PDK1信号通路

目的 探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9, SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition, EndMT)过程及具体机制。方法 转染小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达，使用甲萘醌www.selleck.cn/products/pf-03084014-pf-3084014构建体外B4G12细胞损伤模型，设4个分组：si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2, SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化，阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果 转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后，给予甲萘醌细胞损伤处理，观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低，同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta, TGF-β)信号通路中SNAskin biopsyIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也https://www.selleck.cn/products/Paclitaxel(Taxol).html随着SOX9的敲低而降低。结论 SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

食源性致病菌是罹患食源性疾病的重要诱因。在食品工业中，食源性致病菌易黏附在食品原料和加工SCH727965分子式设备表面形成生物被膜，这导致其难以被彻底清除，给公众健康带来严重威胁。近些年，研究学者不断挖掘新的天然抗生物被膜剂，如噬菌体、植物提取物、酶、抗菌肽及生物表面活性剂等，并针对这些天然抗菌剂对生物被膜的控制效果和作用机制展开了一系列研究，期望替代或弥补物理、化学方法的不足。文章研究了不同种类的天然抗生物被膜MSCs immunomodulation剂及其对食源性致VE-822核磁病菌生物被膜的抑制效果，并从降低细菌表面黏附能力、调控群体感应信号通路、降解胞外聚合物组分及破坏细菌细胞膜等角度总结了天然抗菌剂抑制生物被膜的作用机制，最后对未来的研究方向提出了展望，旨在为食品工业中食源性致病菌的防控提供依据。

目的研究程序性死亡蛋白1（PD-1）与其配体PDendobronchial ultrasound biopsy-L1在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血CD19~(+)CD25~(+)调节性B细胞（Breg）的表达及临床意义。方法收集50例SLE患者和41例健康人（HC）外周血标本，采用流式细胞仪检测外周血中CD19~(+)CD25~(+ )Breg的比例，以及CD19~(+)CD25~(+)Breg的PD-1、PD-L1表达，同时采集患者的临床表现和实验室指标等临床信息。使用免疫磁珠分选CD4~(+)T细胞与CD19~(+)B细胞，体外细胞共培养，检测Breg的分化。结果SLE患者活动组外周血中CD19~(+)CD25~(+)Breg比例低于HC，CD25~(+)B细胞PD-1、PD-L1的表达高于HC；SLE患者有胸腔积液、关节炎、C反应蛋白（CRP）上升的患者Breg频率高于对应阴性组；SLE患者有IgM下降、抗核糖核蛋白（RNP）抗体阳性的患者Breg频率低于对应阴性组；SLE患者有感染、发热、关节炎、IgA上升的患者CD19~(+)CD25~(+)PD-1~(+)细selleckchem CP-456773胞频率高于对应阴性组；SLE患者有感染、发热、IgA上升的患者CD19~(+)CD25~(+)PD-L1~(+)细胞频率高于对应阴性组；活化的CD4~(+)T细胞有利于CD19~(+)B细胞表面CD25的表达。结论 SLE患者外周血中CD19~selleck PS-341(+)CD25~(+)Breg降低，但细胞表面PD-1与PD-L1的表达增加，并且与相关临床表现及实验室参数存在一定的关系。活化的CD4~(+)T细胞影响Breg的分化。

随着山羊(Capra hircus)养殖业的发展，交通运输引起的山羊健康问题已不容忽视。本研究旨在探讨运输应激对赣西山羊胃壁组织细胞凋亡及凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2相关XApoptosis抑制剂蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)表达的影响。将12只1周岁的健康赣西公山羊随机均分为：对照组(n=4)、2 h运输组(n=4)、6 h运输组(n=4)。运输过程中禁食、禁水，待运输结束后收集山羊各胃壁的组织并进行相关的组织学和定量分析。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP生物素缺口末端标记法(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)结果显示，与对照组相比，2 h运输组和6 h运输组山羊胃壁组织的细胞凋亡率发生了显著升高(P<0.05)，并且除瓣胃外其余胃壁组织6 h运输组细胞凋亡率显著高于2 h运输组(P<0.05)；免疫组织化学Blue biotechnology结果显示，Bax和Bcl-2主要定位于前胃(瘤胃,网胃,瓣胃)的黏膜上皮和皱胃的固有层，与对照组相比，两运输组中Bax在各胃壁上述部位的表达增强，而Bcl-2的表达减弱(除瓣胃外)；qPCR结果显示，两运输组各胃壁组织中Bax的mRNA表达水平除瓣胃外均发生了显著上调(P<0.05)，而Bcl-2的mRNA表达水平均发生了显著下调(P<0.05),Bax/Bcl-2的比率发生了显著上调(P<0.05);Western blot结果也显示，Bax和Bcl-2的蛋白表达量也均发生了与mRNA相似的变化趋势(P<0.05)。结果表明，运输应激可通过调控BGefitinib化学结构ax和Bcl-2的表达而促进山羊胃壁组织细胞发生凋亡。本研究可为改善运输应激对山羊器官组织损伤的方法提供理论依据。

目的分析~(14)C尿素呼气试验（~(14)C-UBT）在幽门螺杆菌（Hp）感染诊断中的应用价值。方法本项研究于2019年6月正式启动，截止时间是2022年6月。选用此时间段到医院接受就诊的上腹部不适患者200例为研究对象，均接受快速尿素酶试验（RUT）和~(14)C-UBT，以活体组织检查为诊断金标准，对比观察两组诊断方法应用价值。结果200例患者中，经病理检查确诊有181例，比较两组检测方法对慢性胃炎、CHIR-99021分子量十二指肠炎、消化性溃疡等疾病的诊断阳性率，对比两组检测方法对胃癌、胃息肉、慢性胃炎的阳性检出率，结果无显著差异（P>0.05）；在十二指肠炎、消化性溃疡阳性率诊断上，~(14)C-UBT阳性检出率高，组间数据比较差异具有统计学意义（P<0.05）；比较两组诊断方式的诊断效能，包括对疾病的诊断灵敏度、准确度等，~(14)C-Aeromonas veronii biovar SobriaUBT检测方法具有更好的诊断效能（P<0.05）。结论~(14)C-UBLXH254T和RUT是诊断HP感染的有效检测手段，但前者能有效提高Hp检出率，且诊断效能较为显著，能够为患者后续诊治提供更多的指导依据，临床值得推广应用。

目的：观察还原型谷胱甘肽联合盐酸戊乙奎醚治疗重度有机磷农药中毒（AOPP）患者的效果。方法：回顾性分析2020年6月至2023年6月该院收治的60例重度AOPP患者的临床资料，按照治疗方法不同将其分为对照组和观察组各30例。两组均予以急救治疗，在此基础上，对照组予以盐diABZI STING agonist半抑制浓度酸戊乙奎醚治疗，观察组在对照组基础上联合还原型谷胱甘肽治疗，两组均持续治疗7 d。比较两组临床疗效，治疗前后肝功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）]水平、心肌酶指标[肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）]水平、血清胆碱酯酶（ChE）水平、氧化应激指标[脂质过氧化物（LPO）、丙二醛（MDA）、对氧磷酶1(PON1)]水平，以及不良反应发生率。结果：观SPR immunosensor察组治疗总有效率为86.67%(26/30)，高于对照组的63.33%(1BYL719分子式9/30)，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，观察组AST、ALT、TBIL、CK-MB、LDH、CK、LPO、MDA水平均低于对照组，PON1水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗1、4、7 d后，观察组血清ChE水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：还原型谷胱甘肽联合盐酸戊乙奎醚治疗重度AOPP患者可提高治疗总有效率和血清ChE水平，降低肝功能指标和心肌酶指标水平，改善氧化应激指标水平，效果优于单纯盐酸戊乙奎醚治疗。

目的:药源性肾损伤是一种机制复杂、病因学尚未明确的常见疾病,其在诊断上缺乏特异性,因此早期识别和预防对于延缓疾病的发生发展具有重大意义。本研究基于“药物-风险标志物-肾病”角度,筛选并验证潜在的与药物及疾病相关的靶标,从而挖掘出与药物相关性肾病密切关联的风险标志物,旨在为早期识别与早期监测药源性肾损伤风险人群提供理论依据,指导临床用药。方法:利用SIDER和CTD数据库寻找药物和靶标信息,继而应用蛋白互作网络和富集分析方法筛选与药物联系密切的核心靶标,以富集次数高的核心靶标作为潜在的风险标志物。通过系统评价筛选与疾病相关的标志物,检索收集2022年5月前国内外数据库公开发MCC950半抑制浓度表的有关标志物与肾脏疾病的病例对照研究的中英文文献,所有研究均以肾病患者为病例组、以健康志愿者为对照组,标志物检测标本为血清或尿液;根据纳入排除标准对文献行质量评价和数据提取,而后合并定量效应值并行亚组分析。通过MK-2206小鼠临床观察性研究进行验证,回顾性收集某三甲医院2018年1月至2022年4月期间就诊并留有肾活检标本的患者病历资料和标本,病理提示是肾功能不全的为病例组,而行肾脏癌旁切除术后患者为对照组;采用免疫组化法检测标本中风险标志物的表达情况,并分析标志物的表达与性别、年龄、高血压、血清白蛋白和肾小球滤过率等临床指标的相关性。结果:蛋白互作筛选出22个连接度最高的靶标,富集分析提示靶标主要涉及炎症反应、趋化细胞因子活动、补体和凝血级联系统等,最后经排序筛选出VEGFA、TGFβ1、EGF、CXCL12和IGF1五个与药物相关性最强的潜在风险标志物。系统评价方面,纳入研究血清VEGFA、尿液TGFβ1、尿液EGF和血清IGF1与肾病关系文献分别有34篇,28篇,24篇和24篇,定量结果显示与对照组相比,四者水平差异均具有统计学意义。临床研究方面,分别纳入了 50例病例组和16例对照组,免疫组化结果显示,肾病组患者肾组织中VEGFA、TGF β 1、EGF和IGF1的表达量均显著高于对照组中(P均<0.05),且四者的表达与患者年龄、高血压、血清白蛋白和肾小球滤过率间并未显示出明显相关性(P均>0.05)。结论:经过生信分析和系统评价多重筛选后,提示与药物及肾病联系度高的靶标有VEGFA、TGF β 1、EGF和IGF1。肾病时四者在肾组织中呈高表达,且与疾病独立相关,并可通过体液监测出,提示四者可能在肾脏疾病的发生发展和转归中发挥重要作用。综合可知VEGFA、TGF β 1、EGF和IGF1与药物Metal bioavailability性肾病密切相关,当临床使用靶标相关性药物进行治疗时,药物性肾病的发生风险可能成倍增加,故临床应注意监测使用相关药物后患者的情况,未来可监测四者各自的临床效能及组合检测的效能。由于本研究所纳入的文献质量与病例信息质量欠佳,目前所得结果或仅能从理论层面上提供参考。

研究背景周围神经损伤(Peripheral nerve injury PNI)是一种严重的临床疾病,好发于青壮年。它的特点是发病率高,治疗方法有限,临床预后差。严重的周围神经损伤是导致永久性功能障碍和发病的主要原因之一,给社会带来了沉重的医疗和经济负担。当PNI发生时,首先会触发一系列的细胞和分子事件,称为Waller变性;随后,增殖的巨噬细胞被激活,并被招募到损伤处以去除髓鞘碎片和坏死组织,最终启动神经再生程序。然而,过度的炎症反应会导致组织局部活性氧(reactive oxygen species ROS)水平的升高。巨噬细胞是产生ROS的主要来源之一,它在吞噬炎性坏死组织的同时会产生大量的ROS,而ROS的过度积累会引起氧化应激反应,产生神经毒性作用,使周围神经细胞损伤,抑制周围神经再生修复。由此可见,如何有效调节损伤部位的炎症反应和氧化应激是促进周围神经再生和功能恢复的关键。近年来,越来越多的研究者将目光集中于开发和设计医用高分子材料用于促进神经组织的再生和受损神经功能的恢复,取得了一些重要进展。其中,水凝胶由于独特的理化性质,常被用作神经源性细胞培养和增殖的支架材料。然而,常规的水凝胶材料缺少调控炎症微环境的能力,限制了其在PNI治疗中的应用,为此,我们开发了一种以单宁酸为交联剂的透明质酸基动态多功能水凝胶,并探讨其通过消除损伤部位ROS和调控炎症微环境促进周围神经修复(Peripheral nerve repair PNR)的治疗效果和作用机制。研究目的:本研究系列实验主要围绕以单宁酸(tannic acid,TA)为交联剂的透明质酸基动态多功能水凝胶用于PNI的修复展开探索。首先以TA作为交联剂构建了的具有抗氧化应激、抗炎能力的透明质酸(Hyaluronic acid,HA)基多功能水凝胶(HPTA)。充分表征了构成水凝胶确认细节的前体与水凝胶的理化性质,以及探究其在细胞实验中对细胞行为的影响,然后将水凝胶注射到大鼠坐骨神经挤压伤处进行治疗用于评估HPTA水凝胶对神经损伤修复的效果。随后我们在成功构建HPTA水凝胶的基础上,在水凝胶中负载甲钴胺(MethylcobalamPanobinostatin,MeCbl),开发出一种新型的可注射HPTA@MeCbl水凝胶用于替代MeCbl传统的注射疗法,可以在神经损伤局部进行持续治疗。对HPTA@MeCbl水凝胶的理化性质进行充分的表征用于验证MeCbl的加入是否会改变HPTA凝胶本身的性质。通过体外细胞实验与体内对大鼠坐骨神经横断伤的治疗所得到的结果用于评价HPTA@MeCbl水凝胶对神经再生的影响。研究方法:本研究首先构建了具有抗氧化、抗炎功能的HPTA水凝胶。对其理化性质进行充分表征,通过体外细胞实验探究水凝胶对细胞行为的影响,最后将水凝胶应用于大鼠坐骨神经挤压伤模型以验证其对大鼠坐骨神经再生与功能恢复的作用。具体研究方法如下:(1)首先利用3-氨基苯硼酸(3-Aminophenylboronic Acid,3-APBA)上的氨基(-NH2),与HA上的羧基(-COOH)进行酰胺化反应,将3-APBA接枝到HA上形成HA-PBA偶联物。对HA-PBA进行傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)表征后,以TA为交联剂与HA-PBA偶联物进行共混合成含有动态硼酸酯键的HA基水凝胶(HPTA)。对HPTA水凝胶进行形貌、流变学、粘附性、降解速率及药物释放性能等方面进行表征并筛选出最佳的水凝胶浓度。然后通过DPPH·、PTIO·自由基清除效率验证水凝胶的抗氧化能力。(2)体外细胞实验表征了HPTA水凝胶对嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PC12)细胞与雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的细胞行为的影响。并探究了HPTA水凝胶在高ROS条件下对细胞的保护作用。(3)体内动物实验利用大鼠坐骨神经挤压伤模型对该水凝胶的神经修复效果进行评价。将所有大鼠随机分组后进行造模,然后在术后2周与4周时通过大鼠的足印分析、神经电生理学测试、肌肉组织学分析、神经组织学评价、免疫蛋白荧光、免疫蛋白印迹及神经组织的炎症因子表达来评估大鼠下肢功能恢复效果并进一步探讨HPTA水凝胶对神经修复的影响。随后,我们在成功构建HPTA水凝胶的基础上加入甲钴胺(MeCbl),开发出新型的HPTA@MeCbl水凝胶。(1)先对HPTA@MeCbl水凝胶进行形态学、流变学、粘附性、体内、外降解性、MeCbl的释放等方面的表征,并将获得的结果与空白对照(HPTA)组进行对比。(2)在体外使用PC12细胞进行细胞活力、增殖、细胞活死染色等实验验证其细胞相容性。(3)最后,我们将HPTA@MeCbl水凝胶应用于大鼠坐骨神经横断伤的治疗。术后2个月时进行大鼠的足印分析、神经电生理Cadmium phytoremediation学测试、肌肉组织学分析、神经组织学评价、免疫蛋白染色等一系列实验来评价下肢功能恢复与坐骨神经再生情况。研究结果与结论:(1)本研究首先通过500 MHz氢谱质子核磁(1H NMR spectra)对HAPBA偶联物进行信息采集,图上的多重峰表明了苯硼酸基团成功地修饰到了透明质酸的分子链,并计算得到接枝率为:23.4%。合成HPTA水凝胶后,通过红外光谱分析(FTIR)可知位于1326 cm~(-1)处的特征峰主要归因于硼酸酯键(BOH)的拉伸震动,证明TA与HA-PBA偶联物成功交联形成水凝胶网络。随后对HPTA水凝胶的形貌、储能模量、粘附性、降解速率及释放性能进行表征,筛选出HPTA-3为最优的成胶浓度,并继续后续实验。当HPTA-3水凝胶在浓度为20mg/m L时,对DPPH·与PTIO·的自由基清除率分别达到(76.23±0.75%)与(66.95±0.13%),证实了HPTA-3优异的抗氧化能力。(2)随后在细胞实验中,HPTA-3水凝胶的抗氧化能力同样得到了体现。我们使用20mg/m L的HPTA-3水凝胶提取液与0.5m M的H_2O_2溶液混合后共孵育PC12细胞,细胞活力均大于80%,也说明了HPTA-3水凝胶可以有效消除细胞内ROS,以此来达到保护细胞免受ROS伤害的作用。体内降解实验的结果显示,在术后4周水凝胶附近的皮肤组织均未出现明显的炎症反应,说明HPTA-3水凝胶具有良好的体内生物安全性。体内动物实验通过步态分析、坐骨神经指数(SFI)、神经电生理测试、肌肉组织学、神经组织学、透射电镜(Transmission electron microscope,TEM)下观察的轴突直径与髓鞘厚度,以及4种特异性蛋白染色、ELISA法炎症因子表达和免疫蛋白印迹等实验结果证明了虽然HPTA-3治疗组与Sham组相比结果仍有差距,但相比于未进行水凝胶治疗的Crush组则取得了更好的结果。并且ELISA法测定神经组织的趋化因子,证明应用HPTA-3水凝胶可以上调抗炎因子水平并抑制促炎因子的表达,可以帮助神经组织损伤后巨噬细胞从M1表型向M2表型转型,也证实了HPTA-3的抗炎特性。通过对MBP与NF200的免疫蛋白印迹表达结果与免疫蛋白荧光染色相对应,再次证明了HPTA-3水凝胶可以有效地促进损伤后神经轴突的再髓鞘化及轴突再生。随后我们进一步在HPTA水凝胶基础上负载MeCbl合成可注射的HPTA@MeCbl水凝胶。(1)首先通过SEM对HPTA@MeCbl水凝胶进行微观形貌的观察可以发现MeCbl结晶沉积在水凝胶的网络结构中。然后我们对HPTA@MeCbl水凝胶进行了流变学、粘附性、降解性等一系列表征,并与未负载MeCbl的空白HPTA组进行对比,发现两组水凝胶在材料表征结果上并无显著差别,因此也说明MeCbl的加入对凝胶的交联度与硼酸酯键的形成没有干扰,不会对水凝胶的理化性质造成实质性改变。随后我们通过标准曲线回归方程:y=181.94x-0.1471对MeCbl的释放率进行计算,释放率在前6天增长快速,6-10天则明显放缓,HPTA@MeCbl水凝胶的这种释放规律有望在早期达到治疗所需浓度,可以更早地帮助受损神经进行修复。(2)我们通过细胞实验也证明HPTA@MeCbl水凝胶具有良好的细胞相容性,并且在与细胞共孵育48小时后可以观察到有明显的促进细胞增殖的作用。(3)最后将HPTA@MeCbl水凝胶进行坐骨神经横断伤的治疗。结果表明,与空白的HPTA组和Transection组相比HPTA@MeCbl组的结果更接近Sham组,治疗效果更好。值得注意的是术后2个月时NF200、Tuj-1的特异性蛋白染色的半定量分析结果显示HPTA@MeCbl组与Sham组的结果比较无统计学差异,也证明了HPTA@MeCbl水凝胶可以使神经轴突的再生效果明显提高,能够恢复到类似于正常神经组织的结果。综上所述,本研究成功构建了以TA作为交联剂的HA基动态多功能水凝胶,在未与其他治疗剂联合使用的情况下,HPTA水凝胶凭借自身抗氧化、抗炎作用可有效促进PNI后的神经修复。并且作为药物的递送载体,实现了MeCbl在神经组织损伤局部的持续性治疗,验证了这种“经典药物新用法”的可行性,对未来高性能神经损伤修复材料的设计和开发提供了新的思路与方向。

阿尔茨海默病（AD）是一种与年龄相关的神经退行性疾病，组织学常表现为Aβ斑块沉淀、神经纤维缠结、神经炎症的形成。小胶质细胞是中枢神经系统中的主要免疫细胞，生理情况下能够产生生长因子对神经元其营养支持作用，并清除神经元重塑过程中死亡的细胞碎片，参与神经环路的建立。病理条件下,小胶质细胞会吞噬具有毒性的细胞碎片保护神经元，并生成细胞因子修复周围细胞；同时有可能释放多种炎症介质，从而加重炎症反应。本文主要从以下几个方面介绍小胶质细胞在AD发病机制中的作用。(1)小胶质细胞对Aβ的吞噬作用。小胶质细胞能够释放多种酶降解Aβ,阻止Aβ沉淀和老年斑形成；其细胞表面存在的Aβ结合受体可以介导Aβ内吞和清Bucladesine试剂除；此外小胶质细胞表面高表达TREM2对小胶质细胞吞噬Aβ起关键性作用。而年龄增长导致神经细胞氧化水平上升，炎症因子释放增多，小胶质细胞被过度激活，其吞噬作用反而被抑制，从而导致Aβ沉积，最终引发AD。(2)小胶质细胞对Tau蛋白的影响。神经原纤维缠结是AD的主要病理特征之一,神经原纤维缠结是由于tau蛋白过度磷酸化所导致的。有研究表明激活的小胶质细胞可以加速神经原纤维缠结形成。(3)小胶质细胞与神Belnacasan经炎症。神经炎症是AD的病理特征之一。错误折叠的Aβ与小胶质细胞上相关受体结合,激活小胶质细胞,引发炎症介质Immune mechanism大量释放,包括TNF-α,IL-1β,IL-6,CCL2,CCR3和CCR5等，这些炎症因子破坏神经元功能，上调AD患者小胶质细胞中iNOS的表达，产生高浓度NO，对神经元造成损伤。

世界上盐碱水域资源广泛,但由于盐碱水域中水体成分复杂,许多淡水经济养殖品种无法生存,极大地限制了盐碱水域的开发利用。水生动物暴露在高碳酸盐碱度下会引起氧化应激,极大的影响了水生动物的正常生存与繁殖。本研究探讨了碳酸盐对中华绒螯蟹的胁迫机制,为盐碱水域养殖的持续开发提供了理论依据。本试验中,将中华绒螯蟹分为5个碳酸盐碱度处理组,分别是0 mmol/L、4.375 mmol/L、8.75 mmol/L、17.5 mmol/L、35 mmol/L组,每组3个重复,每个重复30只蟹,分别在24 h、48 h、96 h对中华绒螯蟹肝胰腺组织进行采样,研究碳酸盐碱胁迫对中华绒螯蟹肝胰腺组织氧化损伤、肝胰腺细胞超显微结构、MAPK通路相关基因表达、mTOR基因PR-171纯度表达和自噬相关基因表达的影响。本试验结果如下:1.中华绒螯蟹肝胰腺细胞的透射电镜结果显示,对照组中细胞膜完整,胞质中线粒体和内质网丰富,线粒体结构清晰,细胞间紧密连接清晰可见。而碱胁迫组中细胞膜严重变形,线粒体减少且线粒体出现脊断裂,核内异染色质增多,自噬溶酶体和自噬小泡增多,出现髓样结构。2.肝胰腺氧化应激指标酶结果显示,与对照组相比,在24 h和48 h时,各碱胁迫组抗氧化酶SOD、GSH、GSH-Px和T-AOC活性均呈现先升高后降低的趋势,MDA呈现先降低后升高的趋势,CAT活性随浓度增Docetaxel配制加而降低,显著低于对照组(P<0.05);在96 h时SOD、GSH-Px、T-AOC、CAT的活性随碱浓度升高而降低且显著低于对照组(P<0.05),而GSH和MDA的活性随浓度增加而升高且显著高于对照组(P<0.05)。3.肝胰腺MAPK通路基因表达结果显示,与对照组相比,各碱胁迫组的MAPK和P38的基因表达量在24、48、96 h时都显著升高(P<0.05),随浓度增加呈现逐渐升高的趋势,JNK的表达在48和96 h时也显著高于对照组且在96 h时呈现随浓度增加而升高的趋势(P<0.05)。4.肝胰腺mTOR基因表达水平结果显示,在24、48、96 h时各碱胁迫组的mTOR基因表达水平均显著低于对照组(P<0.05)。24 h时各碱胁迫组除35 mmol/LWestern Blotting组表达较低外,其他各碱胁迫组无显著差异(P>0.05),在48 h和96 h时表达结果相似,除8.75 mmol/L组外,其他各碱胁迫组间无显著差异(P>0.05)。5.肝胰腺自噬相关基因表达水平结果显示,各碱胁迫组自噬相关基因(ATG5、ATG7、ATG12和GABARAP)的表达在24、48和96 h都显著高于对照组(P<0.05),并且随着碳酸盐浓度的增加呈现逐渐上升的趋势。综上所述,以上结果表明,中华绒螯蟹在受到碳酸盐碱胁迫时,通过氧化应激诱导MAPK通路的激活,同时抑制mTOR的表达,从而致使中华绒螯蟹肝胰腺发生自噬。本试验所做的研究,将会改善盐碱地区的生态环境,同时有效的把荒芜水域资源利用起来,为我国渔业的可持续发展提供助力。