PDK1信号通路

目的:实验观察IgAN小鼠相较正常小鼠肾间质内TCs数量及形态结构变化;初步探讨以“补肾荣络、消瘀通络”为组方原理的强肾合剂对IgAN小鼠的疗效评价以及对肾间质中TCs的保护修复作用。材料与方法:1.观察IgAN小鼠肾间质内TCs变化情况6周龄清洁级别BALB/c小鼠24只,雌雄各半,随机分为2组:空白组(共12只),模型组(共12只),以BSA+LPS+CCL_4的方式建立IgAN小鼠模型,造模持续8周并于第9周留取尿液、血液和肾脏标本。CBB法检测各组小鼠尿蛋白浓度;HE染色法在光镜观察各组小鼠肾小球系膜细胞及基质变化;IF法观察各组小鼠系膜区IgA沉积情况以及各组小鼠肾间质TCs数量的变化;TEM法对比观察各组IgAN小鼠肾间质TCs与TPs超微结构的变化。2.探究强肾合剂对IgAN小鼠肾间质TCs保护修复作用6周龄清洁级别BALB/c小鼠48只,雌雄各半,随机分为4组:空白组、模型组、中药组、对照组,每组12只。造模8周后空白组及模型组予以生理盐水灌胃;中药组予以强肾合剂灌胃;对照组予以替米沙坦水溶液灌胃。灌胃8周并于第9周留取尿液、血液和肾脏标本,HE染色观察各组小鼠肾小球系膜细胞及基质变化;ELISA法用以检测各组小鼠ACR、SCr及BUN;IF法检测各组小鼠肾间质TCs数量;TEM法观察各组小鼠肾间质TCs超微结构改变;WB检测用药前后各组小鼠肾脏CD34、CD117、Col4表达水平的变化。结果:1.IgAN小鼠造模结果:造模结束后,免疫荧光实验下可见模型组小鼠系膜区出现IgA沉积,尿蛋白定量结果显示模型组尿蛋白水平较空白组明显升高(P<0.01),HE染色后电镜观察下可见小鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增多,综上结果提示造模成功。2.HE染色实验结果:HE染色可见模型组小鼠相较空白组小鼠肾小球系膜细胞增殖和系膜基质增多,肾小管扩张及不同程度的淋巴细胞浸润,部分可见肾小管萎缩或肾小球节段硬化。而药物干预后中药组及对照组相较于模型组系膜细胞和基质增生减少,间质病变减轻,无明显的炎性改变,中药组与对照组间对比观察无显著性差异。3.IF实验结果:与空白组相比,模型组小鼠肾间质CD34/CD117免疫荧光染色阳性的TCs数量明显减少(P<0.01);经药物干预后,与模型组相比,中药组及对照组小鼠肾间质TCs数量增加(P<0.01),其中中药组相较于对照组TCs数量增加更为显著(P<0.05)。4.TEM实验结果:各组小鼠肾间质TCs具有较小的胞体及较大的胞核,细胞核周围的细胞质较少,细胞质内含有较为丰富的线粒体、内质网等细胞器,TPs呈现念珠状结构,与邻近的组织沟通连接,周围可见细胞外囊泡。相较于空白组,模型组小鼠肾间质TCs及TPs数量及细胞层数减少,TCs胞内囊泡变多,胞质内细胞器变少。经药hepatic sinusoidal obstruction syndrome物干预后,与模型组相比,中药组及对照组小鼠肾间质TCs及TPs细胞层数、胞外囊泡、细胞器数量增加,胞内囊泡数量减少,中药组与对照组间观察对比无显著性差异。5.ELQ-VD-Oph IC50ISA结果:与空白组相比,模型组ACR、SCr、BUN水平明显增高(P<0.01)。经过药物干预后,与模型组比,中药组及对照组ACR、SCr、BUN水平明显下降(P<0.01),其中中药组相较于对照组降低更为明显(P<0.05)。6.WB实验结果:相较于空白组,模型组小鼠肾间质CD117、CD34表达水平明显降低(P<0.01),Col4表达水平明显升高(P<0.01)。药物干预下相较于模型组,中药组、对照组小鼠肾间质CD117、CD34表达水平增加(P<0.01),其中中药组增加更为明显(P<0.05);Col4表达水平降低且与CD117、CD34互为负相关,其中中药组下降更为显著selleck BMS-907351(P<0.05)。结论:1.IgAN小鼠肾间质存在TCs数量减少及形态结构损伤。2.强肾合剂可以改善IgAN小鼠肾脏的结构和功能,增加IgAN小鼠肾间质TCs数量,修复IgAN小鼠肾间质TCs形态结构损伤。

肾Anti-MUC1 immunotherapy脏间质纤维化是许多肾脏疾病不断进展的共同路径。不管是各种慢性肾脏病，或是各种因素所引起的无法完全恢复的急性肾损伤，其进展过selleck NMR程多数是在经过肾脏间质纤维化后进入终末期肾功能衰竭。肾脏间质纤维化的动物模型是探索肾脏间质纤维化发生机制和新诊断治疗方法的主要研究工具。不同的动物模型各有特色，研究者可依据个人经验及实验目的建立不同的模型，并以此为基础开展科学研究，为肾脏疾病的防治提供更多新方法、新思路。本文着重综合阐述目前常见的几种肾脏间质纤维化动物模型，包括单侧输尿管梗阻、缺血-再灌注损伤、肾大部切除、微栓塞诱导形成的手术模型，环孢素A、阿霉素、马兜铃酸、氯化汞、庆大霉素、马兜铃酸、顺铂、腺嘌呤诱导形成的化学模型，转基因杂交、肾损伤因子-1诱导形成的转基因修饰模型，双侧缺血-再灌注损伤术联合庆大霉素、单侧肾切除联合血管紧张素Ⅱ、单侧缺血-再灌注损伤术Z-IETD-FMK联合pLVX-shTNC质粒诱导形成的复合模型，以供相关研究人员了解和借鉴。

目的：对两种手术治疗方式对颌骨囊肿患者的影响进行探究，希望可以为颌骨囊肿治疗研究提供一点帮助。方法：selleck化学研究时段为2019年11月—2022年11月，研究对象为院内收治的颌骨囊肿患者，共计62例，随机编号后利用计算机随机抽取方式划分为对照组与观察组，分别采取颌骨囊肿刮治术与开窗减压术开展治疗工作，对两组相此网站关数据信息进行统计与分析。结果：治疗后，与对照组相比，观察组囊腔体积缩小程度更大、骨disordered media质增生厚度更大、骨密度更大，观察组并发症发生率更低、视觉模拟疼痛程度评分更低，观察组患者对治疗方案满意度更高，差异显著（P<0.05）。结论：与颌骨囊肿刮治术相比，开窗减压术更有利于颌骨囊肿患者的治疗，可有效改善患者术后骨质修复状况，减少相关并发症对患者的不良影响，减轻患者生理痛苦，将患者满意水平提升到新高度。

目的 探讨无毛蛋白（hairless protein,Hr）在乳腺癌变和进展过程中的表达及临床意义。方法 收集2007年1月至2015DNA Damage/DNA Repair抑制剂年12月石河子大学医学院第一附属医院石蜡包埋乳腺癌旁正常组织81例（距癌组织>5 cm）、普通型导管增生79例、不典型导管增生26例、导管原位癌64例、浸润性导管癌138例。免疫组织化学法和数据库检测Hr在乳腺癌旁正常组织、普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性乳腺癌中表达，分析HSmoothened Agonist生产商r表达与病人临床病理参数间关系及对预后的影响。结果浸润性导管癌中Hr蛋白免疫组织化学评分[（4.14±3.78）分]显著低于乳腺癌旁正常组织[（6.28±4.43）分]、普通型导管增生[（6.85±4.20）分]、不典型导管增生[（6.12±3.84）分]、导管原位癌[（5.41±3.86）分]，五组间差异有统计学意义（P<0.001）。Hr表达与淋巴结转移、TNM晚分期和雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮biologic medicine生长因子受体-2(HER-2)阴性状态（P<0.05）显著相关，Hr蛋白在骨转移乳腺癌中高表达（P=0.001）且与骨转移显著正相关（P=0.005）。Hr高表达的乳腺癌病人无复发生存率和总生存率显著降低（P<0.05）。结论 Hr在乳腺癌变和早期浸润阶段发挥抑癌基因功能，在肿瘤恶性进展和转移尤其骨转移过程中起促进作用，与病人预后不良密切相关。

研究背景及目的:急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)的病因主要有胆石症、饮酒、高甘油三酯血症(Hypertriglyceridemia,HTG)。HTG导致的胰腺炎比其他病因引起的AP更为严重,一旦发展为重症其死亡率极高。HTG诱发AP的确切病理生理学尚不清楚。目前大多数学者最认可的机制是胰脂肪酶将甘油三酯(Triglyceride,T此网站G)水解成游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA),FFA对胰腺上皮细胞和腺细胞产生毒性效应,从而发展为高脂血症性急性胰腺炎(Hyperlipidemia Acute Pancreatitis,HLAP)。治疗HLAP最重要的手段是降低血脂水平,一般治疗措施降脂作用缓慢,其中高脂MK-4827试剂血症性重症急性胰腺炎(Hyperlipidemia Severe Acute Pancreatitis,HLSAP)患者病情发展快,常伴有器官衰竭,病死率极高。既往研究已表明血浆置换可以快速降低TG,但是血浆置换成本高,费用昂贵,且血浆置换用于治疗HLSAP的相关研究病例较少,多数为回顾性案例报道,缺少前瞻性随机对照试验,目前血浆置换用于治疗HLSAP预后的影响尚存在较大争议。因此本研究主要通过前瞻性随机对照试验来了解血浆置换对HLSAP预后的影响,以期对临床提供有价值的信息。方法:采用前瞻性研究方法,将2020年8月至2023年1月就诊于绵阳市中心医院的高脂血症性急性胰腺炎(Hyperlipidemia Acute Pancreatitis,HLAP)患者随机分成两组:实验组和对照组。截至2023年1月符合纳入排除标准并同意参加研究的患者共有58例。对照组患者予以常规标准保守治疗(饮食控制、镇痛、液体复苏、降脂药物、肝素、胰岛素),实验组在常规标准保守治疗的基础上联合血浆置换治疗。对两组患者的临床各项指标、并发症发生率、住院时间及费用、死亡率等方面进行对比分析。结果:1.本研究共纳入58例HLAP患者,其中24例为实验组,34例为对照组。实验组中:重症急性胰腺炎患者19例,非重症急性胰腺炎患者5例,对照组中重症患者有14例,非重症患者有20例。实验组和对照组患者在年龄、性别、入院时SIRS发生率、APACHE II评分、血AMY、血LPS、血糖、immuno-modulatory agentsTG、血清中钙离子、WBC、PCT、乳酸、LDL等方面均无统计学差异。2.HLAP患者常规治疗和联合血浆置换治疗对于患者的死亡率、住院总时间、并发症发生率等方面均无明显差异,联合血浆置换组临床住院费用明显更高,同时还会增加ICU住院天数。3.在非重症HLAP患者中,采取联合血浆置换组住院费用及ICU入住天数明显高于常规治疗组,两者差异具有统计学意义;而两组患者在死亡率、临床并发症、住院总时间等方面无明显差异。4.采取不同治疗方案的HLSAP患者,常规治疗和联合血浆置换治疗对于患者的死亡率、住院总时间、ICU入住天数、并发症发生率等方面均无明显差异,但联合血浆置换组临床住院费用明显更高,差异有统计学意义。5.通过比较实验组第一次血浆置换后与对照组常规标准保守治疗后1天血脂水平,可以得出:两种治疗方案均可以明显降低血浆中TG水平,但实验组在降血脂方面更有优势(治疗前后TG下降率:实验组80.49%±12.4%,对照组71.13%±16.27%,P<0.05)。结论:无论是HLSAP还是非重症HLAP,联合血浆置换都不能明显改善临床预后,而且还会增加临床费用,还会引起非重症HLAP患者ICU入住时间延长。常规标准保守治疗和联合血浆置换均可以降低HLAP患者TG水平,但联合血浆置换在降脂速率方面更有优势。

甘蔗(Saccharum officinarum)是我国主要的糖料作物,在我国南方广为种植。甘蔗线条花叶病毒(sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)是甘蔗花叶病的主要病原之一,SCSMV编码的P1蛋白在病毒致病过程中具有重要作用,但其参与病毒和植物相互作用的分子机制尚不明确。本实验通过基于马铃薯病毒X(potato virus X,PVX)的表达系统,使用新开发的4D蛋白质组学方法,鉴定了 P1SCSMV异源表达中的差异累积蛋白(DAPs)。采用qRT-RCR和Western blot分析评估数据的可信度和准确度。接着通过基于烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)对4个候选基因进行了功能研究,包括2个高度上调的基因(NbEAS和NbECA)和2个显著下调的基因(NbASP和NbXTH1)。发现沉默NbXTH1基因本氏烟植株表现出叶片皱缩卷曲的症状,表明了沉默NbXTH1基因对本氏烟产生了影获悉更多响。并且进一步测定发现在转基因P1 SCSMV本氏烟和侵染SCSMV的甘蔗中NbXTH1表达水平均受到P1SCSMV的抑制。为明确P1SCSMV在本氏烟体内如何抑制NbXTH1的相对表达量,验证了直接作用于NbTransjugular liver biopsyXTH1上游的转录因子NbBES1是否与P1SCSMV存在互作关系。结果发现在体内和体外,P1SCSMV均直接与转录因子NbBES1发生相互作用。这种相互作用抑制了 NbBES1与NbXTH1启动子区E-box元件的结合,并干扰了植物中NbXTH1的正常转录。XTH基因具有时空表达特异性,参与植物细胞壁重塑、植物生长发育、响应逆境胁迫等多种生物学功能。本研究通过瞬时表达NbXTH1基因,TRV沉默NbXTH1基因以及转基因超表达NbXTH1本氏烟处理进行接种病毒和真菌来鉴定其广谱抗病的能力,结果显示NbXTH1蛋白的存在提高了本氏烟对植物病毒和真菌的抗性,即NbXTH1蛋白具有一定的广谱抗病能力。XTH能够催化木葡聚糖分子的水解与合成以及参与木聚糖的降解。木葡聚糖和木聚糖是半纤维素的主要成分。为了进一步探究NbXTH1基因的抗病机理,本研究检测了在转基因P1SCSMV本氏烟和SCSMV侵染甘蔗细胞壁中木葡聚糖和木聚糖的含量,发现木葡聚糖含量降低,木聚糖含量增加。通过透射电镜发现转基因NbXTH1本氏烟植株的细胞壁宽度比非转基因植株的细胞壁厚。喷施NbXTH1selleck激酶抑制剂底物小分子木葡聚糖溶液也证实木葡聚糖影响了植株的抗病能力。综上结果表明NbXTH1通过调控木葡聚糖和木聚糖在细胞壁中的含量分布,从而使细胞壁超微结构发生改变,在抵抗植物病毒和真菌的入侵中发挥作用。本研究基于SCSMV编码的P1蛋白是一个致病因子,通过4D蛋白质组学方法筛选鉴定出了差异表达蛋白NbXTH1,同时发现了 P1SCSMV直接与转录因子NbBES1发生相互作用抑制了 NbBES1与NbXTH1启动子区E-box元件的结合,干扰了 NbXTH1的正常转录。验证了 NbXTH1通过调控细胞壁中木葡聚糖和木聚糖含量控制细胞壁结构,从而发挥广谱抗病能力。为NbXTH1参与生物胁迫提供了直接证据,也为小分子木葡聚糖和广谱抗病基因XTH在作物育种中的应用提供了基础。

背景：股骨转子间骨折好发于老年人，手术后会出现大量的隐性失血，减少隐性失血可以降低并发症和住院时间。目的：评估延长氨甲环酸的使用时间对股骨近端防旋髓内钉治疗转子间骨折围术期隐性失PF-03084014细胞培养血的影响。方法：选择2022年1月至2023年5月自贡市第四人民医院经急诊收治入院的老年股骨转子间骨折患者共62例，均在牵引床上闭合牵引复位后置入股骨近端防旋髓内钉治疗。根据氨甲环酸的使用时间分为2组，对照组38例在切开皮肤前15-30 min给予氨甲环酸1 Tissue biomagnificationg静脉滴注，3 h后追加1 g；试验组24例在对照组的基础上，术后第1天再追加氨甲环酸1 g静脉滴注每12 h一次。术前、术后当天、术后第1,3,5天均复查血常规，统计血红蛋白量和红细胞压积，理论总失血量采用Gross方程计算，同时记录两组患者并发症发生情况。结果与结论：(1)通过统计学分析，两组患者术中显性出血量相差较小，差异无显著性意义(P> 0.05)；(2)试验组围术期血红蛋白下降量、总失血量、隐性失血量低于对照组，差异有显著性意义(P <0.05)；(3)试验组术后第3天的血红蛋白值、术后第1,3天的红细胞压积值高于对照组，差异有显著性意义(P <0.05)；(4)两组术后血红蛋白和血小板计数呈下降趋势SAHA IC50，第3天的血红蛋白值为最低值，术后第1天的血小板值为最低值，然后开始回升；(5)两组患者术后并发症发生率相比差异无显著性意义(P> 0.05)；(6)结果表明，术后延迟氨甲环酸的使用时间，可能有助于减少股骨近端防旋髓内钉治疗股骨转子间骨折的隐性失血量，并不会增加并发症风险。

为明确蓝星睡莲(Nymphaea colorata)蓝色、白色两种花色花瓣在不同发育时期的类黄酮物质含量、成分及其代谢途径中的关键基因，本研究采用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技术，分析了蓝星睡莲5个发育时期花瓣的花青苷和黄酮醇苷含量和成分.结果表明，蓝、白花瓣中类黄酮含量差异明显，白花花瓣花青苷和黄酮醇苷含量均保持在较低水平，尤其是在S4,S5时期与蓝花达到了显著性差异，可能是造成蓝白花色差异的物质成因.在蓝星睡莲花瓣中，两种花色花瓣类黄酮成分相同，共鉴定出3种花青苷selleck NMR和11种黄酮醇苷.花青苷为飞燕草素-3-O-β-半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷)和飞燕草素-3′-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷);黄酮醇苷主要有槲皮素3-O-半乳糖苷、杨梅素3-O-α-BelnacasanL-(3″-O-丙二酰)-Immunomodulatory action鼠李糖苷、杨梅素3-O-α-L-鼠李糖甘、杨梅素3-O-α-L-(3″-O-乙酰)-鼠李糖苷、槲皮素3-O-α-L-(3″-O-丙二酰)-鼠李糖苷等.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术进一步分析了类黄酮代谢途径相关基因在两种花色花瓣中的转录表达情况，结果表明，在蓝花花瓣5个发育时期，类黄酮3′5′-羟化酶基因(F3′5′H)、黄酮醇合成酶基因(FLS)、二氢黄酮醇4-还原酶基因(DFR)的转录表达变化与花青苷积累趋势一致，推测其可能是蓝色花瓣花青苷积累的关键结构基因；F3′5′H和糖基转移酶基因(GT)在蓝花中的表达量均明显高于白花，推测其是造成蓝白花色差异的重要基因.本研究为进一步解析蓝星睡莲花色形成分子机理提供了新的证据，为睡莲蓝色花分子育种提供了参考.

盐酸小檗碱具有良好的抗炎活性,但口服吸收差,注射给药会引起严重的副作用。脂质体等纳米递送系统可靶向递送药物,若选择合适的靶向配体与盐酸小Metabolism抑制剂檗碱脂质体偶联,可以实现靶向递送,达到减少毒性,提高抗炎效果的作用。由于炎症部位的血管内皮细胞会高表达P-选择素,低分子量岩藻多糖对P-选择素有良好的结合能力,将盐酸小檗碱包进脂质体中,再用低分子量岩藻多糖修饰脂质体,使脂质体能特异性的与能表达P-选择素的活化血管内皮细胞结合,可以实现盐酸小檗碱的炎症靶向递送。本研究鉴于P-选择素与岩藻多糖的特异性结合,拟制备低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,并对其被摄取量、摄取方式、全身分布以及抗炎作用展开研究,评价盐酸小檗碱炎症靶向递送作用。本研究主要内容如下。1.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备主要包括:盐酸小檗碱含量测定方法的建立、盐酸小檗碱脂质体包封率方法的建立、盐酸小檗碱脂质体处方优化、脂质体的表征。结果显示:(1)高效液相色谱法检测盐酸小檗碱含量在浓度范围为0.25-50μg/m L时,线性关系良好,回归曲线方程为Y=33.34X–7.939,R~2=0.9994,并且稳定性符合标准;(2)采用葡聚糖凝胶柱法分离盐酸小檗碱脂质体与未包封的盐酸小檗碱,两者出峰间隔为3 min,且回收率符合标准,此方法适合盐酸小檗碱脂质体的分离,进而可以计算包封率;(3)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的最佳处方与工艺:磷脂浓度10 mg/m L、磷脂胆固醇比1:1、磷脂药物比35:1、水化p H=6.0。制备过程:将膜材按照比例溶解在10 m L氯仿中,40℃旋转蒸发彻底除去溶剂,随后加入10 m L p H=6.0的PBS溶液,水化30 min,将洗下的膜材在冰水浴的条件下,用探头超声条件为400 W超声2 s,间隔2BMS-907351半抑制浓度 s,超声10 min,得到的脂质体经0.22μm微孔滤膜过滤后,用脂质体挤出器将脂质体反复挤出通过100 nm的聚碳酸酯膜,然后使用Na OH调节脂质体外水相p H到7,加入低分子量岩藻多糖,室温反应过夜,最终得到黄色半透明低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体;(4)最优处方制备的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体粒径为104.13±1.18 nm,Zeta电位为-12.2±0.46 m V,包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。2.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体外靶向人脐静脉血管内皮细胞的作用研究用LPS激活人脐静脉血管内皮细胞,评价低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的细胞毒性、被摄取量、被摄取方式以及抗炎效果。结果显示:(1)≤80μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对活化的人脐静脉血管内皮细胞活性无显著影响(P>0.05);(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体被活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取量是未修饰的盐酸小檗碱脂质体的1.5倍;(3)活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的方式主要通过小窝蛋白和Medium Frequency网格蛋白介导的内吞作用,且需要能量;(4)以盐酸小檗碱计,10μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著(P<0.01)抑制活化的人脐静脉血管内皮细胞产生IL-1β和IL-6。以上结果表明,以盐酸小檗碱计,低于80μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对活化的血管内皮细胞无明显细胞毒性,10μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体具有良好的抗炎能力,效果优于同浓度的游离盐酸小檗碱或未被修饰的盐酸小檗碱脂质体,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能与P-选择素结合,然后被活化的人脐静脉血管内皮细胞主动摄取,具有炎症靶向潜力。3.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体内炎症靶向作用研究研究了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在大鼠足肿胀模型中,在炎症部位与各个脏器中分布、体内抗炎效果以及组织病理变化影响。结果显示:(1)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在肿胀的右足中的浓度高于未修饰的盐酸小檗碱的浓度,也高于其在无炎症的左足中的浓度,而低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体与未修饰的脂质体在各脏器中分布无显著差别;(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著缓解(P<0.01)大鼠足肿胀模型中血浆中白细胞计数及单核细胞计数升高,IL-1β与IL-6显著升高,足趾重量增加等趋势;(3)3 mg/kg的游离盐酸小檗碱或盐酸小檗碱脂质体尾静脉注射给药7 d后,大鼠心脏出现少量炎性细胞浸润,肝脏出现局部坏死,肝细胞发生脂肪变性,而注射相同浓度低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的大鼠各脏器无明显病变。以上结果表明,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对大鼠足肿胀炎症模型与未修饰的脂质体或游离盐酸小檗碱相比,能提高抗炎效果,具有靶向作用。综上所述,本研究制备了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,获得了最优处方和制备工艺,其包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。在体外,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能通过与血管内皮细胞上P-选择素特异性结合并被内吞,提高了摄取量、逃避溶酶体降解;在体内,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体通过靶向炎症部位血管内皮细胞提高炎症部位药物浓度,降低非炎症部位脏器浓度,最终提高盐酸小檗碱抗炎效果,发挥炎症靶向作用。

脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是全世界意外死亡的重要原因之一。即使是幸存者,也可能存在严重的神经功能障碍,造成巨额医疗费用和沉重的社会负担。脑基底节区富含白质纤维束,而脑出血最可能发生在基底节区。因此,脑出血后常常发生白质损伤(White matter injury,WMI),导致神经功能障碍和长期不良预后。然而,到目前为止,解决这一问题的有效策略仍然有限。研究表明,神经炎症发生在脑出血的早期,是导致WMI的主要因素之一。血红蛋白降解引起的炎症因子释放和小胶质细胞活化是导致WMI的重要原因。此外,炎症引起的脑血屏障损伤也会导致巨噬细胞浸润和脑水肿,从而加剧炎症反应。然而,对由炎症反应引起的WMI的干预措施同样是有限的。本文中我们发现了钾通道Kv1.3可能是改善脑出血后神经炎症,促进预后的关键靶点。早期文献报道,钾离子通道Kv1.3可能参与了脑出血后的炎症反应,使用Kv1.3的特异性阻断剂5-(4-苯氧基丁氧基)补骨脂素(PAP-1)能够引发炎症抑制效应,机制可能与血肿周小胶质细胞从M1亚型向M2亚型的转变有关。Kv1.3阻断尚未在ICH早期神经炎症小鼠模型中进行过测试,而抑制Kv1.3可能是促进ICH小鼠预后的潜在靶点。此外,血红蛋白富含铁。随着ICH介导的神经炎症进展到中后期,血红蛋白会逐渐降解,血红蛋白中的铁由是被释放,这种释放出的二价铁离子能够通过芬顿反应诱导活性氧(ROS)的产生,后者将导致髓鞘的降解。同时,血红蛋白释放的铁也可以成为脂质过氧化酶的组成部分,导致少突胶质细胞铁死亡和WMI。因此,靶向ICH后血肿周铁及其引发的氧化应激反应可能是减轻小鼠WMI的新方法。在本文中,我们发现了神经外科常用药右旋普拉克索(DPX)可能会减少白质纤维束铁介导的过氧化损伤及少突胶质细胞的铁死亡并改善WMI。这是一种用于不宁腿综合征,以及帕金森的辅助用药,已经被FDA批准上市,但在脑出血领域从未有报道使用。从机理上讲,DPX可能通过减轻铁沉积,ROS产生,增加谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁死亡抑制蛋白(FSP1)的表达而发挥作用。一.钾离子通道Kv1.3阻断在小鼠脑出血模型早期通过抑制神经炎症减轻WMI。目的探讨ICH后神经炎症引起的WMI以及PAP-1阻断Kv1.3的作用。方法通过向C57BL/6J小鼠(9-10周龄,24-26g)的基底节注射15μL血液建立ICH模型。然后将小鼠随机分为三组:ShamPacemaker pocket infection、ICH和ICH+PAP-1组。使用实时聚合物链反应(PCR)(n=3)、蛋白质印迹(WB)(n=3)和免疫荧光(IF)(n=3)检测ICH引起的Kv1.3随时间的表达变化情况。采用开放场试验(OFT)(n=8)、巴氏小鼠评分(BMS)(n=8)和小鼠体重变化(n=8)进行行为学评估。WB(n=3)、IF(n=3)和透射电子显微镜(TEM)(n=3)用于检测白质损伤。PCR、WB和酶Mirdametinib化学结构联免疫吸附试验(ELISA)(n=3)用于检测炎症因子。PCR(n=3)、WB(n=3)和IF(n=3)用于评估M1-M2小胶质细胞组成。结果1.与Sham组相比,ICH D3血肿周围Kv1.3表达显著增加。2.ICH后小鼠体重下降,尤其在D1-D3。Kv1.3阻断剂PAP-1缓解了体重下降。与Sham组相比,ICH组小鼠的BMS评分在D3时降低。而与ICH组相比,ICH+PAP-1组的小鼠BMS有所增加。OFT也具有相同的变化趋势,从不同剂量组的结果来看,40 mg/kg/d的PAP-1效果最佳。3.ICH组D3白质纤维束损伤明显,使用PAP-1 40mg/kg/d可减轻损伤。IF和WB均显示ICH中MBP表达减少,而ICH+PAP-1组与ICH组相比MBP表达增加。与Sham组相比,TEM D3脱髓鞘现象明显,G-比率显著增加,PAP-1在脱髓鞘和G-比率方面显示出强有力的保护作用。4.WB、PCR和ELISA实验均证实,相比于Sham组,ICH组小鼠脑血肿周炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)表达增加,而PAP-1治疗组表达相对减少。5.相比于Sham组,ICH组抗炎因子如白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)表达增加,但在ICH+PAP-1组中,这些分子表达更高。6.与Sham组相比,ICH后血肿周围M1样小胶质细胞的数量增加,而PAP-1的应用减少了M1样小胶质细胞。7.与Sham组相比,ICH后血肿周围M2样小胶质细胞的数量增加,而PAP-1的应用使M2样小胶质细胞的数量甚至高于ICH组。8.ICH后NF-κB信号被激活,体现为p65和p50的磷酸化增多,这些l磷酸化可以通过使用PAP-1来消除。结论使用Kv1.3阻断剂PAP-1能够通过抑制NF-κB信号通路促进小胶质细胞极化为M2样小胶质细胞,减少了促炎细胞因子的积累,并上调了抗炎和神经营养因子的水平。以上药理作用最终缓解了WMI。二.普拉克索通过抑制小鼠脑出血模型中晚期铁介导的白质纤维束过氧化损伤促进预后目的检测右旋普拉克索在小鼠脑出血模型中的白质保护和铁介导的氧化应激抑制作用。方法小鼠生存率(n=10)和体重变化(n=8)用于DPX的效果和毒性评估。行为学测试,如BMS(n=8)、OFT(n=8)、衡量行走(BWT)(n=8)和前肢力量(n=8),用于评估是否服用DPX的预后差异。WB(n=3)、IF(n=3)、TEM(n=3)和苏木精伊红(HE)染色(n=3)用于白质纤维束损伤评估。Perl’s染色(n=3)和DHE染色(n=3)用于评估血肿周围的铁离子和自由基水平。TEM(n=3)用于寻找铁死亡特征性线粒体。WB(n=3)、IF(n=3)用于检测ICH后铁介导氧化应激分子机制。结果1.ICH组小鼠在BMS中的行为状况、OFT中小鼠的平均速度、前肢力量和BWT表现均比Sham组显著降低。DPX各剂量组均能改善小鼠的行为失能。5mg/kg/d的DPX在各剂量组中显示出最好的结果。2.相比于selleckchem diABZI STING agonistSham组,ICH组生存率和体重显著下降。ICH+DPX组与ICH组相比生存率和体重有所增加。3.ICH组白质损伤明显,MBP表达减少,血肿大小明显,脱髓鞘增加。相比于ICH组,DPX在ICH的D7能够发挥保护作用。4.ICH组第7天铁和ROS均增加。与ICH组相比,DP减轻了ICH D7上的铁和ROS积累。5.与Sham组相比,ICH组的线粒体皱缩百分比在D7时显著增加,DPX减少了收缩的线粒体。6.与Sham组相比,ICH D7时铁介导氧化应激相关基因的表达增加。DPX降低了铁介导氧化应激相关基因的表达结论ICH可引起长期WMI,在ICH的中晚期,白质纤维束可发生铁介导的氧化应激损伤。5mg/kg/d的DPX具有保护此种损伤的作用。机制可能与稳定线粒体膜电位,提高抗氧化分子GPX4和FSP1表达有关。