PDK1信号通路

金黄色葡萄球菌是人畜共患病原体,可导致多种畜禽的皮肤软组织感染、肺炎和乳腺炎等疾病。近年来,随着抗生素的大量应用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的检出率不断增加,表现出多重耐药性,给MRSA感染的临床防治带来极大挑战。更为严重的是,MRSA极易形成生物被膜,不仅增强了对抗菌药物的耐药性,逃避宿主免疫应答反应,且在体内可作为潜在的感染源,释放游离细菌造成慢性感染,反复发作,难以治愈。同时,其诱发产生的持续炎症反应会损害周围的软组织,严重可能导致并发症。因此,开发新型的抗菌药物或治疗策略代替传统抗生素,在清除生物被膜的同时有效缓解炎症,对于临床MRSA生物被膜感染治疗具有重要意义。中药活性成分是新型“替抗”药物研发的重要来源。异甘草素(ISL)是甘草中的查尔酮类活性成分,前期研究发现,异甘草素具有优异的抗菌和抗炎活性,是治疗MRSA感染的潜在药物。然而,异甘草素溶解性差,生物利用度低,且与传统抗生素相比,药效相对较低,限制了其在抗炎及抗菌方面的应用。以纳米制剂为基础的纳米药物递送体系可增加药物溶解度,是实现药物增效减毒,高效利用的有效手段。其中,具有抗菌活性的阳离子纳米载体,不仅可实现抗菌药物的靶向输送,而且可与抗菌药物联合作用,增加抗菌效果。然而,阳离子纳米药物递送体系会与生物被膜中带负电的胞外基质组分相互作用,阻碍其在生物被膜内部的渗透与扩散,无法有效清除生物被膜。鼠李糖脂(RHL)是一种生物相容性好的生物类表面活性剂,能够通过破坏生物被膜胞外基质来分散生物被膜,促进抗菌药物的渗透。综上,本研究选用具有良好生物相容性和生物降解性的天然阳离子多糖壳聚糖纳米粒作为载体担载异甘草素,并通过鼠李糖脂进行修饰,制备担载异甘草素的鼠李糖脂-壳聚糖纳米粒(ISL@RHL-COS),通过体内外试验研究其缓解感染部位炎症,清除MRSA生物被膜,抑制残留细菌再黏附的作用,阐明其作用机制,具体研究结果如下:(1)通过一锅法成功制备了担载异甘草素的鼠李糖脂修饰的壳聚糖纳米粒ISL@RHLCOS,确定了最佳制备条件。制备所得ISL@RHL-COS呈椭圆形,粒径大小为136.7±0.86nm,zeta电位为32±1 m V,异甘草素的包封率与载药量分别为74.9±2.3%和5±0.12%。与壳聚糖纳米粒相比,RHL-COS的稳定性明显增加,并且可实现在酸性环境下响应性的释放异甘草素。(2)ISL@RHL-COS显著增加了ISL的抗MRSA效果,对MRSA的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别降低近4倍和10倍。ISL@RHL-COS可与MRSA发生团聚作用,通过增强细胞膜通透性,破坏细菌细胞膜,降低菌体核酸含量及可溶性蛋白种类和含量等途径,进而影响到细菌DNA复制、转录和翻译过程起到抗MRSA作用。(3)ISL@RHL-COS通过降低胞外基质中胞外多糖与胞外蛋白含量分散生物被膜。通过激光共聚焦定性和活/死染色试验表明,ISL@RHL-COS可有效渗透到生物被膜内部,并杀灭生物被膜内部MRSA。在异甘草素剂量为120μg/m L,ISL@RHL-COS可完全清除生物被膜。(4)通过药物-细菌-细胞互作模型研究了ISL@RHL-COS对细菌进入机体后发生初始黏附的抑制作用。根据细胞存活率和细菌黏附率确定出最佳感染复数为50 MOI。与模型组相比,ISL@RHL-COS在7.5μg/m L时可有效抑制细菌在细胞上发生黏附。(5)ISL@RHL-COS可显著下调LPS诱导的M1型巨噬细胞中促炎因子NO、TNF-α和IL-6水平,证明ISL@RHL-COS具有较高的抗炎能力。(6)建立小鼠皮下脓肿模型,研究纳米粒体内抗菌试验,结果显示,与ISL和RHL-COS相比,ISL@RHL-COS能有效促进脓肿部位伤口愈合,降低TNF-α和IF-6的含量,并显著降低感染部位MRSA的存活率。此外,成功建立小鼠皮下植入物MRSA生物被膜感染模型,经ISL@RHL-COS治疗后,可高效清除植入的导管表面成熟的生获悉更多物被膜,有效改善感染组织周围的炎性症状。综上,本论文制备了集“破坏生物被膜-杀灭膜内外细菌-抑制残留细菌再黏附-缓解炎症促组织再生”为一体的多功能纳米体系(ISL@RHL-COS),该纳米体系具有较高的安全性和稳定性,可主动靶向细菌,并p H响应性释放异甘草素,同Blood-based biomarkers时释放的鼠李糖脂可分解生物被膜胞外基质从而促进纳米粒在生物被膜的渗透与扩散,彻底清除生物被膜,并抑制残留细菌再黏附,缓解感染部位炎症,实现安全、高效的MRSA生物被膜感染治疗。本研究针对MRSA生物被膜的耐药机制及生长过程,利用中药单体实现了MRSA生物被膜感染的高效治疗,为中药单Imidazole ketone erastin采购体的高效应用提供了新思路,为控制畜禽动物源细菌的耐药性及生物被膜相关的感染问题提供新途径和新方法。

由于伴胆道癌栓(BDTT)的肝细胞癌(HCC)患者的手术预后与普通肝癌患者相比有显著的差异，因此胆管癌栓的术前诊断在临床上十分重要。虽然扩张的胆管(DBSpectroscopyDs)可以作为诊断胆道癌栓的生物标志物，但医生在报告影像学扫描结果时很容易将其忽视，导致临床上对胆道癌栓存在较高的漏诊率。本文的目CL 318952分子量的是开发一种基于医学影像的自动化诊断胆道癌栓的人工智能(AI)框架。本文提出的CB-839采购AI框架包括两个阶段。首先，采用目标检测神经网络Faster R-CNN来识别扩张胆管；然后，如果被识别出存在扩张胆管的图像的比例超过某个阈值，则诊断肝癌患者体内存在胆道癌栓。基于从32名肝癌患者(16名伴胆道癌栓患者和16名普通肝癌患者，1∶1匹配)收集到的2354张CT图像，所提出的AI诊断框架在扩张胆管识别层面上实现了0.92的平均真阳率，在伴胆道癌栓患者诊断层面上实现了0.81的真阳率。本文所提方法在伴胆道癌栓患者诊断层面上的AUC值为0.94 (95%CI:0.87,1.00)，相比之下，基于术前临床变量进行诊断的随机森林取得的AUC值为0.71(95%CI:0.51,0.90)。在实际数据集上取得的高精度结果表明，本文提出的基于CT图像的AI框架在诊断和定位胆道癌栓方面是成功的。

目的：整理分析中医药治疗幽门螺杆菌（Hp）感染性胃病的用药规律，为临床治疗该病提供参考。方法：检索中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据知识服务平台（Wan Fang）、维普网（VIP）数据库2012年3月至2022年3月中医药治疗Hp感染性胃病的相关文献，并建立数据库。应用频率、关联规则、聚类分析等方法对其治疗规律进行统计分析。结果：共筛选出124首方剂，包含中药132味，其中，黄连、白芍、蒲公英、黄芪使用频次最多；最常用的是补虚药，且用量偏大，清热药使用频次位居第二；药味以苦、甘为主；药性寒、温居多，归经是以BI 10773分子式脾经、胃经最点击此处多；关联组合得到11个具有高相关性的药物；根据聚类方法，可把这些药品归入3大类别。结论：Hp感染性胃病的中医治疗多以补虚药、清热药为主Biopsia líquida，而且多与药味甘、苦，药性温、寒，归经为脾、胃经的药物搭配使用，对治疗幽门螺杆菌感染性胃病的遣方用药具有一定的参考意义。

目的 研究ANKRD49(ankyrin repeat domain 49)对人肺腺癌细胞NCI-H1299迁移能力的影响及其机制。方法将携带ANKRD49基因的慢病毒载体及针对ANKRD49的shRNA感染NCI-H1299细胞，构建稳定过表达与敲低ANKRD49的细胞模型，同时分别构建感染空白序列慢病毒载体和无意义shRNA序列慢病毒载体的对照细胞模型。采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测ANKRD49 mRNA和蛋白表达水平；细胞划痕试验检测ANKRD49对细胞迁移能力的影响；实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2/9及基质金属蛋白酶C59使用方法组织抑制因子（tissue inhibitor of metoncologic outcomealloprotease,TIMP）-1/2 mRNA及蛋白表达水平；Western blot法检测p65、p-p65、IκBα和p-IκBα蛋白表达水平。结果 ANKRD49过表达组细胞中ANKRD49 mRNA和蛋白水平均显著高于对照组（t分别为70.02和45.68,P均<0.001）。与对照组相比，ANKRD49过表达组细胞24和48 h的迁移能力明显升高（t分别为5.343和3.282,P分别为0.005 9和0.030 4）;MMP-2和MMP-9 mRNA转录水平及蛋白表达水平均明显升高（t分别为9.304和6.193,P分别为0.000 7和0.003 5）,TIMP-1和TIMP-2 mRNA转录水平及蛋白表达水平均明显下降（t分别为3.858和3.517,P分别为0.018 2和0.024 5）,MMP-2/TIMP-1和MMP-9/TIMP-2值明显升高（t分别为17.7和9.682,P分别<0.0www.selleck.cn/products/PD-033299101和<0.01）;p-p65和p-IκBα蛋白表达水平明显升高，p65和IκBα总蛋白水平无明显变化，p-p65/p65、p-IκBα/IκBα值明显增高（t分别为3.962和5.370,P分别为0.016 7和0.005 8）。ANKRD49敲低后结果均与过表达结果相反。结论 ANKRD49通过激活NF-κB/p65信号通路增加MMP-2/9的表达及提高MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2值来促进NCI-H1299细胞的迁移。

目的：探究丹皮酚是否通过调节真杆菌属介导的G蛋白胆汁酸偶联受体5（TGR5）/蛋白激酶A（PKA）/cAMP反应结合元件（CREB）信号通路对酒精性肝损伤小鼠发挥保护作用。方法：将C57BL/6小鼠随机确认细节分成5组：正常组、模型组、丹皮酚组（480 mg·kg~(-1)）、抗生素组（Abs组）和抗生素+丹皮酚组。Lieber-DeCarli液体饲料喂养C57BL/6小鼠造模第2天起灌胃给药，连续10 d。测定小鼠血脂、肝功能、炎症因子及氧化应激水平，通过苏木素-伊红（HE）染色法和油红O染色观察肝脏组织形态变化和脂肪堆积情况，采用16S rDimmune-epithelial interactionsNA测序检测空白组、模型组和丹皮酚组小鼠肠道菌群多样性变化，Western blot检测丹皮酚对小鼠回肠组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)和G蛋白胆汁酸偶联受体5（TGR5）/蛋白激酶A（PKA）/cAMP反应结合元件（CREB）信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果：相较于空白组，模型组小鼠的血脂、肝功能、氧化应激水平，炎症因子的表达升高（P＜0.01），肝脏脂肪空泡明显，回肠黏膜损伤严重，且回肠组织中ZO-1、Claudin-1和TGR5/PKA/CREGlucagon Receptor抑制剂B蛋白含量显著下降（P＜0.01），肠道菌群发生改变，变形菌门明显增多，拟杆菌门与厚壁菌门的比值降低；杜氏杆菌属、乳杆菌属、双歧杆菌属等菌属相对丰富度降低，埃希氏-志贺氏菌属、摩根氏菌属、普罗维登斯菌属、变形杆菌属的相对丰度显著增加。与模型组比较，丹皮酚明显降低了酒精饲料诱导的肝损伤小鼠的血脂、肝功能、氧化应激水平，炎症因子的表达（P＜0.05），减少肝脏脂肪空泡，改善并恢复了回肠肠道屏障，恢复了肝细胞和回肠细胞正常结构。改善了由酒精引起的肠道菌群紊乱的情况，使真杆菌属等有益菌属相对丰富度增加。回肠组织中ZO-1、Claudin-1、TGR5/PKA/CREB蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论：丹皮酚对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用，作用机制是通过调节真杆菌属介导的TGR5/PKA/CREB信号通路达到抗炎效果和改善肠道屏障来实现的。

目的 探究牡荆素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的保护作用MC3及其调控机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素（3、6、12 mg/kg），及牡荆素（12 mg/kg）+EX527(5 mg/kg)组，每组各10只。除对照组外，其余各组大鼠均采用卵清白蛋白诱导建立变应性鼻炎大鼠模型，模型构建成功后，各组大鼠ip相应剂量药物，对照组和模型组大鼠ip等量的生理盐水，1次/d，连续14 d。末次给药结束后30 min，记录各组大鼠行为学评分，观察鼻黏膜组织病理形态学变化；检测鼻黏膜组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）、丙二醛（MDA）、活性氧气簇（ROS）、铁离子（Fe~(2+)）水平，铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)以及沉默信息调节因子1(Sirt1)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、p-FoxO1、Ac-FoxO1蛋白表达。结果 与模型组相比，牡荆素各剂量组大鼠行为学评分均显著降低，鼻黏膜损伤显著改善（P<0.05）；大鼠鼻黏膜组织匀浆SOD、GSH活性显著升高，MDA、ROS、Fe~(2+)含量均显著降低（P<0.05）；大鼠鼻黏膜组织SLC7A11、GPX4、Sirt1、FoxOPanobinostat1蛋白表达显著升高，p-Fprecise medicineoxO1、Ac-FoxO1、ACSL4蛋白表达显著降低（P<0.05），且呈剂量相关性。结论 牡荆素能够改善变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤，其机制与激活鼻黏膜组织Sirt1/FoxO1通路，抑制细胞铁死亡有关。

目的 观察解幽汤中药四联疗法治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的临床疗效。方法 选取符合纳入标准的174例胃镜检查为慢性胃炎且伴有上腹痛、嗳气、腹胀等消化系统症状Hp阳性的患者，随机分成治疗组和对照组，各87例。治疗组采用解幽汤联合标准三联疗法；对照组采用含铋剂四联疗法，皆用药2周。分别比较两组患者的临床症状情况、临床疗效情况、Hp根除率及药物不良反应发生情况。结果 治疗组有效率高于对照组(P<0.05);治疗后，两组症状积分均较前下降(P<0.05),且治疗组的临床症状积分低于对照组(P<0.05)。治疗组根除率高于对照组(P<0.05)。对照组不良反Chronic immune activation应发生率高于治疗组(P<0.05)。结论 解幽汤中药四联疗法在Hp根除率上diABZI STING agonist细胞培养不低于含铋剂四联疗法，同时MDV3100分子式在临床症状、临床疗效及不良反应发生情况优于含铋剂四联疗法。

目的 筛选网络模块划分的最佳方法，并进行生物功能分析及化学成分和中药的筛选。方法 首先，采用四种常用的模块划分方法，包含Community Cluster、(GLay)、MCL Cluster、MCODE Cluster、Connected Components Cluster,对心律失常疾病基因网络进行模块划分，依据四种方法的网络熵值筛选出最佳的模块划分方法；其次，依据模块的平均连接度筛选主要模块，并对疾病网络和网络模块富集的通路进行比较和分析；最后，通过TCMSP(Traditional Chinese MedicinSAHA纯度e Database and Analysis PlatforHerpesviridae infectionsm)和ETCM(The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine)数据库查找和筛选主要模块对应的成分，并用AutoDock Vina 1.1.2软件进行分子对接，通过成分查找相关的中药。结果 MCODE Cluster方法共划分出5个模块，网络熵值最小，为3.559 69,最适用于心律失常疾病基因网络模块的识别；通路分析结果显示，module 1能够覆盖原疾病网络56.1%的通路，主要与心肌细胞的肾上腺素能信号(Adrenergic signaling in cardiomyocytes)、肾素分泌(Renin secretion)、钙信号通路(Calcium signaling pathway)、环磷酸腺苷信号通路(cAMP signaling pathway),昼夜节律(Circadian entrainment)等多条信号通路相关；通过中药数据库筛选出三个化学成分，分别Compound C供应商为acacetin, meletin, hesperetin,三个成分对应的中药有27味，包括菊花、野菊花、鱼腥草、虎杖等。结论 网络结构熵作为模块划分方法具有可行性；划分后的模块可代表疾病基因网络的大部分功能，主要体现于module1,模块内基因所对应的化学成分与心律失常关系密切，但中医药治疗心律失常有待进一步研发。

线粒体功能障碍是糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease, DKD)的重要发病机制。持续高血糖状态可能通过抑制AMPK-ULK1通路，抑制线粒体自噬，导致受损线粒体未能被及Tofacitinib时清除，线粒体功能受损，从而加快DKD的进展。另外，基于“内热致癥”理论，DKD基本病机为伤阴耗气，痰郁热瘀互相胶结于络脉，形成微型癥瘕，“内热”是肾络癥瘕形成的初始病机，并贯穿于病程始终。随着DKD进程内热证表现形式不同PS-341，兼夹证候亦不同：早期内热主要表现为燥热、郁热，常并见阴虚证、气虚证；中期主要表现为结热、湿热，常并见气虚证，逐渐形成肾络微型癥瘕；晚期主要为浊热、湿热，阳虚证比例升高，浊毒内生。中医药对延缓DKD的进展有明确效果，清热消癥法可减轻机体蛋白尿、改善自噬受阻状态。探讨清热消癥法能否通过调控能量代谢的关键传感器——AMPK-ULK1通路，激活线粒体自噬，清除损伤的线粒体Cell Culture Equipment，改善线粒体功能，减轻肾小球硬化，延缓DKD发展。

目的:本研究旨在探究腹腔镜治疗肝内胆管癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)中转开腹的危险因素和影响肝内胆管癌根治术后远期生存的预后因素。方法:回顾性收集分析了2014年5月到2022年9月在浙江大学附属邵逸夫医院接受连续性腹腔镜肝切除术治疗(Laparoscopic liver resection,LLR)的肝内胆管癌患者的基线信息和临床资料,由肝胆外科具有丰富肝切除手术经验的医生团队进行治疗。从一个前瞻性维护的数据库中收集到的数据,并由作者重新校对。根据是否腹腔镜手术期间发生中转开腹,将患者分成两组:腹腔镜组和中转开腹组,并进行比较。结果:158例ICC患者中有46例(29.1%)需要中转开腹。中转开腹的直接原因包括:黏连15例(32.6%)、肿瘤原因26(56.5%)、不可控出血4例(8.7%)、肿瘤定位困难1例(2.2%)。经过多因素二元Logistic分析表明,ICC患者腹腔镜中转开腹的独立危险因素包括上腹部手术史(OR 2.803,1.03-7.67;P=0.045)、肿瘤靠近主要血管(OR 4.301,1.72-10.78;P=0.002)、胆道重建(OR 6.541,1.41-30.32;P=0.016)和IMM手术难度III级的手术(OR2.918,1.16-7.37;P=0.024)。腹腔镜组和中转开腹组ICC患者术后1、3、5年累积总生存率分别为86.2%、55.4%、44.8%和59.7%、35.7%、22.3%,中位生存时间分别为44个月和27个月。为进一步探究影响两组ICC患者远期预后的原因,对各因素单因素COX回归分析,再对其中P值<0.1或现有文献报道与ICC预后相关的变量纳入至多因素COX回归分析中,结果表明高血压[hazard ratio(HR)2.503,95%CI 1.409-4.446;P=0.002]、术前CA19-Ecotoxicological effects9升高(HR 2.156,95%CI 1.098-4.237;P=0.026)、肿瘤大小(HR 1.203,95%CI1.062-1.361;P=0.004)、淋巴结转移(HR 2.151,95%CI 1.045-4.429;P=0.038)、低分化腺癌(HR 2.163,95%CI 1.248-3.Compound 3生产商749;P=0.006)、住院天数(HR 1.031,95%CI 1.007-1.055;P=0.01)是影响ICC患者LLR术后(包括中转开腹)总生存期的独立预后因素。结论:上腹部手术史、肿瘤靠近主要血管、胆道重建和IMM手术难度III级是LLR治疗ICC中转开腹的独立危险因素。在近期疗效上,腹腔镜中转开腹治疗ICC比成功腹腔镜手术需要更长的手术时间,更多的术中出血,更高的术后严重并发症发生率以及更长的术后住院时间。在远期生存方面,术前CA19-9升高、高血压病史、肿瘤大小、住院天数、淋巴结转移和病理低分化腺癌是影响ICC患者腹腔镜术后总体生存时间的独立预后因素。另外存在肝内胆管结石、手术时间延长或需要术中术后输血的ICC患者的远期生存效益需要更多临床研究进行验证PS-341。据此可对LLR术后的ICC患者的远期预后进行个体化评估,以期为该领域的探索提供有益思路。