PDK1信号通路

[目的]探讨CT影像组获悉更多学在鉴别腹部不同病因(淋巴瘤、转移性淋巴结、炎性反应性淋巴结)淋巴结病变及其良恶性鉴别中的价值。[方法]回顾性收集146例患者的CT图像及病理资料,其中因腹部脏器恶性肿瘤接受手术切除、术后病理证实瘤周淋巴结全部发生转移者70枚(27例患者);以术后病理证实瘤周淋巴结全部未发生转移者作为正常对照组共78枚(36例患者);经淋巴结穿刺活检,病理结果证实为淋巴瘤者共94枚(33例患者);经手术或消化道内镜证实,确诊为炎症性肠病、未合并病毒及其他病原体感染,且肠周淋巴结反应性肿大者共91枚(50例患者)。将淋巴瘤及转移性淋巴结作为恶性淋巴结组,共计148枚;对照组及炎性反应性淋巴结作为良性淋巴结组,共计185枚。将患者的CT静脉期原始图像、薄层重建图像上传至放射组学云平台(RTaurine核磁adcloud platform,慧影医疗科技有限公司)后,在薄层图像全层上沿淋巴结边缘进行感兴趣区(ROI)的勾画,先以良性、恶性病理分类为标签,再以四种(淋巴瘤、转移性淋巴结、正常对照组、炎性反应性淋巴结)病理分类为标签,将146例患者共计333枚淋巴结以7:3的比例随机分为训练集和验证集,并依次使用方差阈值(variance threshold)法、SelectKbest法、最小绝对收缩与选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)法筛选出相关度最高的特征,使用筛选后得到的最优特征进行机器学习,并分别使用k邻近(k-nearest neighbor,KNN)、支持向量机(support vector machine,SVM)、极端梯度提升(Extreme gradient boosting,XGBoost)、逻辑回归(Logistic Regression,LR)和随机森林(random forest,RF)算法构建针对上述病理标签的分类模型,每种分类模型分别验证比较,通过受试者工作特征曲线下面积(area under the operating characteristics curve,AUC)和敏感度、特异度等参数评估影像组学模型的诊断效能。[结果]以良恶性为标签,关于良恶性淋巴结的鉴别诊断,使用LR分类器构建的影像组学模型取得最佳诊断效果,共筛选出23个组学特征,训练集Medical adhesive的ROC曲线下面积(AUC值)为0.895(95%CI:0.841～0.949),灵敏度80%,特异度78%;验证集的AUC值为0.792(95%CI:0.704～0.880),灵敏度69%,特异度74%。以病理类型为标签,关于淋巴瘤与转移性淋巴结的鉴别诊断,使用LR分类器构建基于静脉期图像的影像组学模型取得最佳诊断效果,共筛选出23个组学特征,训练集的ROC曲线下面积(AUC值)为0.986(95%CI:0.942～1.000),灵敏度94%,特异度94%;验证集的AUC值为0.924(95%CI:0.819～1.000),灵敏度86%,特异度79%。关于淋巴瘤与炎性反应性淋巴结的鉴别诊断,使用SVM分类器构建的影像组学模型取得最佳诊断效果,共筛选出25个组学特征,训练集的ROC曲线下面积(AUC值)为0.993(95%CI:0.954～1.000),灵敏度 95%,特异度 95%;验证集的 AUC 值为0.983(95%CI:0.907～1.000),灵敏度90%,特异度91%。关于转移性淋巴结与对照组的鉴别诊断,使用KNN分类器构建的影像组学模型取得最佳诊断效果,共筛选出14个组学特征,训练集的ROC曲线下面积(AUC 值)为 0.857(95%CI:0.774～0.940),灵敏度 70%,特异度 78%;验证集的AUC值为0.760(95%CI:0.634～0.886),灵敏度71%,特异度76%。关于转移性淋巴结与炎性反应性淋巴结的鉴别诊断,使用LR分类器构建的影像组学模型取得最佳诊断效果,共筛选出10个组学特征,训练集的ROC曲线下面积(AUC值)为0.865(95%CI:0.797～0.933),灵敏度 74%,特异度 76%;验证集的 AUC 值为 0.836(95%CI:0.767～0.905),灵敏度 74%,特异度 77%。[结论]基于CT构建的影像组学模型可对腹部淋巴结良恶性,以及淋巴瘤、转移性淋巴结及其对照、炎性反应性淋巴结等进行有效鉴别,可为临床治疗提供准确的信息。

金黄色葡萄球菌是人畜共患病原体,可导致多种畜禽的皮肤软组织感染、肺炎和乳腺炎等疾病。近年来,随着抗生素的大量应用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的检出率不断增加,表现出多重耐药性,给MRSA感染的临床防治带来极大挑战。更为严重的是,MRSA极易形成生物被膜,不仅增强了对抗菌药物的耐药性,逃避宿主免疫应答反应,且在体内可作为潜在的感染源,释放游离细菌造成慢性感染,反复发作,难以治愈。同时,其诱发产生的持续炎症反应会损害周围的软组织,严重可能导致并发症。因此,开发新型的抗菌药物或治疗策略代替传统抗生素,在清除生物被膜的同时有效缓解炎症,对于临床MRSA生物被膜感染治疗具有重要意义。中药活性成分是新型www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate“替抗”药物研发的重要来源。异甘草素(ISL)是甘草中的查尔酮类活性成分,前期研究发现,异甘草素具有优异的抗菌和抗炎活性,是治疗MRSA感染的潜在药物。然而,异甘草素溶解性差,生物利用度低,且与传统抗生素相比,药效相对较低,限制了其在抗炎及抗菌方面的应用。以纳米制剂为基础的纳米药物递送体系可增加药物溶解度,是实现药物增效减毒,高效利用的有效手段。其中,具有抗菌活性的阳离子纳米载体,不仅可实现抗菌药物的靶向输送,而且可与抗菌药物联合作用,增加抗菌效果。然而,阳离子纳米药物递送体系会与生物被膜中带负电的胞外基质组分相互作用,阻碍其在生物被膜内部的渗透与扩散,无法有效清除生物被膜。鼠李糖脂(RHL)是一种生物相容性好的生物类表面活性剂,能够通过破坏生物被膜胞外基质来分散生物被膜,促进抗菌药物的渗透。综上,本研究选用具有良好生物相容性和生物降解性的天然阳离子多糖壳聚糖纳米粒作为载体担载异甘草素,并通过鼠李糖脂进行修饰,制备担载异甘草素的鼠李糖脂-壳聚糖纳米粒(ISL@RHL-COS),通过体内外试验研究其缓解感染部位炎症,清除MRSA生物被膜,抑制残留细菌再黏附的作用,阐明其作用机制,具体研microRNA biogenesis究结果如下:(1)通过一锅法成功制备了担载异甘草素的鼠李糖脂修饰的壳聚糖纳米粒ISL@RHLCOS,确定了最佳制备条件。制备所得ISL@RHL-COS呈椭圆形,粒径大小为136.7±0.86nm,zeta电位为32±1 m V,异甘草素的包封率与载药量分别为74.9±2.3%和5±0.12%。与壳聚糖纳米粒相比,RHL-COS的稳定性明显增加,并且可实现在酸性环境下响应性的释放异甘草素。(2)ISL@RHL-COS显著增加了ISL的抗MRSA效果,对MRSA的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别降低近4倍和10倍。ISL@RHL-COS可与MRSA发生团聚作用,通过增强细胞膜通透性,破坏细菌细胞膜,降低菌体核酸含量及可溶性蛋白种类和含量等途径,进而影响到细菌DNA复制、转录和翻译过程起到抗MRSA作用。(3)ISL@RHL-COS通过降低胞外基质中胞外多糖与胞外蛋白含量分散生物被膜。通过激光共聚焦定性和活/死染色试验表明,ISL@RHL-COS可有效渗透到生物被膜内部,并杀灭生物被膜内部MRSA。在异甘草素剂量为120μg/m L,ISL@RHL-COS可完全清除生物被膜。(4)通过药物-细菌-细胞互作模型研究了ISL@RHL-COS对细菌进入机体后发生初始黏附的抑制作用。根据细胞存活率和细菌黏附率确定出最佳感染复数为50 MOI。与模型组相比,ISL@RHL-COS在7.5μg/m L时可有效抑制细菌在细胞上发生黏附。(5)ISL@RHL-COS可显著下调LPS诱导的M1型巨噬细胞中促炎因子NO、TNF-α和IL-6水平,证明ISL@RHL-COS具有较高的抗炎能力。(6)建立小鼠皮下脓肿模型,研究纳米粒体内抗菌试验,结果显示,与ISL和RHL-COS相比,ISL@RHL-COS能有效促进脓肿部位伤口愈合,降低TNF-α和IF-6的含量,并显著降低感染部位MRSA的存活率。此外,成功建立小鼠皮下植入物MRSA生物被膜感染模型,经ISL@RHL-COS治疗后,可高效清除植入的导管表面成熟的生物被膜,有效改善感染组织周围的炎性症状。综上,本论文制备了集“破坏生物被膜-杀灭膜内外细菌-抑制残留细菌再黏附-缓解炎症促组织再生”为一体的多功能纳米体系(ISL@RHL-COS),该纳米体系具有较高的安全性和稳定性,可主动靶向细菌,并p H响应性释放异甘草素,同时释放的鼠李糖脂可分解生物被膜胞外基质从而促进纳米粒在生物被膜的渗透与扩散,彻底清除生物被膜,并抑制残留细菌再黏附,缓解感染部位炎症,实现安全、高效的MRSA生物被膜selleck NMR感染治疗。本研究针对MRSA生物被膜的耐药机制及生长过程,利用中药单体实现了MRSA生物被膜感染的高效治疗,为中药单体的高效应用提供了新思路,为控制畜禽动物源细菌的耐药性及生物被膜相关的感染问题提供新途径和新方法。

目的 基于核因子E2相关因子2（nuclearfactor E2relatedfactor2，Nrf2）-抗氧化反应元件（antioxidantresponseelement，ARE）信号通路研究竹non-necrotizing soft tissue infection节参多糖（Panaxjaponicuspolysaccharide，PSPJ）保护四氯化碳（carbontetrachloride，CCl_(4)）所致大鼠急性肝损伤的作用机制。方法 通过CCl_(4)间隔诱导法建立急性肝损伤大鼠模型，给予水提醇沉法制备的竹节参多糖治疗7d后取材，通过苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理变化；全自动生化仪检测大鼠血清中肝功能相关指标；ELISA法检测肝组织氧化应激水平；免疫组化法观察大鼠肝组织Nrf2表达；Westernblotting测定大鼠肝组织Nrf2-ARE通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，竹节参多糖组大鼠血清中肝功能相关指标呈不同程度的降低（P＜0.05、0.01），肝组织中Nrf2-ARE信号通路明显激活（P＜0.01），肝脏中脂类过氧化产物丙二醛（malondialdehyde，selleck NMRMDA）水平降低（P＜0.01），抗氧化酶活性明显升高（P＜0.05、0.01），细胞质中氧化应激效应物Nrf2阳性的细胞数有所减少（P＜0.01），selleck产品大鼠肝脏损伤程度明显减轻。结论 竹节参多糖可激活Nrf2-ARE信号通路，增强机体的抗氧化酶系表达，减轻CCl_(4)引起的氧化损伤。

目的 探讨血清单核细胞核因子E2相关因子(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)水平变化与糖尿病视网膜病变(DR)分期间关系。方法 选取2020年4月—2023年2月如皋市中医院DR患者147例作为观察组，并根据DR分期分为非增生型糖尿病视网膜病变(NPDR)、增生型糖尿病视网膜病变(PDR);另选取同期糖尿病无视网膜病变患者49例作为对照Ⅰ组，健康体检者49例作为对照Ⅱ组。对比3组及观察组不同DR分期患者血清Nrf2、Keap1水平，Spearman秩相关系数分析血清Nrf2、Keap1水平与DR分期间关系；多因素logistic回归分析血清Nrf2、Keap1水平对DR分期的影响；限制性立方Puromycin体内实验剂量样条图分析血清Nrf2、Keap1水平与DR分期的剂量-效应关系。结果 观察组血清Nrf2水平低于对照Ⅰ组、对照Ⅱ组，Keap1水平高于对照Ⅰ组、对照Ⅱ组，对照Ⅰ组血清Nrf2水平低于对照Ⅱ组，Keap1水平高于对照Ⅱ组(P<0.05);随DR分期增加，血清Nrf2水平呈降低趋势，血清Keap1水平呈升高Y-27632趋势(P<0.05);血清Nrf2水平与DR分期呈负相关(r=-0.806,P<0.001),血清Keap1水平与DR分期呈正相关(r=0.854,P<0.001);经多因素logistic回归分析，高血压、糖尿病发病年龄、总胆固醇对DR分期无显著影响(P>0.05),血清Nrf2水平是DR分期的独立保护因素，高脂血症、糖尿病病程、空腹血糖、糖化血红蛋白、血清Keap1水平是DR分期的独立危险因素(P<0.05);限制性立方样条图分析显示，血清Nrf2(χ~2=11.800,P<0.001)、Kpsychotropic medicationeap1(χ~2=8.401,P=0.015)水平与DR分期间存在非线性关系，控制其他病变为固定变量，血清Nrf2水平<1.70μg/L、血清Keap1水平>3.00μg/L时，PDR风险显著增加。结论 血清Nrf2、Keap1水平变化与DR分期关系密切，血清Nrf2水平<1.70μg/L、血清Keap1水平>3.00μg/L时提示DR进展至PDR的风险显著增加。

<正>《一分钟图解脑梗死》一书由朱青峰、王国芳、罗晓明编写，山西科学技术出版社出版。本书共七个部分，第一部分讲述看图了解脑梗死的一般知识，第二部分为看图识别脑血管，第三部分为看图弄懂脑梗CX-5461价格死的诊断方法，第四部分为看图了解脑梗死的药物治疗，第五部分为看图了解脑梗死的手术治疗方法，第六部分为看图了解脑梗死的康复与护理方法，第七部分为看图明白脑梗死的预防方法。该书用图文并茂的形式详细讲述了脑梗死的起因、诊断方法、药物治疗方法、手术治疗方法、康复、预防等，其内容专业、权威、表述通俗易懂，Pre-formed-fibril (PFF)方便读者阅读和理解，希望对普通老百姓和非神经病学专业的医护人员了解脑梗死的研究结果有所帮助，对神经病学同行起到抛砖引玉的作用，同时本书也可以作为普通读者的科普读物。本文结合该书内容，简要分析西酞普兰、运动疗法、人际心理联合治疗对脑梗伴情绪障碍患者的影响。脑梗死是临床上极为常见的心脑血管疾病之一，是各种LGX818作用原因所致的局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生临床上对应的神经功能缺失表现，具有高发病率、高复发率、高致死率、高致残率的特点，脑梗死患者预后往往会出现躯体及心理功能障碍，尤其是脑梗死后各种功能损伤导致的不良情绪反应已被证实会对患者的恢复过程造成潜在影响，严重威胁患者的日常生活质量和生命健康安全。随着人口老龄化问题的不断加剧，加之人们生活物质水平的不断提高，脑梗死的发病率呈逐年上升趋势，脑梗死疾病恢复时间长，预后差，加之患者对于疾病的认识存在不足，极容易产生焦虑、抑郁等负面情绪，增加患者的痛苦。根据相关研究发现，脑梗死后情绪障碍属于脑血管疾病较为常见的并发症之一，不仅会影响患者临床治疗的依从性，还会对患者的语言功能、认知功能、运动功能等造成不同程度损伤，降低患者的生活质量，甚至引起死亡等不良后果；与此同时，脑梗死后情绪障碍会给患者及其家属造成心理以及经济负担，增加社会负担。由此可知，安全有效的治疗方案对于脑梗死后情绪障碍患者显得尤为重要。有研究表明，西酞普兰、运动疗法、人际心理联合治疗对脑梗伴情绪障碍患者具有积极作用。

目的 探究糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)血瘀证大鼠肾损害与肾脏铁死亡的潜在机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、DKD组、DKD血瘀证组。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法复制DKD大鼠模型，采用尾静脉注射右旋糖酐的方法复制DKD血瘀证模型。实验过程中观察大鼠血瘀证表现及检测24 h尿蛋白、血清肌酐、血尿素氮、血液流变学指标，采用苏木Baf-A1纯度精-伊红染色、Masson染色、PAS染色观察肾脏的组织形态，采用透射电子显微镜观察铁死亡典型细胞的线粒体变化；采用免疫组织化学法、Western blot法检测肾组织铁死亡相关蛋白[长链酯酰辅酶A合成酶4(Acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]及肾脏纤维化指标[纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、Ⅳ型胶原蛋白(typeⅣcollagen, Col-Ⅳ)]的表达水平。结果 与对照组比较，DKD组大鼠肾脏病理变化加重，线粒体损伤明显，24 h尿蛋白含量，血清肌酐、血尿素氮水平及全血黏度、血浆黏度明显升高(P<0.05),肾脏ACSL4、FN和Col-Ⅳ及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05),GPX4蛋白及其mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。DKD血瘀PUN30119研究购买证大鼠出现唇色黯淡、眼球黯红、耳廓紫红、舌下脉络紫黯等血瘀证表现，24 h尿蛋白和血清肌酐、血尿素氮水平明显高于DKD组，光学显微镜下可见肾脏出现明显的系膜基质增生、肾小球萎缩、肾间质胶原沉积和纤维化，电子显微镜下可见肾组织细胞线粒体损伤明显，嵴基本断裂，ACSL4、FN、Col-Ⅳ及其mRNA表达水平较DKD组明显上升(P<0.05),GPX4蛋白及其Cholestasis intrahepaticmRNA表达水平较DKD组明显下降(P<0.05)。结论 DKD血瘀证大鼠肾脏损害更加严重，其机制可能与GPX4、ACSL4介导的铁死亡有关。

[目的]观察不同剂量全反式维甲酸（All-trans retinoid acid,ATRA）对哮喘模型大鼠Th1/Th2平衡的影响。[方法]将SD大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组和模型组的大鼠给予生理盐水（10 mL/kg）灌胃，对低/中/高剂量组的大鼠，分别给予10 mg/kg、20 mg/kg和40 mg/kg ATRA灌胃，1次/d，持续1 w。观察各组大鼠的肺Apoptosis抑制剂功能、肺组织匀浆液细胞因子水平、血Th1/Th2值及Notch通路的表达情况。[结果]中/高剂量组大鼠呼吸频率显著低于模型组（P<0.05）；吸气流量、呼气峰流量和潮气量显著高于模型组（P<0.05）；模型组、低/中/高剂量组肺组织匀浆液中的IgE、IL-4和IL-5水平依次降低，IFN-γ和IL-12水平依次PD-0332991采购升高；模型组Th1/Th2值显著高于对照组（P<0.05）,ATRA治疗后Th1/Th2值较模型组均显著降低，剂量越高Th1/Th2值降低越明显；与对照组相比，模型组、低/中/高剂量组的Notch3、Delta1、Jaggedmedium replacement1和Jagged2的mRNA和蛋白表达水平升高，且模型组高于低/中/高剂量组。[结论] ATRA可改善哮喘模型大鼠肺功能，调节Th1/Th2平衡，其机制可能与ATRA抑制Notch通路有关。

慢性难愈创面是皮肤连续性遭破坏，兼之可能由于反复感染、血管功能不全、糖尿病、肿瘤或慢性骨髓炎等因素影响造成创面愈合中购买CL13900断和康复延迟而形成慢性难治伤口，严重影响患者的生活质量以及耗费大量医疗资源。中药多糖类成分是多数中药的有效成分，在现代药理学研究中发现中药所含多糖成分具有抗炎、抗氧化、抗辐射、降血糖、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、免疫调节等作用。通过对文献的归纳、分析、总结，发现中药多糖成分促进慢性难愈创面的修复的机制主要从以下几个方面实现：其一，通过调节白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-8selleck合成（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎severe acute respiratory infection症因子或与巨噬细胞相关的炎症蛋白、趋化蛋白如巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）缩短炎症期；其二，激活血小板源性生长因子（PDGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、TGF-α、血管内皮生长因子（VEGF）等生长因子以募集内皮细胞和成纤维细胞进入组织增殖期；其三，激活VEGF及其下游受体血管内皮生长因子受体-1（VEGFR-1）和血管生长因子受体-2（VEGFR-2）介导蛋白激酶C/细胞外调节蛋白激酶（PKC/ERK）信号通路，或通过血管紧张素（ANG）途径，促进血管新生，改善创面血流；其四，通过增强成纤维细胞（FB）分泌羟辅氨酸和透明质酸（HA）促进合成胶原蛋白的能力、以及调节相关基质金属酶及其酶抑制剂调整细胞外基质；其五，清除自由基减少氧化应激给组织带来的损伤；其六，加强机体巨噬细胞细胞吞噬能力、自然杀伤细胞（NK细胞）的活性及T细胞的增殖，提高组织的防御能力。中药多糖对创面修复可同时从多方面进行，多靶点、多通路，这是其优势潜力所在，期待后续基础研究在增进医疗方慢性难愈创面治疗手段时更加注重对于中药多糖类成分对创面修复的机制研究。

亚急性瘤胃酸中毒(Subacute ruminal acidosis,SARA)是反刍动物养殖中常见代谢病之一,会导致有害代谢产物如脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)等大量释放并移位至血液,引起局部或全身性炎症反应,进而对动物机体产生许多负面影响,如加重瘤胃屏障功能受损等。芦丁是一种天然黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎和抗菌等多种生物学活性,其对瘤胃炎症的干预作用未见报道,干预瘤胃上皮细胞炎症损伤的机制也尚未确定。因此,本研究选用绵羊瘤胃上皮细胞作为研究对象,以SARA产生的主要有害物质LPS为刺激物,建立瘤胃上皮细胞炎症损伤模型,探究芦丁对LPS诱导瘤胃上皮细胞炎症损伤的干预作用及其分子机制,为芦丁作为缓解高精料饲粮下反刍动物瘤胃上皮炎症等代谢性障碍疾病的饲用添加剂应用于反刍动物生产奠定理论基础。本论文研究分为四个试验,具体如下,试验一:绵羊瘤胃上皮细胞的原代分离与鉴定本试验采集健康绵羊的新鲜瘤胃组织,采用0.25%-0.02%EDTA胰蛋白酶对瘤胃上皮黏膜层进行不同时间的连续消化(30、20、15、10、8、5 min),成功分离得到绵羊瘤胃上皮细胞。镜下观察,细胞贴壁80%后进行消化传代,采用CK-18免疫荧光鉴定上皮细胞,细胞质荧光显示为绿色,DAPI染核为蓝色荧光,表明该上皮细胞为瘤胃上皮细胞。MTT检测细胞活力结果表明,第1 d为生长潜伏期,第2～6 d开始进入生长对数期,随后进入生长衰退期,细胞最佳接种密度为1×10~6/m L。试验二:瘤胃上皮细胞炎症损伤模型的建立本试验采用单因素试验设计,0、1、5、10、50、100μg/m L的LPS刺激瘤胃上皮细胞0、1、3、6、9、18 h,通过检测细胞活力、炎性因子含量及其相对表达量,筛选LPS最佳作用浓度和作用时间,并建立炎症损伤模型。结果表明,(1)与对照组相比,LPS刺激瘤胃上皮细胞6 h时,各浓度均显著抑制细胞活力(P<0.05),但细胞活力仍在0.8以上,9、18 h时,各浓度均极显著抑制细胞活力(P<0.01),但18 h时细胞活力下降至0.35,不利于后续试验;(2)与对照组相比,1、5、10、50μg/m L的LPS处理瘤胃上皮细胞均可以极显著提高TNF-α的含量以及IL-1β、IL-8、IL-12、TNF-α的m RNA表达量(P<0.01),显著提高IL-1β的含量以及IL-6的m RNA表达量(P<0.05),极显著降低L-10的含量以及IL-4、IL-10的m RNA表达量(P<0.01),说明所选LPS作用浓度均可引起瘤胃上皮细胞的炎症反应。综上试验结果,确定LPS作用浓度1μg/m L,作用时间9 h建立瘤胃上皮细胞炎症损伤模型。试验三:芦丁对瘤胃上皮细胞炎症损伤的干预作用本试验采用单因素试验设计,0、25、50、100、150μg/m L的芦丁刺激瘤胃上皮细胞0、2、4、6、8、10 h,检测细胞活力;同时在上述瘤胃上皮细胞炎症损伤模型的基础上,加入不同浓度的芦丁(0、25、50、100μg/m L),计算细胞相对增殖率,筛选芦丁最佳干预浓度和最佳干预时间。结果表明:(1)与对照组相比,芦丁刺激8 h,可以显著提高瘤胃上皮细胞活力(P<0.05);芦丁刺激10 h,可以极显著抑制瘤胃上皮细胞活力(P<0.01);(2)100μg/m L的芦丁可以最大程度地缓解LPS诱导的瘤胃上皮细胞损伤,细胞相对增殖率为70%。因此,确定芦丁的最佳刺激条件为浓度100μg/m L,时间8 h。在上述研究基础上,采用单因素试验设计,将第2代瘤胃上皮细胞随机分成对照组(CON组,无任何添加)、LPS损伤组(LPS组,1μg/m L,9 h)、芦丁组(Rtick endosymbionts组,100μg/m L,8 h)和芦丁干预组(R+LPS组,芦丁100μg/m L,8 h+LPS 1μg/m L,9 h),检测细胞因子、调控因子、紧密连接蛋白基因表达量及细胞因子含量、紧密连接蛋白蛋白表达量。结果表明,(1)与对照组相比,LPS刺激绵羊瘤胃上皮细胞可以极显著提高IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、CXCL9、TLR-4、My D88、NF-κB、IFIT3、TRAF6的m RNA表达量(P<0.01),显著提高IL-1β、TNF-α的含量(P<0.05),显著下调Claudin-4、ZO-1的m RNA表达量以及IL-10的含量(P<0.05),极显著下调Claudin-1、Claudin-4、Occludin的蛋白表达量(P<0selleck产品.01);(2)与对照组相比,芦丁可以极显著降低IL-1β、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL9、TLR4、My D88、NF-κB、IFIT3、IRAK1、TRAF6的m RNA表达量(P<0.01),显著降低TNF-α的含量(P<0.05),极显著提高IL-10的含量(P<0.01),显著上调Claudin-1、Claudin-4、Occludin和ZO-1的m RNA表达量(P<0.05),极显著上调Claudin-1、Claudin-4、Occludin和ZO-1的蛋白表达量(P<0.01);(3)与LPS组相比,R+LPS组可以极显著降低IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、CXCL9、My D88、NF-κB、IFIT3、IRAK1、IRF3、TRAF6的m RNA表达量以及TNF-α的含量(P<0.01),极显著上调IL-4、IL-10、ZO-1、Claudin-4的m RNA表达量、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、ZO-1的蛋白表达量以及IL-10的含量(P<0.01),显著降低IL-1β的含量(P<0.05)。以上结果说明芦丁能够缓解LPS对瘤胃上皮细胞造成的炎症、以及细胞间紧密连接的损伤,并且能显著提高瘤胃上皮细胞的抗炎能力、改善上皮细胞PR-171抑制剂的屏障功能。试验四:芦丁干预瘤胃上皮细胞炎症损伤的分子机制结果表明,(1)与对照组相比,PDTC组极显著降低IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、TLR-4、My D88、NF-κB、IFIT3、IRAK1、IRF3、TRAF6的m RNA表达量以及P-IκBα、P-NF-κB65、P-P38MAPK、P-JNK、P-ERK1/2、P-ERK5的蛋白表达量(P<0.01);(2)与LPS组相比,PDTC+LPS组可以极显著下调IL-1β、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、CXCL9、TLR-4、My D88、NF-κB、IFIT3、IRAK1、IRF3、TRAF6的m RNA表达量以及P-IκBα、P-NF-κB65、IκBα、NF-κB65、P-P38MAPK、P-JNK、P-ERK1/2、P-ERK5的蛋白表达量(P<0.01),极显著上调IL-4、IL-10的m RNA表达量(P<0.01);(3)与LPS组相比,R+LPS组极显著降低P-IκBα、P-NF-κB65、IκBα、NF-κB65、P-P38MAPK、P-JNK、P-ERK1/2、P-ERK5的蛋白表达量(P<0.01)。综上结果说明,芦丁可以通过调节NF-κB/MAPK信号通路发挥抗炎活性。综上所述,芦丁主要通过作用于NF-κB/MAPK信号通路缓解LPS诱导的绵羊瘤胃上皮细胞炎症损伤,降低炎症细胞因子、细胞调控因子相关基因表达与分泌,增加紧密连接蛋白在转录与翻译水平上的表达,增强机体的抗炎活性,保护细胞屏障功能的完整性。

目的:肥胖是威胁我国儿童青少年身心健康的重要公共卫生问题,其中高热量饮食是导致肥胖的重要原因之一。青春期是儿童身体发育和心理成熟的重要时期,研究表明儿童青少年肥胖与焦虑抑郁的发生密切相关,但具体的神经机制不清。催产素(Oxytocin,OT)是一种下丘脑神经肽,以调节分娩期间子宫收缩和哺乳期间泌乳的外周作用而闻名。然而,OT也在大脑中发挥作用,可协调一系列社会行为和情绪行为。但OT是否对生命早期高脂饮食诱导的青春期情绪障碍具有作用及机制仍不清楚。本研究旨在探索OT对青春期肥胖小鼠焦虑抑郁样行为的影响及机制。方法:本研究通过高脂饮食(High fat diet,HFD)喂养构建青春期情绪障碍小鼠(购买Bafilomycin A1C57BL/6)模型,对照组采用正常饮食(non-inflamed tumorNormal diet,ND),具体如下:母鼠产仔当日开始分别喂养HFD和ND,生后3周(Week,W)分笼后取子代雄鼠继续分别饲以HFD和ND,直至实验结束。实验小鼠分为6组:ND组、HFD组;ND+溶媒(生理盐水,NS)组、ND+OT组、HFD+NS组、HFD+OT组。3W开始观察体重,在青春期(5W-7W)进行以下四种焦虑抑郁相关的行为学实验:1)旷场实验(Open field,OF);2)明暗箱实验(Light dark box,LDB);3)喷糖实验(Sucrose splash test,SST);4)悬尾实验(Tail suspension test,TST)。给药组于行为学测试前10 min通过预先留置的脑室内导管给予OT或等体积的NS。行为学结束后通过c-Fos免疫荧光染色或运用全细胞膜片钳技术等手段,探究HFD和OT干预对神经元功能的影响。结果:1.为明确HFD对小鼠体重的影响,我们记录了小鼠从离乳后(3W)到青春期结束(7W)期间的体重变化,结果显示:与ND组小鼠体重相比,3W HFD组无显著差异,但4W、5W、6W和7W HFD组小鼠体重均显著高于ND组。2.为探索HFD小鼠是否具有青春期情绪障碍,我们进行了对应的行为学实验,结果显示:1)OF:与ND组相比,HFD组小鼠进入中心区域的时间显著减少。2)LDB:与ND组相比,HFD组小鼠在明箱的时间以及进入明箱的次数均显著减少,但进入明箱的潜伏期无统计学差异。3)SST:与ND组相比,HFD组小鼠理毛的时间明显减少且理毛的潜伏期显著增加。4)TST:与ND组相比,HFD组小鼠不动的时间显著延长。3.为探究OT对青春期HFD小鼠焦虑抑郁样行为的作用,我们在给药后10min进行了行为学测试:结果显示:1)OF:与ND+NS组相比,HFD+NS组小鼠在中心区域的时间显著减少;给予OT后,HFD+OT组相比HFD+NS组小鼠在中心区域的时间显著增加,而ND+OT组与ND+NS组小鼠在中心区域的时间无显著差异。2)LDB:OT对ND喂养的小鼠进入明箱的时间、潜伏期及进入明箱的次数均无影响;但显著增加HFD组进入明箱的次数。3)TST:与ND+NS组相比,HFD+NS组小鼠不动的时间明显增加。但给予OT不影响ND和HFD喂养小鼠不动的时间。4.免疫组化实验:明暗箱实验后,与ND组相比,HFD组小鼠腹侧海马DG区c-Fos蛋白阳性细胞表达明显增加。5.为进一步明确HFD致青春期情绪障碍小鼠的腹侧海马DG颗粒神经元活性,我们比较了ND组和HFD组小鼠该类神经元电生理特性:与c-Fos变化趋势一致,与ND组相比,HFD组小鼠DG颗粒神经元输入电阻明显降低,但静息膜电位、膜电容以及主动膜特性(基电流、AP阈值、AP振幅、AP半宽度和AHP振幅)均无显著差异。与ND更多组相比,HFD组小鼠微小兴奋性突触后电流(Miniature excitatory postsynaptic current,m EPSC)的频率显著增加,但其振幅和衰减时间均无显著差异。6.为探究OT是否能调控腹侧海马DG颗粒神经元功能,我们进行了离体脑片电生理记录。结果显示,与给药前相比,ND组和HFD组小鼠灌流0.1μM催产素后m EPSC的频率均显著降低,但m EPSC的振幅和衰减时间均无显著差异。结论:综上所述,本研究证实生命早期HFD可导致青春期小鼠焦虑抑郁样行为,催产素可能通过增加DG颗粒神经元兴奋性传入,进而改善HFD导致的青春期焦虑样行为,这些发现可为OT用于肥胖导致情绪障碍的治疗提供理论基础。