PDK1信号通路

目的 探究基于神经调节蛋白(NRG)1-表皮生长因子(ErbB)4通路下调半乳糖凝集素(Galectin)-3对老年大鼠精神分裂症的干预效果。方法 选取40只老年大鼠，分为对照组、模型组、上调组、下调组各10只，模型组、上调组、下调组建立精神分裂症模型，对照组不做处理。做Galectin-3转染，对上调组、下调组Forensic microbiology分别注射Galectin-3模拟物、Galectin-3抑制物，对照组、模型组注射同剂量的蒸馏水灌胃。做Galectin-3转染效率鉴定，对比各组刻板行为、共济失调评分、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及NRG1-ErbB4通路蛋白相对表达量。结果 与对照组相比，模型组、上调组、下调组Galectin-3表达量、刻板BYL719化学结构行为、共济失调评分、ROS、MDA水平明显上升，SOD水平明显下降(P<0.05);与模型组相比，上调组上述指标除SOD水平明显下降，其余均Nirmatrelvir体外显著上升，下调组上述指标除SOD水平显著上升，其余均显著下降(P<0.05);与上调组相比，下调组上述指标除SOD水平显著上升，其余均显著下降(P<0.05)。结论 精神分裂症大鼠经下调Galectin-3干预后异常行为活动及氧化应激指标水平得到改善，其机制可能与NRG1-ErbB4通路被抑制有关。

目的 探讨荆花胃康丸联合益气和胃胶囊治疗幽门螺杆菌(Hp)感染慢性胃炎患者的临床效果及安全性评估。方法 将2020年1月—2022年1月在该院消化内科治Potentailly inappropriate medications疗的108例Hp感染慢性胃炎患者按数字分组法分为两组，每组各54例，均使用常规抗Hp四联疗法，在此基础上，对照组使用益气和胃胶囊，观察组使用荆花胃康丸联合益气和胃胶囊，对比两组的BI 10773纯度临床疗效及Hp清除率、中医证候积分、血清炎性因子、胃肠激素、安全性指标。结果 观察组治疗有效率为96.30%(52/54),Hp清除率为87.04%(47/54),明显高于对照组的75.93%(41/54)、61.11%(33/54)(P<0.05);治疗后胃脘隐痛、胃脘痞胀、恶心呕吐、嗳气反酸、食少纳呆、神疲乏力等中医证候积分相比，观察组明显低于对照组(P<0.05);治疗后IL-1β、IL-6、IL-32、TGF-β1、TNF-α等炎性因子水平相比，观察组前三项明显低于对照组，最后一项明显高于对照组(P<0.05);治疗后GAS、SS、MTL、EGF等胃肠激素水平相比，观察组观察组第一项明显低于对照组，后三项均高于对照组(P<0.05);两组在腹胀、腹泻、皮疹、恶心呕吐等不良反应发生率上相当(P>0.05)。结论 荆花胃康丸联合益气和胃胶囊治疗Hp感染慢性胃炎患者的临床效果显著，能有效抗炎，调节胃肠激素水平，缓解中医证候，提高对Hp的清除力，且安全性好，不良反应较少，具BYL719核磁有积极的临床意义。

目的：探讨优势认知行为治疗（CL13900分子量SBCBT）干预模型对青少年抑郁患者心理弹性的干预效果。方法：本研究为随机对照临床试验。将89例青少年抑郁症患者随机分为研究组（44例)与对照组(45例)。对照组为单纯药物治疗,研究组在药物治疗基础上接受8次SBCBT干预。在治疗前后,采用青少年心理弹性量表(RSCA)、汉密尔顿抑郁量表（HAMD-17）、汉密尔顿焦虑量表（HAMA）对两组患者进行评估。结果：经过6周治疗，研究组RSCA总分显著高于治疗前（P<0.001）,selleck HPLCHAMD、HAMA评分显著低于治疗前（P<0.001）；对照组RSCA总分与治疗前无显著差异（P>0.05）,HAMD评分显著低于治疗前（P<0.0Image guided biopsy01）、HAMA评分低于治疗前（P<0.05）。治疗后研究组RSCA总分显著高于对照组（P<0.01）,HAMD、HAMA评分显著低于对照组（P<0.001）。RSCA总分差值与HAMD差值、HAMA差值均呈正相关（P<0.05）。结论：SBCBT能够提升青少年抑郁症患者的心理弹性，而心理弹性的提升可能是负性情绪得到进一步改善的原因。

目的研究核因子E2相关因子2（NuclearE2-relatedfactor2，Nrf2）靶点及线粒体质量控制系统调控姜三七挥发油（essentialoilfromStahlianthusinvolucratusrhizomes，EOSIR）对人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs）损伤的保护作用机制。方法用氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein，ox-LDL）诱导HUVECs建立细胞损伤模型，siRNA转染沉默Nrf2因子的表达，将培养好的细胞分为对照组、模型组、EOSIR组、转染组、转染阴性对照组，利用Westernblot及qRT-PCR检测Nrf2及其下游因子的蛋白及mRNA的表达；Griess法检测一氧化氮（nitricoxide，NO）含量；ELISA法分析人内皮素（Endothelin1，ET-1）、人前列环素（Prostacyclin，PGI2）的LGX818含量；线粒体质量检测实验中将细胞分为对照组、模型组、低剂量EOSIR组、中剂量EOSIR组、高剂量EOSIR组、阿司匹林阳性对照组，透射电镜观察HUVECs线粒体形态；Westernblot检测线粒体融合蛋白1（mitofusin1，Mfn1）、线粒体融合蛋白2（mitofusin1，Mfn2）、线粒体动力相关蛋白（dynamin-relatedprotein1，Drp1）、线粒体内膜融合蛋白（OpticAtrophy1，Opa1）、线粒体转录因子A（mitochondrialtranscriptionfactorA，TFAM）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（peroxisomeproliferatoractivatedreceptorγcoactivator-1α，PGC-1α）及轻链3A/B蛋白（LC3A/B）、泛素结合蛋白（P62Antineoplastic and I抑制剂）表达。结果 EOSIR组的Nrf2及stent graft infection其下游因子的表达水平、NO、PGI2的含量较模型组均显著升高，ET-1水平较模型组相比显著降低，转染沉默Nrf2后，EOSIR对上述指标的改善作用被抑制；透射电镜观察线粒体形态，EOSIR干预组自噬小体数量较模型组明显减少，线粒体形态恢复正常，同时，EOSIR组显著改善了ox-LDL引起的线粒体相关蛋白表达的变化（P<0.05）。结论 EOSIR可能通过激活Nrf2靶点及调控线粒体质量控制系统发挥对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用，延缓动脉粥样硬化的进程。

目的:探讨特发性膜性肾病(IMN)的临床病理特点及其纤维蛋白原(Fib)的临床意义，为防治IMN提供参考。方法:回顾性分析2020年1月至EPZ-6438使用方法2022年6月就诊于中国中医科学院西苑医院并经肾活检诊断为IMN的71例患者的临床及病理资料，包括一般情况、临床资料、实验genetic discrimination室检查指标、病理资料等。结果:71例患者慢性肾脏病(CKD)分期中，CKD 1期30例，CKD 2期30例，CKD 3～5期11例。与CKD 1期患者相比，CKD 2期及CKD 3～5期患Y-27632小鼠者尿素氮水平、肾小管萎缩及间质纤维化、肾间质炎症细胞浸润以及肾小球Fib沉积等临床病理表现上更为严重。结论:IMN患者发病以中老年为主，首发症状多表现为水肿；患者的年龄、尿素氮水平、肾小管萎缩及间质纤维化、肾间质炎症细胞浸润以及肾小球Fib沉积可能是肾功能进展及肾脏预后不良的危险因素，尤其应该重视Fib在其中的预后和治疗价值。

目的:为了探讨眼针带针康复治疗中风后上肢功能障碍的临床疗效和作用优势,为临床实践提供依据。方法:由长春中医药大学附属第三临床医院脑病康复科疗区筛选出符合纳排标准的中风患者,共72例,按照入院顺序编号,通过随机数字表法将患者编入眼针带针康复组(治疗组)、常规康复组(对照组),各36例。两组患者基于常规对症治疗,对照组采用康复疗法,治疗组在康复的基础上加入眼针疗法,每周连symbiotic cognition续治疗6天,休息1天,共治疗4周。治疗前后分别进行Fugl-Meyer评定上肢部分(FMA-UE)、WPLX-4720使用方法oFer-1作用lf上肢运动功能评分(WMFT)、改良Barthel指数(MBI)评估,并应用表面肌电图进行肱二、肱三头肌的均方根值(RMS)检测,采用统计学软件将所得临床数据进行处理,分析得出结论。结果:1.治疗前一般资料经分析无统计学差异(p>0.05),具有可比性。2.治疗过程中,共5例患者由于自身原因脱落,实际完成研究者治疗组34例,对照组33例。3.两组患者治疗前后的FMA-UE、WMFT、MBI评分和肱二、肱三头肌被动活动和主动活动RMS值均存在显著差异(p<0.05),具有统计学意义;治疗组和对照组相比,治疗后治疗组上述评定量表分数、RMS数值变化差异均高于对照组(p<0.05),具有统计学意义。结论:1.眼针带针康复疗法和常规康复疗法对于治疗中风后上肢功能障碍均有疗效。2.眼针带针康复治疗中风后上肢功能障碍临床疗效优于常规康复疗法,说明眼针与常规康复疗法结合可以更好地促进上肢功能恢复,提高日常生活能力。3.治疗过程中,患者无不良反应发生,一定程度上说明眼针带针康复疗法安全性高。

研究目的顺铂(cisplatin,DDP)是肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)两药联合化疗方案细胞毒作用的基础。然而,铂类耐药性的出现使许多患者不可避免地面临治疗失败。目前,成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)被认为是有希望的LUAD治疗的靶点。因此,迫切需要鉴定FGFR抑制剂在LUAD中的作用及其机制,以期为DDP耐药的患者提供新的治疗药物。根据是否共价结合于胞内酪氨酸激酶结构域ATP 口袋中的P环半胱氨酸,FGFR抑制剂分为可逆和不可逆FGFR抑制剂。可逆FGFR抑制剂Erdafitinib和Pemigatinib已分别获得食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准用于治疗转移性尿路上皮癌(metastatic urothelial carcinoma,mUC)和胆管癌。由于不可逆FGFR抑制剂具有更好的结合动力学和克服可逆FGFR抑制剂耐药的潜在能力,已成为更有前景的抗肿瘤药物。FIIN-2作为目前不可逆FGFR1-4抑制剂的代表性药物,可抑制包括肺鳞癌和大细胞癌在内的多种肿瘤细胞的增殖。然而,FIIN-2在LUAD中的疗效尚未得到系统性证实。自噬是细胞将受损、变性或衰老的蛋白质和细胞器运送至溶酶体进行降解的过程,在维持细胞代谢和内环境稳定等方面发挥重要作用。Beclin-1作为自噬的核心参与者,与B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)和Vps34等不同分子结合形成磷脂酰肌醇3-激酶催化亚单位3型(phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit type 3,PI3KC3)/Vps34-Beclin-1复合物,在自噬体的形成和成熟过程中发挥作用。自噬被诱导后,细胞质的微管相关蛋白 1 轻链 3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅰ 与膜表面的底物PE偶联形成膜结合的LC3-Ⅱ,即自噬体形成的标志。p62通过与自噬底物结合被自噬溶酶体降解。研究表明,自噬与肿瘤密切相关,具有抑制或促进肿瘤发展双重作用。自噬主要通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)或 Ⅲ 型磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)复合体激活而触发,FGFR下游PI3K/AKT是介导mTOR信号调控自噬的最经典途径。不可逆FGFR1-4抑制剂FIIN-2可通过阻断PI3K/AKT信号抑制包括肺癌在内的多种肿瘤细胞的生长,但FIIN-2的抗肿瘤作用是否与自噬有关目前尚无报道。在本研究中,我们利用具有代表性的人源LUAD A549及其DDP耐药的A549/DDP细胞系,探讨不可逆FGFR抑制剂FIIN-2的抗肿瘤作用,并阐述FIIN-2的抗LUAD作用与自噬的关系,以期为LUAD的治疗、特别是对DDP耐药的患者提供候选药物。研究方法1.使用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,H&E)染色分析肺癌患者肿瘤组织的病理学类型。采用免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)分析FGFR2在LUAD患者组织中的表达情况。通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测 A549 和 A549/DDP 细胞中FGFR1-4 信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达情况。随后,采用Western blot检测两种细胞中FGFR2及其下游信号蛋白磷酸化成纤维细胞生长因子受体(phosphorylate fibroblast growth factor receptor,p-FGFR)、FGFR 底物 2(FGFR substrate 2,FRS2)和磷酸化 FGFR 底物 2(phosphorylate FGFR substrate 2,p-FRS2)的表达水平。2.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同浓度DDP对A549和A549/DDP细胞活力的影响,计算DDP对两种细胞的IC50值及耐药指数(resistance index,RI)。并且通过 Western Blot 检测 A549 和 A549/DDP细胞中多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)的表达。3.通过CCK-8法检测不同浓度FIIN-2处理对A549和A549/DDP细胞增殖的影响,并计算FIIN-2对A549和A549/DDP细胞的IC50值。4.采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP 缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)荧光法评估 FIIN-2 对 A549 和 A549/DDP 细胞凋亡率的影响。通过JC-1染色检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的变化,并检测不同浓度的FIIN-2对线粒体凋亡途经的关键指标 Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋DS-3201 MW白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和凋亡效应蛋白cleaved Caspase-3的表达的影响。5.通过克隆形成实验检测FIIN-2对A549和A549/DDP细胞集落形成的影响。采用划痕法检测不同浓度的FIIN-2处理对A549和A549/DDP细胞迁移能力的影响,并通过Western Blot检测FIIN-2对A549和A549/DDP细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)、基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase-9,MMP9)表达的影响。6.利用Western Blot检测不同浓度FIIN-2对FGFR2及其下游p-FGFR、p-FRS2、p-AKT和p-ERK表达的影响,分析FIIN-2是否对FGFR2及其下游信号具有抑制作用。7.采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)法观察 FIIN-2 对 A549 和 A549/DDP 细胞自噬特性的影响。通过Western Blot检测FIIN-2对自噬相关蛋白(Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62)表达的影响。8.通过Western Blot检测氯喹(Chloroquine,CQ)阻断自噬通量后FIIN-2对A549和A549/DDP细胞中自噬通量的影响。采用mRFP-GFP-LC3慢病毒载体感染A549和A549/DDP细胞,构建稳定表达mRFP-GFP-LC3的细胞系;通过激光共聚焦显微镜观察自噬体(黄色荧光)和自噬溶酶体(红色荧光)的数量,进一步验证FIIN-2对自噬通量的影响。9.为了研究FIIN-2是否通过抑制mTORC1信号发挥抗LUAD和诱导自噬作用,采用Western Blot检测FIIN-2对p-mTOR的影响;并用mTOR激活剂MHY1485单独或与FIIN-2联合处理细胞,CCK-8法检测细胞活力、Western Blot检测促凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase-3和自噬标记物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。采用AKT激活剂SC79或ERK激活剂LM22B-10单独或与FIIN-2联合处理细胞,Western Blot分别检测AKT/mTORC1信号蛋白(AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR)和 ERK/mTORC1 信号蛋白(ERK、p-ERK、mTOR、p-mTOR)的表达,探讨FIIN-2介导的mTORC1抑制是否与AKT和ERK信号有关。10.采用 Western Blot 检测 FIIN-2 对 Ⅲ 型 PI3K 复合体中 Vps34 和 Beclin-1 的影响supporting medium,并且进一步采用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FIIN-2对Beclin-1和Vps34的影响。通过FIIN-2联合或不联合mTOR激活剂MHY1485 处理细胞,Western Blot 检测 mTOR、p-mTOR、Beclin-1、Vps34和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的变化,鉴定FIIN-2是否通过抑制mTORC1进而激活Ⅲ型PI3K通路诱导自噬。11.采用Western Blot检测FIIN-2处理不同时间自噬与细胞凋亡相关蛋白的变化,阐明FIIN-2诱导的自噬与凋亡之间的关Baf-A1 MW系。进一步,为了确定抑制自噬是否增强FIIN-2介导的细胞毒性,采用早期自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)或晚期自噬抑制剂CQ单独或与FIIN-2联合处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,并且用Western Blot检测促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。12.建立A549和A549/DDP细胞皮下异种移植瘤模型。两种模型裸鼠均分为四组分别用生理盐水、CQ、FIIN-2、CQ联合FIIN-2进行干预。小鼠处死后获取肿瘤组织,IHC分析增殖(Ki67)、凋亡(cleaved Caspase-3)和自噬(LC3)相关分子的表达情况;TUNEL法检测凋亡率;Western Blot检测凋亡(cleaved Caspase-3)、自噬(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62)标记物及 p-FRS2 信号通路。研究结果1.FGFR2在LUAD中高表达IHC结果显示,19例LUAD患者组织中均表达FGFR2,其中9例(47.37%)为FGFR2高表达。RT-qPCR检测结果发现,A549和A549/DDP细胞在mRNA水平均表达FGFR1-4,且FGFR2的mRNA水平相对较高。Western Blot结果显示,A549 与 A549/DDP 细胞均持续表达 FGFR2,且 FGFR2、p-FGFR 及 p-FRS2在A549/DDP细胞中的表达水平均高于A549细胞。2.A549/DDP相对A549亲本细胞的DDP耐药性鉴定CCK-8结果显示,DDP对A549/DDP细胞的细胞活力和IC50值明显高于A549细胞,分别为(122.01±28.52)μmol/L 和(7.76±3.39)μmol/L。A549/DDP 细胞相对于其亲本A549细胞对DDP的RI为15.7,并表现出相对较高的MDR1表达。3.FIIN-2抑制A549和A549/DDP细胞增殖并诱导线粒体介导的细胞凋亡CCK-8结果显示,FIIN-2剂量依赖性地降低A549和A549/DDP的细胞活力,并且FIIN-2对A549/DDP细胞的IC50值明显低于A549,分别为(16.3±0.4)μmol/L和(31.3±0.2)μmol/L。TUNEL染色和FCM评估细胞凋亡均显示,FIIN-2剂量依赖性诱导了 A549和A549/DDP的细胞凋亡。JC-1染色检测MMP发现,FIIN-2处理24h可使细胞中聚集体JC-1/单体JC-1的比例降低。Western Blot结果显示,FIIN-2剂量依赖性地降低抗凋亡蛋白Bcl-2的水平并增加促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase-3的表达,并且FIIN-2促进A549/DDP细胞凋亡的作用更为明显。4.FIIN-2抑制A549和A549/DDP细胞的集落形成和迁移能力结果显示,FIIN-2处理可以显著降低两种细胞的集落形成能力,并且在A549/DDP细胞中下降尤为显著。此外,FIIN-2处理24h或48h,A549和A549/DDP细胞的迁移能力均明显降低,并显著抑制A549和A549/DDP细胞迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达。5.FIIN-2抑制A549和A549/DDP细胞的FGFR2及其下游信号Western Blot结果显示,FIIN-2处理后,A549和A549/DDP细胞中FGFR依赖性信号蛋白p-FGFR、p-FRS2、p-AKT和p-ERK的表达均显著降低,且呈现剂量依赖性。此外,FIIN-2对A549/DDP细胞中p-AKT信号的抑制能力明显高于A549细胞。6.FIIN-2增加A549和A549/DDP细胞的自噬特性TEM 结果显示,用 10 μmol/L FIIN-2 处理 24h,A549 和 A549/DDP 细胞中自噬溶酶体的数量均明显增加。通过MDC法观察到,FIIN-2可以剂量依赖性地增加A549和A549/DDP细胞中酸性自噬囊泡的数量。Western Blot显示,FIIN-2增加了 Parkin的表达和LC3-II的积累,而p62的表达减少。并且上述现象在A549/DDP细胞中比在A549细胞中更明显。7.FIIN-2诱导A549和A549/DDP细胞的自噬通量我们用CQ阻断自噬溶酶体降解以确定FIIN-2对自噬通量的影响,结果发现FIIN-2联合CQ进一步增加了 FIIN-2诱导的LC3水平;同时,FIIN-2单药及其与CQ联合均降低了 p62的水平。进一步用FIIN-2处理稳定表达mRFP-GFP-LC3的A549和A549/DDP细胞系,结果显示,细胞中自噬体和自噬溶酶体的数量均明显增加。8.FIIN-2通过抑制AKT/ERK-mTORC1信号发挥抗LUAD和诱导自噬作用结果显示,FIIN-2抑制p-mTOR(ser2448)的表达,说明FIIN-2抑制了mTORC1的活性,并且对A549/DDP细胞的抑制能力明显高于A549细胞。mTOR激活剂MHY1485可以抵抗FIIN-2的抑制细胞活力及其诱导的凋亡和自噬作用。AKT激活剂SC79和ERK激活剂LM22B-10可分别抵抗FIIN-2对p-AKT和p-ERK的抑制作用,同时上调p-mTOR(ser2448)的表达。9.FIIN-2通过抑制mTORC1进而激活Ⅲ型PI3K通路诱导自噬结果显示,FIIN-2剂量依赖性上调Beclin-1和Vps34的表达,并且在A549/DDP细胞中上调尤为明显。进一步的Co-IP结果显示,FIIN-2促进了Beclin-1募集更多的Vps34。但是,mTOR激活剂MHY1485可以显著抵抗FIIN-2对p-mTOR(ser2448)的抑制作用,并降低了 Beclin-1、Vps34的表达和LC3-Ⅱ的积累。10.抑制自噬增强FIIN-2对A549和A549/DDP细胞的细胞毒性Western Blot 结果发现,FIIN-2 处理 A549、A549/DDP 细胞 6h 后可以使 LC3-Ⅱ的表达上调并在24h达到峰值,同时伴随着p62的下调;在A549细胞被处理12h、A549/DDP细胞被处理24h后,cleaved Caspase-3和Bax随着处理时间的延长而上调,同时伴随着Bcl-2的下调。另外,早期自噬抑制剂3-MA或晚期自噬抑制剂CQ单独使用都不会影响A549和A549/DDP细胞的活力。然而,FIIN-2联合3-MA或CQ均显著增加了 FIIN-2对细胞活力的抑制作用。更为重要的是,FIIN-2和3-MA/CQ共同处理也显著增加了促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase-3的表达。11.联合自噬抑制剂增强FIIN-2的体内抗LUAD作用体内实验发现,在A549和A549/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型中,FIIN-2处理均可抑制肿瘤的生长,表现为肿瘤体积和重量明显减少,而FIIN-2联合CQ处理发挥更为明显的抑制肿瘤作用。IHC结果显示,FIIN-2可抑制Ki67的表达,且FIIN-2联合CQ抑制Ki67的效果更为明显。TUNEL染色显示,FIIN-2组细胞凋亡率明显增加,联合CQ组细胞凋亡率进一步升高,并伴有cleaved Caspase-3的上调。同时,联合CQ进一步增加了 FIIN-2对p-FRS2的抑制作用。另外,FIIN-2增加了 LC3水平并降低了 p62的丰度,并且联合CQ进一步增加了 LC3水平。结论1.不可逆FGFR抑制剂FIIN-2可通过抑制FRS2-AKT/ERK-mTORC1信号发挥抗LUAD作用,表现为可抑制A549和A549/DDP细胞的增殖、集落形成、迁移和诱导线粒体途径的细胞凋亡。2.FIIN-2可通过抑制mTORC1进而激活Ⅲ型PI3K复合体诱导A549和A549/DDP细胞发生促生存自噬。3.FIIN-2诱导细胞凋亡持续的时间比自噬长,从而可以克服保护性自噬的作用,导致LUAD细胞死亡。因此,联合自噬抑制剂在体内和体外均可以增强FIIN-2的细胞毒作用。4.FIIN-2对A549/DDP细胞的抗LUAD及诱导自噬作用明显高于A549细胞,这与其更明显地抑制A549/DDP细胞中AKT-mTORC1信号有关。

目的 全面评估代谢综合征（MetS）及其组分与肾功能损害[患慢性肾脏疾病（CKD）和肾小球滤过率（eGFR）下降]之间的关联。方法 基于2013—2018年北京市某Laduviglusib临床试验医院健康体检数据，使用Cox比例风险模型研究MetS及其组分与CKD发生之间的风险比（HR）和95%置信区间（95%CI），使用线性混合效应模型研究MetS及其Inflammation and immune dysfunction组分与eGFR降低之间的关联。结果 在为期6年的随访中，有2 082名研究对象纳入研究，研究期间有186例CKD事件的发生。调整混杂因素后，MetS(HR=0.75, 95%CI:0.53～1.07),MetS的不同组分TG升高（HR=1.03, 95%CI:0.74～1.42）、HDL-C降低（HR=0.94, 95%CI:0.66～1.34）、血压升高（HR=1.11,95%CI:0.81～1.51）、中心性肥胖（HR=0.95, 95%CI:0.65～1.39）、高血糖（HR=0.71,95%CI:0.45～1.13），以及MetS组分数1项（HR=1.30, 95%CI:0.80～2.12）、2项（HR=1.39, 95%CI:0.84～2.31）、3项（HR=0.89, 95%CI:0.50～1.58）selleck激酶抑制剂、4项（HR=1.36, 95%CI:0.71～2.60）、5项（HR=0.55, 95%CI:0.16～1.87）都不是CKD发病的危险因素（P>0.05）。MetS、血压升高和高血糖分别导致eGFR降低0.87(β=0.87, 95%CI:0.20～1.54),1.31(β=1.31,95%CI:0.77～1.84)和0.93(β=0.93, 95%CI:0.02～1.84)ml/(min·1.73m~2)，合并MetS组分项数1～5分别导致eGFR降低2.29(β=2.29, 95%CI:0.48～4.10)、2.38(β=2.38, 95%CI:0.54～4.23)、2.87(β=2.87, 95%CI:0.99～4.74)、3.76(β=3.76, 95%CI:1.84～5.67)和3.78(β=3.78, 95%CI:1.80～5.76)ml/(min·1.73m~2)。结论 调整混杂因素后，在成年人群中，MetS不是CKD发病的独立危险因素，不同MetS组分及组分数对CKD发生也无重要影响；血压升高和高血糖两种MetS组分以及MetS是eGFR下降的独立危险因素，且eGFR的下降程度随着MetS组分数的增加而增加。

金黄色葡萄球菌是人畜共患病原体,可导致多种畜禽的皮肤软组织感染、肺炎和乳腺炎等疾病。近年来,随着抗生素的大量应用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的检出率不断增加,表现出多重耐药性,给MRSA感染的临床防治带来极大挑战。更为严重的是,MRSA极易形成生物被膜,不仅增强了对抗菌药物的耐药性,逃避宿主免疫应答反应,且在体内可作为潜在的感染源,释放游离细菌造成慢性感染,反复发作,难以治愈。同时,其诱发产生的持续炎症反应会损害周围的软组织,严重可能导致并发症。因此,开发新型的抗菌药物或治疗策略代替传统抗生素,在清除生物被膜的同时有效缓解炎症,对于临床MRSA生物被膜感染治疗具有重要意义。中药活性成分是新型“替抗”药物研发的重要来源。异甘草素(ISL)是甘草中的查尔酮类活性成分,前期研究发现,异甘草素具有优异的抗菌和抗炎活性,是治疗MRSA感染的潜在药物。然而,异甘草素溶解性差,生物利用度低,且与传统抗生素相比,药效相对较低,限制了其在抗炎及抗菌方面的应用。以纳米制剂为基础的纳米药物递送体系可增加药物溶解度,是实现药物增效减毒,高效利用的有效手段。其中,具有抗菌活性的阳离子纳米载体,不仅可实现抗菌药物的靶向输送,而且可与抗菌药物联合作用,增加抗菌效果。然而,阳离子纳米药物递送体系会与生物被膜中带负电的胞外基质组分相互作用,阻碍其在生物被膜内部的渗透与扩散,无法有效清除生物被膜。鼠李糖脂(RHL)是一种生物相容性好的生物类表面活性剂,能够通过破坏生物被膜胞外基质来分散生物被膜,促进抗菌药物的渗透。综上,本研究选用具有良好生物相容性和生物降解性的天然阳离子多糖壳聚糖纳米粒作为载体担载异甘草素,并通过鼠李糖脂进行修饰,制备担载异甘草素的鼠李糖脂-壳聚糖纳米粒(ISL@RHL-COS),通过体内外试验研究其缓解感染部位炎症,清除MRSA生物被膜,抑制残留细菌再黏附的作用,阐明其作用机制,具体研究结果如下:(1)通过一锅法成功制备了担载异甘草素的鼠李糖脂修饰的壳聚糖纳米粒ISL@RHLCOS,确定了最佳制备条件。制备所得ISL@RHL-COS呈椭圆形,粒径大小为136.7±0.86nm,zeta电位为32±1 m V,异甘草素的包封率与载药量分别为74.9±2.3%和5±0.12%。与壳聚糖纳米粒相比,RHL-COS的稳定性明显增加,并且可实现在酸性环境下响应性的释放异甘草素。(2)ISL@RHL-COS显著增加了ISL的抗MRSA效果,对MRSA的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别降低近4倍和10倍。ISL@RHL-COS可与MRSA发生团聚作用,通过增强细胞膜通透性,破坏细菌细胞膜,降低菌体核酸含量及可溶性蛋白种类和含量等途径,进而影响到细菌DNA复制、转录和翻译过程起到抗MRSA作用。(3)ISL@RHL-COS通过降低胞外基质中胞外多糖与胞外蛋白含量分散生物被膜。通过激光共聚焦定性和活/死染色试验表明,ISL@RHL-COS可有效渗透到生物被膜内部,并杀灭生物被膜内部MRSA。在异甘草素剂量为120μg/m L,ISL@RHL-COS可完全清除生物被膜。(4)通过药物-细菌-细胞互作模型研究了ISL@RHL-COS对细菌进入机体后发生初始黏附的抑制作用。根据细胞存活率和细菌黏附率确定出最佳感染复数为50 MOI。与模型组相比,ISL@RHL-COS在7.5μg/m L时可有效抑制细菌在细胞上发生黏附。(5)ISL@RHL-COS可显著下调LPS诱导的M1型巨噬细胞中促炎因子NO、TNF-α和IL-6水平,证明ISL@RHL-COS具有较高的抗炎能力。(6)建立小鼠皮下脓肿模型,研究纳米粒体内抗菌试验,结果显示,与ISL和RHL-COS相比,ISL@RHL-COS能有效促进脓肿部位伤口愈合,降低TNF-α和IF-6的含量,并显著降低感染部位MRSA的存活率。此外,成功建立小鼠皮下植入物MRSA生物被膜感染模型,经ISL@RHL-COS治疗后,可高效清除植入的导管表面成熟的生获悉更多物被膜,有效改善感染组织周围的炎性症状。综上,本论文制备了集“破坏生物被膜-杀灭膜内外细菌-抑制残留细菌再黏附-缓解炎症促组织再生”为一体的多功能纳米体系(ISL@RHL-COS),该纳米体系具有较高的安全性和稳定性,可主动靶向细菌,并p H响应性释放异甘草素,同Blood-based biomarkers时释放的鼠李糖脂可分解生物被膜胞外基质从而促进纳米粒在生物被膜的渗透与扩散,彻底清除生物被膜,并抑制残留细菌再黏附,缓解感染部位炎症,实现安全、高效的MRSA生物被膜感染治疗。本研究针对MRSA生物被膜的耐药机制及生长过程,利用中药单体实现了MRSA生物被膜感染的高效治疗,为中药单Imidazole ketone erastin采购体的高效应用提供了新思路,为控制畜禽动物源细菌的耐药性及生物被膜相关的感染问题提供新途径和新方法。

由于伴胆道癌栓(BDTT)的肝细胞癌(HCC)患者的手术预后与普通肝癌患者相比有显著的差异，因此胆管癌栓的术前诊断在临床上十分重要。虽然扩张的胆管(DBSpectroscopyDs)可以作为诊断胆道癌栓的生物标志物，但医生在报告影像学扫描结果时很容易将其忽视，导致临床上对胆道癌栓存在较高的漏诊率。本文的目CL 318952分子量的是开发一种基于医学影像的自动化诊断胆道癌栓的人工智能(AI)框架。本文提出的CB-839采购AI框架包括两个阶段。首先，采用目标检测神经网络Faster R-CNN来识别扩张胆管；然后，如果被识别出存在扩张胆管的图像的比例超过某个阈值，则诊断肝癌患者体内存在胆道癌栓。基于从32名肝癌患者(16名伴胆道癌栓患者和16名普通肝癌患者，1∶1匹配)收集到的2354张CT图像，所提出的AI诊断框架在扩张胆管识别层面上实现了0.92的平均真阳率，在伴胆道癌栓患者诊断层面上实现了0.81的真阳率。本文所提方法在伴胆道癌栓患者诊断层面上的AUC值为0.94 (95%CI:0.87,1.00)，相比之下，基于术前临床变量进行诊断的随机森林取得的AUC值为0.71(95%CI:0.51,0.90)。在实际数据集上取得的高精度结果表明，本文提出的基于CT图像的AI框架在诊断和定位胆道癌栓方面是成功的。