为MNPs与环境污染物复合暴露的健康风险评估提供研究数据和参考。研究方法1.PS材料表征以及对DEHP的吸附。我们采用扫描电子显微镜观察PS粒子的形态,采用纳米粒度分析仪检测PS粒子水动力学直径和Zeta电位,采用傅里叶红外光谱检测PS材料的成分,采用共聚焦显微镜拍摄荧光信号,确定尼罗红标记PS粒子是否能产生稳定的荧光。其次我们采用气相色谱-质谱联用仪(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)检测DEHP在PS上的吸附量。2.PS和DEHP联合暴露亚慢性暴露动物模型建立。将小鼠随机分为9组:空白对照组(C组),溶剂对照组(SC组),DEHP组,PS组(PS50/500/5000),PS与DEHP复合暴露组(PS50/500/5000+DEHP)。PS和DEHP给药剂量分别为50mg/kg·bw/day和0.5 mg/kg·bw/day,灌胃染毒90 d。3.PS和DEHP联合暴露在小鼠体内分布及整体毒性效应。通过共聚焦显微镜和荧光比色法检测荧光PS粒子在小鼠脑、肠、肝、肾、睾丸和血液中的蓄积。采用GC-MS检测DEHP和其初级代谢产物邻苯二甲酸-单-2-乙基己酯(Mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)在小鼠脑、肠、肝、肾、睾丸和血液中的蓄积。采用全自动血液细胞分析仪检测血常规,使用全自动生化分析仪检测血清中血生化指标。通过ELISA方法检测血清炎性指标,应激激素和雄激素。根据试剂盒检测血清中氧化应激水平。4.PS和DEHP联合暴露神经毒性效应。暴露结束后采用旷场、水迷宫和避暗实验对小鼠的行为和学习记忆能力进行评价。通过HE染色、尼氏染色和电镜观察小鼠海马和皮质结构变化。通过FITC-Dextran染色检测小鼠血脑屏障通透性。采用免疫荧光方法检测海马血脑屏障紧密连接蛋白,小胶质和星形胶质细胞激活标志物,性激素受体相关蛋白表达。采用免疫组化检测海马炎性因子的表达。采用荧光比色法检测海马活性氧水平并根据试剂盒检测氧化应激水平。通过TUNEL实验检测海马组织的凋selleck NMR亡率。通过WB实验检测海马NF-κB通路,凋亡和自噬相关蛋白。采用靶向代谢组学和ELISA检测海马神经递质水平。5.磷酸化修饰蛋白质组学分析及验证。我们采用磷酸化修饰蛋白质组学技术,分析PS50和DEHP单独及其联合暴露对小鼠海马磷酸化蛋白组学的影响,采用WB实验检测阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)相关通路蛋白表达。采用甘氨酸银染检测海马老年斑和神经缠绕成结现象,通过比色法和ELISA检测相关神经递质谷氨酸和D-丝氨酸水平,采用比色法检测Ca~(2+)水平。6.体外小鼠海马神经元细胞(HT22)暴露模型构建。通过50 nm PS和MEHP干预HT22细胞24h,通过CCK8法检测细胞活力,使用共聚焦显微镜观察HT22细胞对荧光50 nm PS的摄取,通过GC-MS检测HT22细胞对MEHP的摄取,采用荧光比色法检测HT22细胞活性氧水平并根据试剂盒检测氧化应激水平,HT22细胞在预先用或者不用N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)抑制剂美金刚(Memantine,MEM)和三磷酸肌醇受体(Inositol 1,4,5-triphate receptor,IP3R)抑制剂光溜海绵素C(Xestospongin C,Xe C)处理的情况下,再用相应浓度的PS50和MEHP单独及其联合暴露处理后,通过Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,通过比色法检测Ca~(2+)和D-丝氨酸含量,通过ELISA法检测Glu含量,通过WB检测AD通路相关蛋白。7.小胶质细胞(BV2)及与HT22细胞共培养模型建立。通过50 nm PS和MAMG510EHP干预BV2细胞24 h,通过CCK8法检测细胞活力,使用共聚焦显微镜观察BV2细胞对荧光50 nm PS的摄取,通过GC-MS检测BV2细胞对MEHP的摄取,通过ELISA检测BV2炎性因子,Annexin V-FITC/PI双染色法检测共培养细胞凋亡,通过比色法检测共培养细胞Ca~(2+)含量,采用WB方法检测BV2细胞p-NF-κB p65(Ser 536)和HT22/BV2共培养细胞AD标志蛋白的表达。8.肠-脑轴机制探讨。通过HE染色和电镜观察小鼠结肠结构变化。采用免疫荧光检测肠道屏障以及性激素受体相关蛋白,采用ELISA方法检测结肠炎性因子和重要神经递质水平。通过16S r DNA基因测序检测肠道菌群的变化,通过靶向代谢组学检测短链脂肪酸含量。研究结果1.PS和DEHP在体内分布规律及其整体毒性效应。PS能够吸附DEHP且吸附量在98%以上。PS均能进入小鼠血液,50 nm PS在脑、肠、肝、肾和睾丸中均有显著蓄积,500 nm PS在肠、肝、肾和睾丸中显著蓄积,且50和500 nm PS更易在肠中富集,5μm PS在小鼠肝和肾中显著蓄积且更易在肝中富集。PS与DEHP复合暴露后,PS能够载带DEHP并显著增加其在脑、肠、肝、肾、睾丸和血液中的含量;同时显著增加脑内MEHP含量,尤其是50 nm PS与DEHP复合暴露后脑内MEHP含量最高。PS单独及其与DEHP复合暴露后,DEHP和MEHP在体内的含量均呈现粒径依赖性,PS粒径越小其含量越高。PS与DEHP单独及其联合暴露能使血常规、肝功能、肾功能和血脂指标发生变化,并影响血清炎性因子、氧化应激、应激激素和雄激素水平。联合暴露能够增加单独暴露诱导的整体毒性,并随粒径增大其影响逐渐减弱。2.PS和DEHP单独及其联合暴露的神经毒性效应。PS和DEHP联合暴露能够影响小鼠运动活动,导致焦虑行为幷使学习记忆能力下降。PS和DEHP单独及其联合暴露均会损伤小鼠海马和皮质的结构,增加海马血脑屏障通透性,诱导神经炎症,影响氧化应激水平,导致海马凋亡和自噬增加,降低性激素受体水平,还导致海马内多种神经递质的改变,联合暴露会增加单独暴露诱导的神经毒性,并随粒径增大其影响逐渐减弱。3.PS和DEHP单独及其联合暴露诱导小鼠AD样病变及机制探讨。我们通过分析差异磷酸化蛋白肽段,筛选出AD信号通路,发现老年斑和神经纤维缠绕成结的现象,上调AD标志蛋白Aβ_(1-42)及APP、Tau、p-Tau(Ser396)和p-Tau(Thr231),NMDAR Ca~(2+)通道相关神经递质Glu和D-Ser及Grin2b、p-Grin2b(Tyr 1472)、Grin1和p-Grin1(Ser 890)蛋白,IP3R Ca~(2+)通道相关蛋白GPCR和IP3R,Ca~(2+)及下游激酶Ppp3cb和p-ERK1/2(Thr 202/Tyr 204)蛋白,内质网应激相关蛋白Bip、p-PERK(Thr 982)、p-el F2α(Ser 51)、ATF4、CHOP和C-Caspase12水平,下调了p-GSK3β(Ser 9)蛋白水平。与单独PS50和DEHP暴露相比,PS50和DEHP联合暴露导致上述指标的变化更显著。4.PS与DEHP联合暴露诱导AD病变的直接作用分子机制。我们通过建立HT22细胞模型对其机制进行研究,结果表明,PS50+MEHP能导致HT22细胞活力下降,50 nm PS能够进入细胞,MEHP含量增加,影响氧化应激水平,上调了AD重要的标志蛋白Aβ_(1-42)及APP和p-Tau(Ser 396),NMDAR Ca~(2+)通道相关神经递质Glu和D-Ser及p-Grin2b(Tyr 1472)和p-Grin1(Ser 890)蛋白,IP3R Ca~(2+)相关GPCR和IP3R蛋白,Ca~(2+)及下游激酶Ppp3cb、GSK3β和p-ERK1/2(Thr 202/Tyr204)蛋白,内质网应激相关蛋白Bip、p-PERK(Thr 982)、p-el F2α(Ser 51)、ATF4、CHOP和C-Caspase12,凋亡率及凋亡蛋白Bax、C-Caspase9和C-Caspase3,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白表达水平;下调了激酶p-GSK3β(Ser 9),凋亡蛋白Bax,自噬蛋白p62的蛋白表达水平;与单独PS和MEHP暴露相比,50 nm PS与MEHP联合暴露导致上述指标的变化更显著。并且,给予NMDAR抑制剂MEM和IP3R抑制剂Xe C干预后,能够明显缓解PS50与MEHP联合暴露诱导的AD样病变相关蛋白及信号通路的表达。5.PS与DEHP联合暴露诱导AD病变的间接作用分子机制。通过建立BV2细胞及HT22/BV2共培养细胞模型对其间接机制进行研究,我们发现PS50与MEHP联合暴露能导致BV2细胞活力下降,PS50进入细胞,胞内MEHP含量增加,诱导BV2细胞炎症,上调HT22/BV2共培养细胞凋亡率、Ca~(2+)水平及Aβ_(1-42)和p-Tau(Ser 396)蛋白水平,且与单独PS50和MEHP暴露相比,PS50与MEHP联合暴露导致上述指标更显著的变化。6.肠-脑轴机制探讨。PS和DEHP单独及其联合暴露均能损伤小鼠结肠的结构,增加肠屏障通透性,诱导肠炎症,降低性激素受体水平,改变神经递质水平,联合暴露能够增强单独暴露的毒性作用,并随着PS粒径的减小毒性作用逐渐增强。同时,一些肠道菌群(如Ileibacterium、Acetitomaculum、Desulfovibrio和Oligella)及其代谢产物发生特异性改变,并且与神经行为异常、血脑屏障损伤、神经炎症、神经递质和激素水平呈显著相关性。研究结论1.三种粒径PS粒子均能进入小鼠血液中并在组织中蓄积,与粒径大小有关。PS能够载带DEHP,二者复合暴露后促进DEHP及MEHP进入血液并在各组织中蓄积。MEHP在脑内蓄积最多,提示脑是一个重要靶器官。DEHP和MEHP在体内的含量与PS粒径密切相关,粒径越小其含量越高。2.PS和DEHP单独及其联合暴露诱导机体炎性损伤、氧化应激及激素水平紊乱,联合暴露的毒理效应更显著,且小粒径的作用效果明显大于大粒径。3.本研究从体内外实验证明,PS和DEHP单独及其联合暴露均具有神经毒性,且PS粒径越小毒性效应越高。通过NMDAR和IP3R Ca~(2+)通道导致Ca~(2+)超载,最终诱导小鼠和神经元细胞出现AD样病变,联合暴露引起的毒性效应高于单独暴露。4.PS与MEHP联合暴露可以通过激活小胶质细胞NF-κB信号通路,促其释放炎性因子,进而诱导神经元损伤。5.PS与DEHP联合暴露可引起小鼠肠道菌群及其代谢产物的改变,破坏肠屏障并通过肠脑轴途径发挥神经毒性作用。

目的：观察越婢汤加味对慢性肾小球肾炎患National Ambulatory Medical Care Survey者的成效及对生化指标、氧化应激反应的作用Staurosporine作用。方法：选取2021年1月—2022年6月我院收治的慢性肾小球肾炎患者100例，按随机数字法分观察组和对照组，各50例，对照组予常规西医内科综合治疗，观察组在此基础上服用越婢汤加味治疗，比较两组治疗前及治疗后1、3个月的临床疗效、中医证候总积分、生化指标和氧化应激。结果：治疗后，观察组治疗总有Tofacitinib纯度效率明显高于对照组(P<0.05);治疗后1、3个月两组的主证、次证积分及证候总分均明显降低(P<0.05),且观察组明显低于对照组(P<0.05);治疗后1、3个月两组的血肌酐(scr)、24h尿蛋白定量(24hUTP)、尿素(Urea)均明显降低，且观察组明显低于对照组(P<0.05);治疗后1、3个月两组的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)均明显上升，丙二醛(MDA)明显下降(P<0.05),且观察组SOD、GSH-Px均明显高于对照组，MDA明显低于对照组(P<0.05)。结论：越婢汤加味治疗CGN患者疗效好，可有效减轻患者临床症状，改善患者肾功能。

在缺血性脑卒中（IS）发生过程中，血管系统血栓可导致脑组织缺血缺氧，产生炎症细胞因子引发脑组织损伤，缺血再灌注过程活性氧进一步引起应激性损伤。常规给药受制于血脑屏障的选择性通透作用和药物本身较低的生物利用度，对IS治疗Z-VAD-FMK临床试验效果不尽人意。纳米药物有望改rheumatic autoimmune diseases变这一现状，其具有独特的作用机制，可穿越血脑屏障到达梗死灶周围，释放药物或治疗基因，发挥治疗作用。纳米药物通过抑制血小板聚集和增强溶栓药物的药效，溶解血栓增加缺血区供血；通过对抗炎症细胞FG-4592分子式因子，消除活性氧，削弱损伤反应；负载治疗基因调控神经干细胞分化过程，增加神经元的数量，诱导血管的发生，增强脑组织修复功能。纳米药物不但改善药动学和药效学，实现更有效的药物治疗，且可利用纳米成像技术实现IS治疗过程的实时监测和病情评估。

目的 探究薰衣草精油对脑卒中后大鼠缺血海马中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factoEmpagliflozinr,BDNF)/前脑源性神经营养因子(pro-brain-derived neurotrophic factor,proBDNF)表达及抑郁恢复的影响。方法 雄性SD大鼠45只随机分为对照组、模型组和干预组,每组15只。对照组在常规条件下饲养的大鼠,腹膜注射生理盐水作为对照试验;模型组,大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/r)模型,腹腔注射生理盐水;干预组,大鼠MCAO/r后给予薰衣草精油和运动干预。通过露天场地、强迫游泳和蔗糖偏好测试大鼠的焦虑抑郁行为。通过商业试剂盒检测大鼠氧化应激标志物水平。通过反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)分析BDNF/proBDNF信号通路表达。通过免疫印迹发(Western blotting,WB)分析缺血海马组织中CA1区、CA3区和齿状回(dentategyrus,DG)区的BDNF/proBDNF比值。BDNF/proBDNF比值与抑郁的行为试验进行相关性分析。通过神经行为(感觉和运动)测试大鼠神经缺损。结果 模型组大鼠静止时间长于对照组,蔗糖偏好、攀爬频率和运动距离低于对照组;干预组大鼠静止时间长于对照组,短于模型组,蔗糖偏好、攀爬频率和运动距离低于对照组,高于模型组(P<0.05)。模型组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl glycine,GSH)和抗氟离子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosCicindela dorsalis mediaphatase,FRAP)水平低于对照组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平高于对照组;干预组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl glycine,GSH)和FRAP水平高于模型组,MDA水平低于对照组,低于模型组(P<0.05)。模型组BDNF、神经营养素受体(neurotrophic receptor,TrkB)和微管相关蛋白(doublecortin,DCX)mRNA表达低于对照组,proBDNF和神经营养素受体P75(neurotrophic receptor P75,p75NTR) mRNA表达高于对照组;干预组BDNF、TrkB和DCX mRNA表达低于对照组,高于模型组,proBDNF和p75NTR mRNA表达高于对照组,低于模型组(P<0.05)。模型组CA1、CA3和DG区的BDNF/proBDNF比值低于对照组;干预组CA1、CA3和DG区的BDNF/proBDNF比值高于模型组(P<0.05)。BDNF/proBDNF比值与强迫游泳期间静止时间呈负相关(r=-0.74,P<0.01),BDNF/proBDNF比值与蔗糖偏好呈正相关(r=0.63,P<0.01)。模型组神经缺损评分高于对照组;干预组神经缺损评分高于对照组,低于模型组(P<0.05)。模型组B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)/B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达高于对照组,Bcl-2表达低于对照组;干预组Bax和Bax/Bclselleck PD-0332991-2表达低于模型组,Bcl-2表达高于模型组(P<0.05)。结论 薰衣草精油可能通过调节BDNF和proBDNF的相对水平,改善神经功能,增强内源性抗氧化防御、抑制氧化应激途径和神经凋亡,改善PSD大鼠的抑郁样行为。

软腐病是魔芋的主要病害，严重制约着石阡山区魔芋的规模化生产，为筛选出防治魔芋软腐病的有效药剂，在果林套种魔芋基地上进行不同药剂对软腐病的防效试验，并采取种芋消毒、出苗后灌根与生长中期喷雾相结合的防治方法。结果表明：最后1次灌根和喷雾防效分别与对照相比，0fee-for-service medicine.5%青枯立克水剂+20%松脂酸铜水乳剂+2%春雷霉素水剂复配液防效均为最高，分别达到93.8%和85.1%;0.3%双攻嘧啶水剂和20%龙克菌悬浮液的防效次之，分别为84.1%、81.2%和72.3%、67.4%;12%克菌康可湿性粉剂和50%灭菌成可溶性粉剂的防效再次之，分别为77.7%、62.8%和72.3%、获悉更多62.2%;2%春雷霉素水剂、8%宁南霉素水剂、8%乙蒜素乳油的防效最差LBH589浓度。不同药剂复配液的综合防效较好，而单一药剂的综合防效一般或较差，建议在生产中可将综合防效极佳的0.5%青枯立克水剂+20%松脂酸铜水乳剂+2%春雷霉素水剂复配液进行推广应用。

目的 研究夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p对肺结核模型大鼠的干预效果及作用机制。方法 50只大鼠随机选取10只为正常组，其余40只建立肺结核模型，喂养4 w后Barasertib每组随机抽样2只，取肺组织苏木素-伊红(HE)染色，发现肺组织可见大量炎性细胞浸润为建模成功。建模成功后将建模成功的38只大鼠分为模型组(14只)、低剂量组(12只)、高剂量组(12只)。低剂量组给予夏枯草硫酸多糖60 mg/kg,高剂量组给予夏枯草硫酸多糖100 LGK-974小鼠mg/kg,均4 d/1次，共3次。正常组、模型组给予生理盐水。各组均连续灌胃2 w。对比分析各组miR-886-5p、氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平及转化生长因子(TGF)-β1/Smad3通路蛋白表达量。结果 相比与正常组，模型组、低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05);与模型组相比，低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05);与低Domestic biogas technology剂量组相比，高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比，低剂量组、高剂量组TGF-β1、Smad3表达量显著降低(P<0.05)。结论 肺结核模型大鼠通过夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p表达后可减轻肺结核组织病变，降低炎症反应，其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3通路有关。

目的：探究健脾消积清热法治疗难治性幽门螺杆菌感染的效果。方法：选取惠安县妇幼保健院2021年1月至2023年1月期间收治的200例难治性幽门螺杆菌感染患者，随机分成对照组与观察组，各100例。对照组患者采用西药四联疗法。观察组患者在对照组基础上给予中医健脾消积清热法治疗。比较两组患者的治疗效果。结果：治疗后观察组患者的胀痛、胃中痞满、食欲不振、嗳气反酸、总积分较对照组低，差异具有统计学意义（P <0.05）；观察组患者的治疗总有效率为97.00%，高于对照组的86.00%，差异具有统计学意义（P <0.05）；治疗后观察组患者血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ及一氧化氮（NO）水平均低于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）；观察组患者不良反应发生率低于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）。结论：健脾消积清热法www.selleck.cn/products/Etopophos能够有效提高难治性幽门螺杆菌感染患者的media supplementation治疗效果，缓解临床症状，减AZD9291体内实验剂量少患者的不良反应。

目的 把握丁香酚在国内外食品领域中的研究现状、热点和趋势，有利于丁香酚的深入研究和应用拓展。方法 基于CiteSpace和文献计量在线分析平台，以“丁香酚”为主题词，以“食品”为检索学Pathologic grade科，以检索到的243篇CNKI文献和1352篇WOS文献为研究对象，对发文量、国家、期刊及作者进行量化分析，并通过关键词共现图谱、聚类图谱和PLX5622半抑制浓度突现图谱进行可寻找更多视化分析。结果 国内外食品领域相关研究的年度发文量呈逐年上升趋势，我国发文总量位居世界第二，2021年的发文量较2017年的增幅达到154%，国内外发文量最高的期刊分别为食品领域顶级期刊《食品科学》和《Journal of Agricultural and Food Chemistry》，表明丁香酚在食品领域的相关研究具有较高的关注程度和学术水平。与CNKI数据库相比，WOS数据库自2020年起发文作者较多，形成了一个相对紧密的合作网络。国内外对丁香酚的抗氧化、抗菌和检测技术等方面的研究均较早，目前的研究热点聚焦于纳米封装设计、提取工艺优化、抗菌效果和机理的深层探讨，研究主题集中在水产品中的应用和食品保鲜方面。结论 丁香酚的相关研究仍处于活跃的发展阶段，在食品领域具有良好的发展前景。

目的 建立一种无GW-572016细胞培养需标准品即可快速检测保健品中136种非法添加降血压药物的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析方法。方法 样品经甲醇溶液适当稀释,超声处理后,经Waters Acquity BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.7μm)分离,以0.1%(V:V)甲酸水溶液-乙腈作为流动相,进行梯度洗脱。将采集的样品质谱信息与自建立的136种非法添Bioactive borosilicate glass加降血压药物质谱信息库通过分子离子精准质量数比对、同位素分布比对进行初筛,初筛出的阳性化合物通过二级碎片离子解析进行进一步确证。结果 该方法能够在没有标准品的情况下,在20 min内对保健食品中136种非法添加降压药物同时进行精准筛查, 14种降压药物的添加回收实验表明实际样品的检出限在2.0～3.0μg/kg,采确认细节用本方法对市售实际样品进行检验, 1款声称具有降血脂的保健食品中有坎地沙坦酯检出。结论 该方法通量高、速度快、成本低,可用于保健食品中非法添加降血压药物的快速筛查。

目的 建立一种甲硫氨酸亚砜还原酶(Msr)的高通量活性级联催化筛选系统，为后续的定向进化改造等研究提供简便高效的活性筛选方法。方法 诱导甲硫氨酸亚砜还原酶APR-171分子式(MsrA)、甲硫氨酸亚砜还原酶B(MsrB)、硫氧还蛋白(Trx)及Cell death and immune response硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的重组表达，使用气相色谱及手性液相色谱分别检测反应体系中NADPH参与MsrA/MsrB催化消旋体苯甲亚砜还原成硫醚的转化率及对映体过量(ee)值。构建MsrA/MsrB+Trx+TrxR+NADPH的微量级联催化反应系统，使用酶标仪实时检测NADPH在340 nm吸光度值的减少量，监测MsrA和MsrB的酶活性。结果 在NADPH参与下，MsrA、MsrB展出了苯甲亚砜还原活性，以及较好的对应选择性，表明NADPH参与了MsrA、MsrB催化消旋体苯甲亚砜还原成硫醚。建立了MsrA和MsrB的96孔微量重组表达体系，并通过级联催化系统在每一个培养孔中均成功检出MsrA和MsrB的催化活性。而且，每个培养孔中，重组蛋白活性均较为一致，MsrA的差异系数在10.64%以下，MsrB的差异系数在4.10%以下。结论 成Crizotinib体内功开发了一种简便、高效的甲硫氨酸亚砜还原酶高通量活性筛选级联催化系统，为后续进行该酶的定向进化改造提供一种快速简便的大规模筛选方案。