PDK1信号通路

神经酸(Nervonic acid)是大脑神经纤维以及菌膜的重要组成成分,可以修复和保护神经细胞。但同时神经酸也存在水溶性差、生物利用率低等问题,限制了其进一步的应用。因此,探索提高神经酸水溶性、增加其生物利用Ipatasertib临床试验度的研究具有重大意义。本研究以神经酸为研究对象,通过分离纯化制备得到神经酸,以壳寡糖、丝素蛋白为微载体包埋神经酸制备水溶性微粉。设计模拟体外释放实验和贮藏稳定性实验,研究了神经酸微粉的特性,结合扫描电镜、热分析、X射线衍射、红外及体外抗氧化等技术手段对神经酸微粉进行表征。最后,采用淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))处理神经元细胞(HT22)建立阿尔茨海默症细胞模型,从细胞水平探讨药物抗AD的作用机制。神经酸的分离纯化工艺研究。分离纯化工艺中首先,对元宝枫种仁油进行皂化处理得到混合脂肪酸。以皂化率为评价指标,采用单因素实验和正交实验优化脂肪酸皂化工艺,得到最佳皂化工艺参数为:A_2、B_2和C_2(皂化时间为3 h,用碱量为10%,皂化温度为80°C)。在此条件下,三次平行验证实验所获得元宝枫种仁油皂化率为75.83%±3.79。运用分子蒸馏技术,对皂化所得混合脂肪酸进行纯化处理,以神经酸含量为评价指标,采用单因素方法和正交实验设计法富集神经酸,并优化神经酸纯化工艺。元宝枫神经酸纯化的最优工艺为:A_3、B_3、C_2和D_3(刮板转速为200 r/min,蒸馏温度为240°C,压力为100 Pa,进料速度为10 m L/min)。在此条件下,三次平行验证实验所获得元宝枫神经酸纯度为35.49%±1.78。神经酸水溶性微粉Microarrays(NA-WM)的构建及工艺优化。采用层层自组装技术(LBL),以神经酸作为基材,良好生物相容性的天然高分子化合物壳聚糖和丝素蛋白为壁材,通过单因素优化实验制备出具有水溶性的核-壳型(神经酸/丝素蛋白/壳聚糖)微粉,运用Box-Behnken对NA-WM构建工艺最优因素进行筛选。得到NA-WM的最佳制备工艺为:壳寡糖固液比为1:2 g/m LCP-690550使用方法、包合速度为6500 r/min、包合时间为15 min、旋蒸温度为60℃、神经酸-壳寡糖包合物与丝素蛋白质量比为1、乳化速度为7500 r/min、乳化时间为15 min,进行3次平行实验,NA-WM的粒径为446 nm,与Box-Behnken预测值相差小于26。对采用层层自组装技术构建得到的NA-WM,进行热重分析、X射线衍射分析和红外光谱分析,发现壳寡糖和丝素蛋白成功封装神经酸得到水溶性微粉。检测得到酸环境响应的NA-WM水溶率为96.03%,说明以神经酸作为基材,壳聚糖和丝素蛋白为壁材,通过层层自组装技术制备的神经酸水溶性复合微粉具有良好的水溶性;扫描电镜图像显示制备得到的微粉粒子形态呈球形,平均粒径为420±35 nm,电位为-28.81±1.44 m V、包封率为88.11%,载药量28.27%。对NA-WM贮藏稳定性和体外释放特进行评价,结果表明NA-WM具有提高神经酸的贮藏稳定性的作用;酸环境是NA-WM的主要响应环境,自组装微粒具有显著的缓释作用。神经酸水溶性微粉的体外抗氧化活性检测。对制备的NA-WM以及原料本身进行体外抗氧化活性检测。结果表明NA-WM具有较强的综合抗氧化活性。神经酸水溶性微粉的体外活性研究。对制备的酸环境响应NA-WM进行体外抗AD作用机制表征,开展了细胞毒性分析、线粒体膜电位测定、细胞形态学分析、Aβ诱导损伤抑制作用、细胞CAT分析、细胞SOD分析、细胞MDA含量分析、细胞ROS抑制作用、细胞GSH-PX酶分析、AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡分析等活性检测,表明NA-WM能显著增强Aβ_(1-42)诱导损伤的HT22细胞的活力,可以明显降低受损HT22细胞产生的ROS的含量,抑制活性氧的积累,改善线粒体功能。

乳清分离蛋白富含多种必须氨基酸、易于人体消化吸收被广泛用于食品工业。但乳清分离蛋白在食品加工过程中易受外界因素的影响,如温度、p H和离子强度等,造成蛋白质聚集或沉淀,导致其功能特性丧失,限制其应用领域。无有毒化学试剂添加的美拉德反应是一种绿色、安全的蛋白质改性方法。传统的干热法美拉德反应接触不均匀,湿热法美拉德反应所需温度高易造成蛋白质变性,并且两种方法在制备过程中都存在能耗高、废水产量大的问题。本文结合干热法和湿热法的优势,在湿热法的基础上使用乙醇溶液替代部分水溶液,建立乳清分离蛋白和葡聚糖在醇水溶液中进行的美拉德反应模型,分析乳清分离蛋白-葡聚糖接枝物Microscopes的功能特性,探讨该接枝物作为壁材制备的微胶囊鱼油的理化性质和稳定性。主要研究结果如下:(1)以接枝度为指标,在单因素试验的基础上选择以蛋确认细节糖质量比、反应时间、反应温度和乙醇体积浓度进行四因素三水平响应面设计试验,优化醇水预处理美拉德反应工艺。结果表明,各因素对接枝度的影响顺序为:乙醇体积浓度>蛋糖质量比>反应时间>反应温度。最优工艺条件为:蛋糖质量比1:3,反应温度70℃,反应时间23 h和乙醇体积浓度92%,在此条件下接枝度为24.22±0.35%。(2)研究了对不同反应程度的糖基化蛋白结构和功能特性。结果表明,接枝物的中间产物和褐变程度随反应时间延长逐渐积累,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和光谱技术均证实乳清分离蛋白-葡聚糖接枝物的生成,表面疏水性结果表明葡聚糖的共价接枝对乳清分离蛋白的疏水基团具有屏蔽作用,随着接枝度的增加其表面疏水性显著降低,扫描电子显微镜显示共价接枝葡聚糖后乳清分离蛋白的结构从典LY2835219价格型的表面光滑球状转变为表面较为粗糙的块状结构。浊度和溶解度表明乳清分离蛋白-葡聚糖接枝物具有良好的p H稳定性。与未改性乳清分离蛋白相比,接枝物乳化性和乳化稳定性分别提高了36.86%和26.95%,还原力提高了1.13倍,DPPH和ABTS自由基清除率提高到了42.98%和54.79%(3)将乳清分离蛋白-葡聚糖接枝物作为壁材应用于微胶囊化鱼油,考察了鱼油微胶囊的理化特性和稳定性。结果表明,鱼油微胶囊粉末均一,无结块和鱼腥味,水分含量为3.50±0.44%,堆密度为0.23±0.03 g/cm~3,休止角为33.70±0.59°,溶解度为69.08±4.04%,包埋率为76.04±2.03%。鱼油微胶囊红外光谱出现鱼油特征吸收峰但强度降低,表明其被成功包埋在微胶囊中。扫描电子显微镜显示鱼油微胶囊具有光滑致密的表面结构。差示扫描量热法确定鱼油微胶囊的玻璃化转变温度为109.27℃。60℃的加速储藏中,经过包埋的鱼油一周后过氧化值(POV)值为11.45±0.59 meq/kg变化缓慢,表现出良好的储藏稳定性。采用体外模拟消化实验发现乳清分离蛋白-葡聚糖接枝物的包埋可以实现对鱼油的缓慢释放。

目的:探究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCg)特异性抑制芳香乙酰胺脱乙酰基酶蛋白(arylacetamide deacetylase, AADAC)来诱导卵巢癌细胞发生铁死亡的分子机制。方法:体外培养卵巢癌细胞系(SK-OV-3、A2780、Hey和SW626)。CCK-8检测EGCg对卵巢癌细胞的半数抑制浓度(median inhibition concentration, IC_(50))。铁离子检测试剂盒检测细胞内Fe~(2+)的含量。活性氧(reactive oxygen species, ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS的含量。Western blot检测细胞内铁死亡相关蛋白GPX4和NOX1的表达。酶活实验检测EGCg对AADAC活性的影响。Westernhttps://www.selleck.cn/products/empagliflozin-bi10773.html blot检测EGCg对AADAC蛋白的影响。应用免疫组化和Western blot检测卵巢癌患者组织中AADAC的表达。应用siRNA沉默卵巢癌细胞总AADAC的表达。应用AADAC-KO敲除卵巢癌细胞中AADAC的表达。皮下成瘤验证小鼠体内EGCg对卵巢癌移植瘤生长的影响。结果:EGCg能抑制卵巢癌细胞的增殖，且对SK-OV-3和SW626细胞较为敏感。EGCg使卵巢癌细胞中Fe~(2+)含量增加，ROS含量增加，并抑制GPX4蛋白表达，促进NOX1蛋白的表达。EGCg能抑制AADAC蛋白的活性并促进其降解。AADAC在卵巢癌患者癌组织中高表达。沉默AADAC能促进卵巢癌细胞发生铁死亡。沉默AADAC后EGCg对卵巢癌细胞变得不敏感，并不能促进铁死亡的发生。相对于NCHuman genetics组，EGCg能抑制裸鼠移植瘤的生长，且移植瘤中AADAC表达下降，铁死亡被激活。结论:EGCg能特异性抑制AADAC来GSK2118436体内诱导卵巢癌细胞发生铁死亡。

目的 精神分裂症的发病机制尚不明确，其现有治疗药物疗效不理想、副作用较多。组胺与精神分裂症的发生密切相关，前期研究发现组胺受体存在细胞特异性功能。因此，本课题拟探究不同神经元上组胺受体在精神分裂症发生中的作用，并寻找精准治疗靶点。方法 利用Cre/loxp技术构建特异性敲除不同神经元上组胺受体的小鼠，并通过行为学、电生理、微透析等技术以及人脑样本进行探究。结果 胆碱能神经元上H1受体缺失引起小鼠产生精神分裂症阴性症状行为表型，并且有阴性症状患者的脑样本中基底前脑胆碱能神经元上H1受体表达下降。进一步发现可能是由于H1受体缺失后，投射至前额叶皮层的基底前脑胆碱能神经元功能降低，进而破坏了前额叶皮层锥体神经元的兴奋/抑High-risk medications制平衡。谷氨酸能神经元上H2受体缺失引起小鼠产生精神分裂症样阳性阴性症状相关行为selleck Tofacitinib表型，可能是内侧前额叶皮层谷氨酸能神经元上H2受体缺失后，HCN通道介导电流增加，进而引起神经元兴奋性降低导致的，并且精神分裂症患者的前额叶皮层谷氨酸神经元上H2受体表达下降。结论 胆碱能神经元上H1受体和谷氨酸能神经元上H2受体参与精神分裂症阳性和阴性selleckchem Etoposide不同症状发生，为精神分裂症的发病机制提供了“组胺受体假说”，并为精神分裂症的治疗提供了潜在精准药物靶点。

目的 探讨高血压合并冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者的血压变异性及其影响因素。方法 选择2021年1月至2022年1月于东部战区总医院秦淮医疗区接诊的100例高血压患者为研究对象，根据冠心病合并情况分为病例组（n=23）和对照组（n=77），分析患者的一般资料、血压变异性及其影响因素。结果 两组性别、饮酒、空腹血糖、血小板计数、血小板压积、体质指数、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）比较无selleckchem Baricitinib统计学差异；病例组年龄、吸烟、血小板分布宽度、血小板的平均体积（MPV）、总胆固醇（TC）及同型半胱氨酸（Hcy）水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；病例组24 h收缩压变异系数（24h SCV）、24h舒张压变异更多系数（24h DCV）、白天收缩压变异系数（dSCV）、白天舒张压变异系数（dDCV）、夜间收缩压变异系数（nSCVendocrine-immune related adverse events）及夜间舒张压变异系数（nDCV）水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；多因素非条件Logistic分析结果显示，年龄、吸烟、血小板分布宽度、MPV、TC、Hcy、24h SCV、24h DCV、dSCV、dDCV、nSCV及nDCV均是高血压合并冠心病的独立危险因素（P<0.05）。结论患者年龄、吸烟、血小板分布宽度、MPV、TC、Hcy、24h SCV、24h DCV、dSCV、dDCV、nSCV及nDCV均是高血压合并冠心病的危险因素，临床上对于具有危险因素的患者引起重视，以提高疗效。

微管(Microtubules,MTs)是真核细胞细胞骨架的重要组成成分之一,直接参与细胞的物质运输、形态建成和细胞分裂等生物学过程。在细胞中,微管呈现高度动态的聚合和解聚等过程,并形成动态变化的微管阵列。在植物细胞中,微管在细胞周期不同阶段形成多种微管阵列,包括周质微管、早前期带、纺锤体和成膜体等,从而精细调控植物细胞的分裂与形态建成。研究表明,一系列微管结合蛋白与微管直接结合,调控微管动态和阵列排布,与微管共同行使生物学功能。拟南芥MICROTUBULE ORGANIZATION 1(MOR1)蛋白是MICROTUBULEASSOCIATED PROTEIN 215(MAP215)家族微管结合蛋白成员。MAP215家族蛋白在真核生物中广泛存在,一般认为其作为微管聚合酶和微管成核因子参与调控微管动态。拟南芥MOR1基因是一个必需基因Dorsomorphin核磁,其功能缺失突变致死,文献报道的突变体大多为温度敏感突变体,在正常生长条件下无明显表型,从而限制了MOR1基因的进一步功能研究;此外,由于MOR1蛋白分子量较大,文献尚未报道全长MOR1蛋白融合荧光蛋白标签的转基因植物,从而无法在活细胞中直接观察MOR1蛋白的动态变化。本研究利用遗传学和细胞生物学等手段,获得了非致死MOR1基因等位突变,获得了表达融合绿色荧光蛋白(Green fluorscent protein,GFP)的MOR1-GFP转基因植物,解析了MOR1参与微管动态调控的分子机制,以及对植物生长发育的影响。研究结果如下:(1)根据拟南芥主根伸长对微管解聚药物Propyzamide的敏感性筛选拟南芥突变体库,获得了超敏感突变体propyzamide over-sensitive 1-1/mor1-10(pos1-1/mor1-10)及另外两个等位突变体pos1-2/mor1-11和pos1-3/mor1-1。基因克隆结果表明这些突变体中MOR1基因发生点突变造成蛋白错义突变。在药物处理条件下,相较野生型,mor1-10突变体的微管聚合与解聚速度均显著下降,微管阵列出现多种形态异常,进而导致了细胞的异常分裂和细胞扩张各向异性缺失,表明MOR1参与了微管动态的调控,并调控细胞的分裂与扩张。在正常培养条件下,mor1-10表现出植物的左旋生长表型。这些特异等位突变体的获得,为进一步研究MOR1基因功能提供了遗传学材料。(2)构建了内源MOR1启动子控制的MOR1全长基因组DNA融合GFP荧光蛋白标签编码序列的转基因二元载体,并成功回复了mor1-10突变体的药物敏感性和其他表型,表明转基因植物中表达的MOR1-GFP能够行使MOR1生物学功能。利用表达MOR1-GFP的转基因植物,在活细胞中观察了全长MOR1的动态变化。发现MOR1-GFP信号定位于各阶段微管阵列,包括早前期带、纺锤体、成寻找更多膜体以及间期周质微管。在周质微管中,MOR1-GFP信号定位于微管,并在微PCR Equipment管正末端富集,随着微管聚合追踪微管正末端。(3)发现MOR1与拟南芥KATANIN 1(KTN1)基因之间存在遗传互作关系。KTN1编码微管剪切蛋白katanin的p60催化亚基。相比各自单突变体,mor1-10 ktn1-7双突变体表现出更强烈的短根表型。进一步研究发现mor1-10 ktn1-7细胞分裂异常情况增加,细胞扩张失去各向异性,表明MOR1与KTN1协同作用调控细胞分裂与扩张。基于MOR1与KTN1的功能关系,通过多种蛋白互作实验手段发现并验证了MOR1通过其碳端结构域与KTN1发生直接的蛋白相互作用。(4)获得并观察了MOR1和KTN1双重荧光标签植物,发现二者在早前期带和成膜体上存在明显的共定位;同时在周质微管中,二者于微管交叉或分支处存在共定位。在mor1-10突变体中,KTN1介导的微管剪切频率下降,微管剪切等待时间提高,并进一步发现微管剪切等待时间的提高是由于潜在剪切位点招募KTN1所需时间延长所导致的。这些结果表明MOR1参与了潜在微管剪切位点对KTN1的招募,并正调控KTN1介导的微管剪切。综上,本研究通过特异非致死MOR1等位突变体的筛选获得,表达有功能的MOR1-GFP转基因植物的构建和MOR1的活细胞成像,揭示了MOR1的动态变化特征,发现了MOR1与KTN1通过直接相互作用协同调控微管动态与微管阵列排布从而调控植物生长发育的新机制,为植物微管细胞骨架调控生长发育的遗传调控网络提供了新信息。

目的:本研究旨在探究醛脱氢酶3家族成员A2(ALDH3A2)调节卵巢癌铁死亡,影响卵巢癌预后。方法:本文利用TCGA数据库、GTEx数据库、FerrDb数据库对卵巢癌样本进行生物信息学分析,筛选卵巢癌中铁死亡相关差异基因,并探究ALDH3A2表达量与卵巢癌预后的关系。通过siRNA及慢病毒调控卵巢癌细胞ALDH3A2的表达,并利用铁死亡诱导剂RSL-3处理卵巢癌细胞,通过qPCR、WB、CCK-8、IF、流式、转录selleck Dorsomorphin组测序等技术和方法,从卵巢癌细胞生物学功能、铁死亡标志物等层面研究ALDH3A2在卵巢癌中调控铁死亡的作用。对敲除ALDH3A2的卵巢癌细胞进行转录组测序,通过分析测序数据并设计实验探究ALDH3A2在卵巢癌中调控铁死亡的分子机制。最后利用慢病毒在卵巢癌细胞中过表达ALDH3A2并通过相关实验证实ALDH3A2对卵巢癌铁死亡的调控作用。结果:1、高表达ALDH3A2与卵巢癌患者预后不良密切相关,ALDH3A2高表达组总生存期(OS)、无进展生存期(FPS)、进展后生存期(PPS)均小于低表达组。2、与对照组相比,siRNA在MRTX1133卵巢癌细胞中抑制了ALDH3A2的表达,并导致卵巢癌细胞增殖减缓,同时增强了RSL-3诱导的卵巢癌铁死亡。3、构建的cas9慢病毒在卵巢癌细胞中敲除了ALDH3A2,导致卵巢癌细胞对RSL-3敏感性增强,表现为脂质过氧化物蓄积增多,细胞存活率下降。4、转录组测序显示ALDH3A2敲除影响了卵巢癌细胞谷胱甘肽(GSH)合成与代谢相关过程,检测细胞内GSH含量显示敲除ALDH3A2后卵巢癌细胞内GSH含量明显下降。5、构建的过表达慢病毒在卵巢癌中上调了ALDbeta-granule biogenesisH3A2的表达,导致卵巢癌细胞对RSL-3敏感性降低,并明显升高细胞内GSH含量。结论:本研究表明,ALDH3A2高表达导致卵巢癌患者预后不良,ALDH3A2在卵巢癌细胞中抑制铁死亡的发生,为临床治疗卵巢癌提供一个潜在的治疗靶点。

研究背景:EZH2(enhancer of zeste homolog 2)是多梳抑制复合物2(PRC2)的三个核心亚单位之一。medicines reconciliation它具有组蛋白甲基转移酶活性,特异性催化目标基因启动子上组蛋白3赖氨酸27(H3K27)甲基化。KDM6A(lysine-specific demethylase 6A)是EZH2的一种重要的拮抗基因,正常情况下二者功能处于动态平衡,当KDM6A缺失或者EZH2过表达的情况下,这种平衡就会被打破,从而可能导致多种肿瘤的发生与发展。现有研究表明,EZH2可能成为多种KDM6A缺陷的肿瘤的治疗靶点。虽然KDM6A和EZH2在多种肿瘤中均得到不同程度的研究,但是在食管鳞状细胞癌(ESCC)中仍然缺乏相关的研究。本项研究将EZH2和KDM6A联合食管鳞状细胞癌的放射治疗进行研究,了解KDM6A在ESCC中的突变情况,以及靶向EZH2对KDM6A缺陷型ESCC放疗敏感性的影响及其机制的初步探讨。研究目的:初步探讨EZH2基因的铁死亡调控效应与KDM6A缺陷型ESCC的放疗敏感性之间的关系研究方法:为了检测人食管鳞状细胞癌细胞株中的KDM6A的突变情况,选用Sanger法测序和WB检测食管鳞癌细胞的KDM6A的突变情况。选择KDM6A缺陷型细胞株KYSE180和KDM6A野生型细胞株TE1,采用慢病毒干扰技术构建EZH2稳定沉默株或用EZH2抑制剂Tazemetostat(EPZ-6438)抑制EZH2。将细胞进行辐射处理后,检测ESCC细胞的EPZ-6438 IC50和G2/M细胞周期阻滞情况,用平板克隆形成实验计数各组的细胞集落数,用线性二次模型(L-Q model)对细胞的存活率进行拟合,计算出放射增敏比(SER),进而定量化沉默EZH2或抑制EZH2对KDM6A缺陷型ESCC细胞的放射敏感性的影响。免疫荧光检测γ-H2AX和53BP1在各组细胞中的表达,比较各组细胞DNA的损伤情况,分析干扰或抑制EZH2基因对辐射引起的KDM6A缺陷型ESCC细胞的DNA损伤的影响。差异分析和富集分析筛选沉默EZH2对KDM6A缺陷型ESCC的放射增敏性的调控通路,检测前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)在各组中的水平,观察干扰或抑制EZH2对KDM6A缺陷型细胞株PTGS2的影响。研究结果:Western blot检测发现KDM6A在食管鳞状细胞癌中出现突变,EPZ-6438IC50的检测发现,KDM6A野生型ESCC细胞株较缺陷型ESCC细胞株对EPZ-6438表现出更高的抗性。G2/M细胞周期阻滞测定和平板克隆实验结果显示,干扰EZH2或抑制剂抑制EZH2可以明显增加KDM6A缺陷型细胞株KYSE180的放疗敏感性,但是对TE1细胞株的放射敏感性的影响较弱。免疫荧光染色检测γ-H2AX和53BP1的实验结果证明了相对KDM6A野生型细胞株TE1,干扰或抑制EZH2可以明显增加辐射诱导的KYSE180细胞株的DNA损伤。差异和富集分析筛选结果得出,沉默EZH2增加KDM6A缺陷型ESCC细胞KYSE180的放射敏感性是通过激活铁死亡通路来调控的。通过检测细胞中PTGS2,发现抑制或干扰EZH2可以增加KDM6A缺陷型细胞株中的PTGS2水平,但是对野生型的细胞株则没有影响。研究结论:KDM6A在食管鳞状细胞癌细Laduviglusib试剂胞中存在突变,沉默EZH2或抑制EZH2可以明显增加KDM6A突变型ESCC细胞的放射敏感性,并且可以增D-Lin-MC3-DMA分子量强辐射诱导的铁死亡通路的激活,初步证实抑制EZH2增加KDM6A缺陷型ESCC细胞的放疗敏感性是通过增加辐射诱导的铁死亡效应来实现的。

目的 收集就诊于昆明医科大学第三附属医院的甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC患者的临床、病理及基因资料并整理分析，探究PTC基因突变与其侵袭性的相关性，并探讨BRAF V600E单基因突变与中央区淋巴结隐匿性转移的相关性，以期细化PTC的精准治疗。方法 选择2018年4月至2022年4月就诊于昆明医科大学第三附属医院符合入组标准且同意入组的PTC患者，收集入组患者临床病理及基因资料并整理分析：（1）各基因突变作观察组、野生型作对照，对比各基因型突变与野生型的差异；（2）多基因突变作观察组，单基因突变作对照，对比多基因突变与单基因突变的差异；（3）cN0患者中：BRAF V600E单基因突变作观察组，无基因突变作对照，分析BRAF V600E突变与中央区淋巴结隐匿性转移的相关性。结果 （1）BRAFV600E突变：中央区淋巴结转移（Central Lymph Node Metasselleck MCC950tasis CLNM）、N1占比大，转移淋巴结数目多，TPO-Ab降低（P <0.05）;TERT突变：高龄、男性、侧颈淋巴结转移占比大，侧颈淋巴结转移数目多，T分期晚（P <0.05）;RET突变：侧颈淋巴结转移占比大、侧颈转移淋巴结数目多，T分期晚（P <0.05）,NTRK3与ETV6均融合突变，结果一致：突变组侵犯甲状腺包膜占比大（P <0.05）;RAS突变：Tg-Ab水平低（P <0.05）;TP53,CCDC6：突变组与野生型组未见明显差异（P≥0.05）;（2）多基因突变组侵犯包膜、侧颈淋巴结转移占比Xenobiotic metabolism大、侧颈转移淋巴结数量多，M分期晚（P <0.05）;3.cN0患者中：BRAF V600E单基因突变组CLNM占比大，中央区转移淋巴结数目较多（P <0.05）。结论 （1）PTC中，BRAF V600E突变与中央区淋LY-188011抑制剂巴结转移相关；（2）多基因突变较单基因突变表现出更强的侧颈淋巴结及远处转移能力；（3）cN0 PTC患者中，BRAF V600E单基因突变与隐匿性中央区淋巴结转移有关。

研究背景和目的肝细胞癌(HCC)的恶性程度很高,且病情发展速度较快,影响范围很广。尽管HCC的诊断方法与治疗手段现已有一定发展,但其复发率与生存率却依旧很低。本研究将应用生物信息学技术对HCC患者的发病和预后情况进行分析,以探究新治疗靶点及其作用的分子机制。Enoyl-CoA水合酶和3-hydroxyacyl CoA脱氢酶(EHHADH)是过氧化体β氧化途径的四种酶之一,既往研究表明在恶性肿瘤的发生发展进程中EHHADH起着重要作用,但目前关于其在HCC中的研究尚少。基于综合公共数据库,本文分析了 EHHADH在HCC中的功能及其机制,研究了 EHHADH在HCC中的表达水平及其对预后的影响,同时也探讨了EHHADH作为一种潜在的生物标志物和治疗靶点潜力的可能性。研究方法本研究采用从TCGA、GEO和ICGC数据库中获取的858例HCC组织数据与493例癌旁组织数据(共1351例转录组和基因组数据)。获取GEO数据库存储的HCC及癌旁组织基因表达数据运用GSEA筛选HCC与Vorinostat分子式癌旁的差异通路,进而筛选差异通路中显著富集的基因,获得Hub基因EHHADH。利用TCGA HCC基因表达数据及相应临床信息分析获得与EHHADH转录组水平下调相关的基因突变,发现TP53突变最显著相关。利用相关性分析探究TP53突变导致EHHADH表达下调的机制。基于Metascape数据库预测EHHADH参与HCC发展的信号通路,发现与铁死亡信号通路显著相关,并分析其与铁死亡相关基因的关系。基于TIDE算法对TCGA HCC数据集分析EHHADH表达量与肿瘤对ICB治疗反应水平的关系。最后收集HCC患者癌组织及癌旁正常组织对EHHADH在HCC中的表达量进行免疫组化验证实验。研究结果1、运用GSEA筛选HCC与癌旁组织差异通路中显著富集的基因,获得Hub基因EHHADH。三个HCC数据集数据的生信分析结果均表明相对于癌旁正常组织EHHADH基因在HCC肿瘤组织中低表达显著;且EHHADH表达量与患者的病理分级(肝细胞去分化程度)显著相关,与总生存期呈正相关。2、在HCC肿瘤组织和癌旁正常组织的比较中,EHHADH的表达量在肿瘤组织中不仅明显glioblastoma biomarkers低于正常组织,而且与肿瘤组织的分化程度呈正比关系。3、对HRSL3分子式CC肿瘤微环境分析结果显示低表达EHHADH组的TIDE评分增加且免疫检查点的mRNA转录水平普遍升高。此外,该基因的低表达与HCC的多种免疫细胞浸润水平改变有关。4、采用GO数据库及KEGG数据库对EHHADH基因进行功能富集分析,结果显示其参与到肿瘤脂肪酸代谢通路中。且EHHADH高低表达组间,部分铁死亡相关基因转录组水平存在显著差异,综上推测该基因参与了细胞铁死亡调节。5、TCGA的HCC数据集体细胞突变景观分析显示HCC患者基因组中TP53突变率比例最高,且TP53错义突变可能导致EHHADH上游基因PPARGC1A表达量下降。研究结论本研究通过生导EHHADH上游基因PPARGC1A表达异常从而下调EHHADH表达。因此,EHHADH可能是HCC潜在治疗靶点。