PDK1信号通路

背景：当前使用的传统试剂(甲醛溶液固定、乙醇脱水、二甲苯透明脱蜡)对组织前期处理制作的常规石蜡切片质量较低，已成为制约脂肪细胞性肿瘤病理诊断的瓶颈。而且，传统试剂容易对实验室环境造成污染，对实验室人员造成多种健康危害。目的：探讨环保型组织样本制备液在脂肪细胞肿瘤苏木精-伊红染色及非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤MDM2基因检测中的应用价值。方法：选取2016年2月至2022年7月期间592例脂肪细胞肿瘤标本为研究对象，同一标本对半切开，按照所使用的标本前期处理试剂的不同，随机分为2组：传统组和环保组。传统组使用传统试剂甲醛溶液固定、乙醇脱水、二甲苯透明脱蜡制作常规石蜡切片592张；环保组使用环保型组织样本制备液制作切片592张。依据切片苏木精-伊红染色质量的不同等级domestic family clusters infections，比较两组切片的苏木精-伊红染色优良率；进一步对其中病理确诊为非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤的33例标本再次切片后，使用荧光原位杂交法检测MDM2基因，比较两组切片MDM2基因扩增率的差异。结果与结论：(1)相对于传统组，环保组的脂肪细胞肿瘤的组织切片更舒展、更完整，细胞无折叠，染色更清晰S63845分子量，红蓝对比度更佳，细胞结构更致密；(2)环保组的组织切片苏木精-伊红染色优良率高于传统组，差异有显著性意义(P=0.000)；(3)相对于传统组，环保组的MDM2探针和CSP12探针仅在标本染色体特定的区域内结合，更具特异性；(4)环保组杂交成功细胞数高于传统组LY294002 molecular weight，差异有显著性意义(P=0.000)；(5)传统组和环保组的MDM2基因信号数、MDM2/细胞值、CSP12信号数、CSP12/细胞值、MDM2/CSP12值之间的差异无显著性意义(P> 0.05)；(6)两组MDM2基因扩增率比较，差异无显著性意义(P=0.31)；(7)结果表明，环保型组织样本制备液有利于提高脂肪细胞肿瘤的苏木精-伊红染色优良率，保证了非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤MDM2基因的检测质量，有临床推广使用的价值。

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis),俗称大闸蟹、河蟹,是我国虾蟹类养殖的重要品种之一,味道鲜美,营养丰富,具有重要的经济价值。中华绒螯蟹具有洄游习性,通常在淡水中生长发育,性腺成熟时洄游至海水或河口区域生殖繁衍后代。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一类兼性厌氧的革兰氏阴性、短杆菌,不具有芽孢和荚膜。广泛分布于养殖水体、入海口、河口和咸水湖泊等地,具有很强的致病性,对水生生物与人类均具有感染性。本试验在建立感染模型的基础上,从临床症状、组织病理学变化、酶活力变化、免疫相关基因表达与转录组学等方面,对比研究Pexidartinib使用方法中华绒螯蟹抵抗溶藻弧菌感染的免疫防御机制,分析其转录组变化和差异表达基因,探究中华绒螯蟹应对细菌感染的免疫防御机制,为中华绒螯蟹的健康养殖提供基础试验数据。主要研究方法与结果如下:(1)通过实验室攻毒试验,建立了中FUT-175体内华绒螯蟹的溶藻弧菌急性感染模型。根据寇氏改良公式,计算得出24 h的半数致死量为1.93×10~6CFU/m L。(2)中华绒螯蟹被溶藻弧菌感染后6 h出现活力减弱,运动能力衰退,刺激后无闪避行为,人为倒置不能迅速翻转等临床症状。解剖后发现其肝胰腺颜色变淡,部分鳃丝发黑。组织病理学分析显示,相较于对照组,细菌感染后12 h,肝胰腺组织产生明显病变;鳃丝尖端出现肿胀,鳃丝排列不整齐,上皮细胞萎缩。溶藻弧菌感染能引起中华绒螯蟹肝胰腺和鳃组织损伤,其中感染后12～24 h是脏器损伤最严重的时间段。(3)酶活力检测结果显示,溶藻弧菌感染中华绒螯蟹后,肝胰腺组织中的溶菌酶(LZM)活力在6～48 h逐渐升高,48～72 h活力逐渐降低,均极显著高于对照组(P<0.01)。超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)活力在0～6 h逐渐上升,极显著高于对照组(P<0.01),6～12 h逐渐下降,12～24 h再次上升,24～72 h又逐渐下降,72 h恢复至接近对照组水平。蟹被感染后谷胱甘肽还原性酶(GR)总体呈现先下降后上升的趋势,碱性磷酸酶(AKP)呈现先降低后升高,再降低之后继续升高的变化趋势。上述结果证明,溶藻弧菌感染,激活了中华绒螯蟹肝胰腺组织免疫相关酶活性,引起了溶菌酶等免疫相关酶活性的变化。(4)将感染12 h内濒死易感个体定义为易感组(SIS),24 h内抗病存活个体定义为抗病组(ASX),以注射PBS组为对照组(CG)。每组随机采集各9只蟹,提取肝胰腺组织的RNA,定量后将随机三只等量均匀混为一个样本,进行高通量转录组测序。对所获得的Unigenes在NR、NT、KO、Swissprot、Pfam、GO、KOG七大数据库中进行注释,2.98%Unigenes在所有数据库中得到注释,45.25%Unigenes在至少一个数据库中获得注释,54.75%Unigenes在所有数据库中都没能得到注释。GO分析显示,21,633个Unigenes按分子功能、生物过程和细胞组分进行聚类;KOG分析,共有6,113个Unigenes被归类到26个功能类别中;7,870个Unigenes被映射到KEGG pathway数据库中。(5)共鉴定出10,547个差异表达基因(P<0.05)。其中,易感组(SIS)与对照组(CG)之间鉴定出6,232个差异表达基因(P<0.05),包括上调基因3,170个,如:抗脂多糖因子2、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶等;下调基因3,062个,如:碱性磷酸酶、几丁质酶等。抗病组(ASX)与对照组(CG)之间鉴定出4,144个差异表达基因(P<0.05),包含上调基因1,670个,如:ADP-核苷酸化因子、clip结构域丝氨酸蛋白酶等;下调基因2,474个,如:谷胱甘肽S-转移酶Mu 1、羧肽酶B等。易感组(SIS)与抗病组(ASX)之间鉴定出6,104个差异表达基因(P<0.05),包含其中上调基因3,276个,如:B淋巴细胞瘤-2、NF-kappa B抑制剂α等;下调基因2,828个,如:磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、钙化酶等。对差异基因进行KEGG富集发现,发现其主要富集的通路有:MAPK信号传导通路、溶酶体、谷胱甘肽的代谢、PPAR信号传导途径等。(6)从鉴定出的差异基因中筛选出Arf、Laccases2、Bcl2等6个基因,进一步采用RT-q PCR技术对感染后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h的m RNA表达情况进行荧光定量分析。结果显示,以上基因在溶藻弧菌感染后的表达量均发生了显著变化,说明这些基因可能在中华绒螯蟹免Components of the Immune System疫调控方面有重要作用。综上所述,溶藻弧菌侵染中华绒螯蟹,会导致肝胰腺和鳃等组织损伤,引起溶菌酶等免疫相关酶活性的变化,以提高机体的抗氧化能力与免疫防御;同时,会导致不同临床症状的中华绒螯蟹肝胰腺组织转录组免疫相关基因差异性表达,进而提高机体免疫性能。

目的 探讨血清血管生成素样蛋白2(Angptl2)、抵抗素及脂联素变化与2型糖尿病（T2DM）患者颈动脉斑块形成的关系。方法 选择2015年12月至2018年9月在杭州市第一人民医院确诊的T2DM患者191例，分为伴颈VX-661体内实验剂量动脉斑块的观察组（91例）和不伴颈动脉斑块的对照组（100例）。测定和比较两组患者的一般资料[体重指数（BMI）、收缩压、腰臀比]和生化指标[空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）]、Angptl2、抵抗素及脂联素水平。采用多因素logistic回归分析形成颈动脉斑块的影响因素。结果 观察组血清TC、TG、Angptl2和抵抗素水平高于对照组，HDL-C和脂联素低于对照组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。TC、TG、Angptl2、抵抗素水平增高，HDL-C及脂联素降低是T2DM患者发生颈动脉斑块形成的独立危险因素（均P<0.05Staurosporine试剂）。结论 Angptl2和抵抗素水平增narcissistic pathology高及脂联素降低与T2DM患者颈动脉斑块形成相关。

目的:本研究通过分析早期营养干预的最佳时机，探讨早期营养干预在老年鼻咽癌病人放疗中的应用效果。方法:前瞻性收集101例鼻咽癌放疗病人的临床资料。以营养状况为主要预后变量，采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic, ROC曲线)计算早期点击此处营养干预的最佳截止时间。根据最佳截止值分为早期营养干预组和晚期营养干预组，比较两组病人的基线和结局指标。进一步采用Kaplan-MeieY-27632化学结构r生存曲线分析和Cox比例风险回归模型分析基于该阈值的营养干预时机与营养不良风险的关联。结果:ROC曲线分析显示放疗后第27天为早期营养干预的最佳截止值(曲线下面积为0.925)。倾向性评分匹配(propensity score matplacental pathologyching, PSM)后，早期营养干预组营养不良风险(48.15%)明显低于晚期营养干预组(81.48%)(χ~2=6.577,P=0.010)。COX回归分析显示，调整相关混杂因素后，晚期营养干预组病人出现营养不良的风险是早期营养干预组的7.15倍(95%CI为2.85～17.95,P<0.001)。早期营养干预组的NRS 2002总分和白蛋白水平均有较好的改善(均P<0.05)。结论:27 d内早期营养干预可降低老年鼻咽癌放疗病人继发营养不良的风险，改善病人的营养状况和放疗结束时的白蛋白水平。

研究背景和目的:终末期肝病(end-stage liver diseases,ESLDs)是一种以肝功能严重异常并影响全身各个系统为表现的临床综合征,是肝病失代偿期进展为肝衰竭的统称。肝衰竭是由病毒、酒精、药物和缺血再灌注等病因引起的肝损害,肝衰竭作为一个高发病率、高死亡率的全球性公共卫生问题,ESLDs是严重危害国民健康和增加经济负担的重大疾病。原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)是ESLDs目前唯一有效的治疗手段,但其应用受到供体器官来源的限制。近年来,随着肝细胞在ESLDs治疗的基础研究取得了令人可喜的进展,利用肝细胞移植开展ESLDs的治疗已经成为大势所趋。但是肝细胞移植治疗ESLDs尚存在未解决的问题,例如:(1)缺乏充足非供体来源肝细胞,存在肝细胞来源短缺问题;(2)肝细胞经血管输注移植后,随血液循环流失,肝脏植入效率低下,最终定植入肝脏的细胞不足移植细胞的5%;(3)植入肝脏后的肝细胞增殖能力有限;(4)宿主对移植肝细胞存在免疫排斥等。探索可用于肝损伤修复的不同来源Trichostatin A半抑制浓度肝细胞,积极开展多种有效的移植策略是解决这些问题的关键。在肝细胞获取来源方面,诸多研究已经实现从多能干细胞诱导分化、成熟肝细胞谱系重编程、成体干细胞扩增后分化等途径获得具有原代肝细胞样特性的种子细胞。其中,(1)胆管树干细胞(biliary tree stem cells,BTSCs)作为存在于胆管内壁的胆周腺体内的成体干细胞,已从基因、细胞、发育、动物实验等方面被证实可分化为肝细胞、胆管上皮细胞和胰腺内分泌细胞,是可用于肝脏功能损伤修复的理想种子细胞。(2)胎肝细胞(fetal liver cells,FLCs)因为可分化为成熟肝细胞和胆管上皮细胞,具有来源广泛、增殖能力强、细胞体积小等特点,已在肝脏功能损伤修复中展现理想效果。(3)通过小分子化合物组合对原代肝细胞进行谱系重编程,可获得在体外可大量扩增的肝前体细胞(hepatic progenitor cells,Hep PCs)。这些Hep PCs具有自我更新,高度增殖和向成熟肝细胞定向诱导分化的潜能。已有研究表明,原代肝细胞来源的Hep PCs经脾脏移植肝衰小鼠后,Hep PCs可定植于肝脏并分化,发挥成熟肝细胞的功能。除了BTSCs、FLCs和Hep PCs,骨髓和围产期组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)虽然不能直接分化成为肝细胞,但其通过免疫调节和旁分泌功能,已经在ESLD患者的临床治疗中展现出救治疗效。这些已经在基础研究和临床试验中被证实具有救治肝损伤功能的细胞,都为原代肝细胞移植应用所面临的瓶颈问题的突破提供解决方案。在移植策略的制定方面,目前临床常用的肝脏细胞治疗移植策略的主要通过血管输注移植。血管输注移植中的细胞通过与窦状内皮相互作用植入,细胞随血液循环流失严重,定植效率低,细胞阻塞血管,细胞异位定植等风险。目前已经有多种肝脏直接移植策略,为提高定植效率、降低栓塞风险提供了可能的备选方案,这些策略包括直接脏器注射、细胞膜片工程和补片移植(patch grafting)等。直接脏器注射移植可以实现细胞的肝内直接移植,但单剂注射体积和数量有限,注射导致的机械张力具有损伤肝脏生理结构的风险,尤其对于易于出血的纤维化和硬化肝脏患者。细胞膜片技术通过移植成熟细胞分泌的因子间接发挥效用,效用时间短暂。本课题组前期研究建立了通过将种子细胞包埋在软的(G*<100Pa)透明质酸凝胶中,并置于脱敏蚕丝医用敷料构造的补片移植策略。通过该策略移植BTSCs会在1-3周内实现向整个肝脏的迁移,而定植入肝脏内的BTSCs会分化成熟,实现对肝损伤小鼠进行短期救治。对于补片移植的机制探讨证实,BTSCs分泌的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)家族成员MMP1和MMP2,尤其MMP2对细胞通过补片移植的成功至关重要。因此,利用MMP2作为其他可用于补片移植的细胞类型的筛选标志,将有可能极大地提高种子细胞筛选效率,通过筛选获得可向肝脏移植的种子细胞,从而实现对EGNE-140SLDs的快速救治。同时,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)作为Fah~(-/-)小鼠(延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因剔除小鼠,肝衰竭小鼠模型即终末期肝病小鼠模型)病变的重要指标,因此,通过AFP的表达情况可以指示Fah~(-/-)小鼠的救治情况。因此,本研究通过三个研究内容,使用MMP2筛选可用于补片移植开展终末期肝病治疗应用的不同来源的肝细胞;实现胆管树干细胞移植的长期有效性;探讨AFP作为Ⅰ型酪氨酸血症患者诊断和预后的标志物。本项目在课题组前期补片移植的基础上,进一步丰富了可用于补片移植的种子细胞类型、实现了ESLDs治疗中的应用,对于细胞移植治疗终末期肝病的基础研究转化为临床应用具有非常重要的意义。第1章适合补片移植救治肝衰小鼠的不同肝细胞来源类型的筛选研究目的:筛选不同来源肝细胞的补片移植实现Fah~(-/-)小鼠救治的有效性。研究方法:1、获取小鼠胎肝细胞、通过观察细胞形态和大小,流式细胞术分选出胎肝细胞,胎肝细胞KM培养基形成类器官;细胞免疫荧光、荧光定量聚合酶链式反应(qpcr)检测CK19(细胞角蛋白19)、AFP(甲胎蛋白)、ALB(白蛋白)和HNF4α(肝细胞核因子4α)基因的表达进行鉴定并检测MMP2基因的表达;胎肝细胞补片移植;移植后疗效的评价包括:血清谷丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和白蛋白(ALB)的检测,免疫组化检测延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH,FAH免疫组化染色是染肝脏中外源细胞植入和增殖的肝细胞)在Fah-/-小鼠肝脏植入细胞中的表达。2、获取小鼠肝前体细胞,肝细胞经过有小分子化合物组成的TEM(肝细胞转化增殖培养基)培养重编程为肝前体细胞,肝前体细胞干性标志基因鉴定并检测MMP2基因的表达;肝前体细胞补片移植;移植后疗效的评价包括:血清ALT、AST和ALB的检测,免疫组化检测FAH在宿主肝脏中的表达。3、通过AAV-TBG-Cre对Rosa26-LSL-td Tomato小鼠的肝细胞进行标记,获取带红色荧光标记的肝细胞,并检测MMP2基因的表达;肝细胞补片移植;移植后疗效的评价包括:血清ALT、AST和ALB的检测,免疫组化检测FAH在宿主肝脏中的表达。4、获取绿色荧光蛋白(GFP)标记的人源脐带间充质干细胞(UC-MSCs,由上海市东方医院干细胞基地GMP实验室提供),UC-MSCs形态学鉴定,表面标志物鉴定及成骨、成软骨和成脂肪分化鉴定;UC-MSCs通过病毒转染GFP;GFP标记的UC-MSCs补片移植;移植后疗效的评价包括:血清ALT、AST和ALB的检测,GFP标记的UC-MSCs植入肝脏的荧光示踪;UC-MSCs线粒体在宿主肝脏内表达的免疫组化。结果:1、胎肝细胞通过补片移植4周后Fah~(-/-)小鼠ALT、AST可见升高、ALB可见下降,但ALT、AST和ALB数值明显好于对照组(补片+无细胞+撤NTBC组),肝脏内可见胎肝细胞分化增殖的成熟肝细胞,免疫组化FAH表达。2、胆管样肝前体细胞通过补片移植4周后Fah~(-/-)小鼠ALT、AST明显升高,ALB明显下降,ALT、AST和ALB数值与对照组比较无明显差别,肝脏内未见胆管样肝前体细胞分化成熟的肝细胞,免疫组化FAH不表达。3、肝细胞通过补片移植4周后Fah~(-/-)小鼠肝脏内示踪未见红色荧光,ALT、AST明显升高,ALB明显下降,ALT、AST和ALB数值与对照组比较无明显差别,肝脏内未见成熟的肝细胞,免疫组化FAH不表达。4、UC-MSCs补片移植,Fah~(-/-)小鼠肝脏内示踪可见绿色荧光,免疫组化UC-MSCs线粒体染色阳性,ALT、AST可见升高,但ALT、AST数值明显好于对照组,ALB明显下降,ALB数值与对照组比较无明显差别,肝脏内未见分化成熟的肝细胞,免疫组化FAH不表达。结论:1、MMP2机制实现干细胞补片移植至关重要。2、胎肝细胞通过补片移植可以救治Fah~(-/-)小鼠实现救治的有效性,适合补片移植治疗终末期肝病。3、胆管样肝前体细胞MMP2的表达和肝向分化为成熟肝细胞的不足,未能实现补片移植救治终末期肝病。4、肝细胞缺乏MMP2的表达,细胞未能通过补片移植进入Fah~(-/-)小鼠肝脏,未能实现补片移植救治终末期肝病。5、UC-MSCs通过补片移植进入Fah~(-/-)小鼠肝脏改善肝功能,适合补片移植治疗终末期肝病。第2章补片移植胆管树干细胞治疗肝衰竭小鼠的长期有效性研究目的:补片移植实现胆管树干细胞治疗Fah~(-/-)小鼠的长期有效性。研究方法:1、获取小鼠胆管树干细胞(mBTSCs),久保田(KM)培养基mBTSCs原代培养。2、mBTSCs干性标志及其基因鉴定。3、mBTSCs补片移植。4、移植后疗效的评价包括:血清ALT、AST的检测,带绿色荧光蛋白mBTSCs植入肝脏的荧光示踪,免疫组化检测FAH在宿主肝脏中的表达,免疫组化检测AFP在宿主肝脏中的表达。研究结果:1、带绿色荧光蛋白的mBTSCs移植3周后在Fah~(-/-)小鼠肝脏示踪见绿色荧光。2、mBTSCs通过补片移植3周后Fah~(-/-)小鼠体内ALT、AST可见升高,但ALT、AST数值明显好于对照组。3、mBTSCs通过补片移植3周后,Fah~(-/-)小鼠肝脏内可见mBTSCs分化成熟增殖的肝细胞,免疫组化FAH表达,但随移植时间延长,免疫组化FAH表达逐渐减弱。4、mBTSCs通过补片移植3月后Fah~(-/-)小鼠的ALT、AST明显升高,ALT、AST数值与对antibiotic-related adverse events照组比较无明显差别。5、mBTSCs补片移植3周后甲胎蛋白(AFP)极少量表达,但随移植时间延长,甲胎蛋白表达升高。结论:1、mBTSCs通过补片移植短期内可以救治Fah~(-/-)小鼠,长期移植中Fah~(-/-)小鼠微环境急剧改变,mBTSCs肝向分化为成熟肝细胞受阻,未能达到长期有效救治Fah~(-/-)小鼠的作用。2、甲胎蛋白可能对Fah~(-/-)小鼠的救治疗效有指示作用。第3章甲胎蛋白在不同来源肝细胞补片移植救治Fah~(-/-)小鼠疗效中的指示作用研究目的:证明甲胎蛋白(AFP)在不同来源肝细胞补片移植中救治Fah~(-/-)小鼠疗效中具有指示作用。研究方法:1、胎肝细胞补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP免疫组化检测。2、胆管样肝前体细胞补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP免疫组化检测。3、肝细胞补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP免疫组化检测。4、UC-MSCs补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP免疫组化检测。5、肝细胞脾脏移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP免疫组化检测。研究结果:1、胎肝细胞补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP极少量表达;肝细胞补片移植组,胆管样肝前体细胞补片移植组,人源脐带间充质干细胞补片移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP明显表达。2、肝细胞脾脏移植组Fah~(-/-)小鼠肝脏AFP未见表达结论:甲胎蛋白在不同来源肝细胞移植救治Fah~(-/-)小鼠疗效中具有指示作用。

目的：本研究基于超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）及高通量转录组测序技术（RNA-seq）探讨益肾化luciferase immunoprecipitation systems湿颗粒调节血清代谢物及肾脏信使核糖核酸（mRNA）表达，改善糖尿病肾病（DKD）的作用机制。方法：24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、益肾化湿颗粒组，每组8只。以低剂量链脲佐菌素腹腔注射构造DKD大鼠模型，益肾化湿颗粒组给予益肾化湿颗粒5.54 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃，正常组与模型组给予等量生理盐水，持续6周。实验期间监测大鼠体质量、血糖，末次给药24 h后麻醉动物，下腔静脉取血，分离血清，检测肾功能、血脂、炎症指标，取大鼠肾组织于中性多聚甲醛中固定，苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）与过碘酸雪夫氏（PAS）染色观察肾脏病理变化，通过UHPLC-MS/MS与RNA-seq分析血清代谢变化及肾脏mRNA表达差异，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织差异mRNA及蛋白表达，探寻共性表达机制。结果：与正常组比较，模型组大鼠体质量减少，血糖、尿微量白蛋白与尿肌酐比值（UACR）、尿素氮（BUN）、胱抑素-C（Cys-C）、β_(2)-微球蛋白（β_(2)-MG）、白细胞介素-6（IL-6）、甘油三酯（TG）及总胆固醇（TC）均显著增高，总超氧化物歧化酶（T-SOD）显著降低（P<0.05，P<0.01），经药物干预后的益肾化湿颗粒组大鼠各指标均有不同selleck产品程度改善（P<0.05，P<0.01）；与正常组比较，模型组大鼠肾脏系膜基质增生、纤维组织增生及小管空泡变性，与模型组比较，益肾化湿颗粒组大鼠肾脏病理得到一定Talazoparib细胞培养程度改善；鉴定出益肾化湿颗粒作用靶代谢物14个及靶mRNA 96个，靶代谢物主要富集于鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成等20条KEGG通路；靶mRNA经KEGG富集得到与糖脂代谢密切相关的TOP 20通路，其中共涉及21个差异mRNA；血清差异代谢物与肾脏差异mRNA共同富集到甘油磷脂代谢、花生四烯酸代谢、嘌呤代谢、初级胆汁酸生物合成、抗坏血酸和醛酸代谢、半乳糖代谢等6条通路，其中共涉及磷脂酰乙醇胺（PE）等7个差异代谢物及Adcy3等7个差异mRNA。ROC结果显示7个差异代谢物有较高的预测准确性，Real-time PCR及Western blot验证结果与测序结果高度一致。结论：益肾化湿颗粒能够减轻DKD大鼠UACR、BUN等生化指标，纠正糖脂代谢紊乱，改善肾功能，其作用机制可能与调节PE等血清代谢物的水平及肾脏Phospho1等mRNA的表达有关，其中甘油磷脂代谢等6条通路可能发挥重要作用。

目的：调查糖尿病视网膜病变玻璃体切割术患者的焦虑状况，并分析其对血糖控制的影响。方法：选择2020年1月至2020年12月江苏省人民医院收治的80例糖尿病视网膜病变患者，均行玻璃体切割术治疗，术后2～3天采用焦虑自评量表（SAS）评估患者焦虑程度，并将患者分为焦虑组（SAS评分≥50分）和无焦虑组（SAS评分<50分），采用多因素Logistic回归分析发生焦虑的影响因素，比较两组空腹胰岛素（FINS）、C肽、空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）水平，采用Pearson相关系数分析SAS评分与血糖水平的相关性。结果：80例糖尿病视网膜病变玻璃体切割术患者SAS得分36～67分，平均（48.35±9.18）分，其中22例SAS评分≥50分，焦虑发生率为27.50%。大专以下文化程度、家庭平均月收入<6000元、糖尿病病程≥8年是糖尿病视网膜病变玻璃体切割术患者发更多生焦虑的危险因素（P<0.05）。焦虑组患者的FPG、2hPG、FINS、C肽、HbA1c水平均高于无焦虑组患者（P<0.05）。糖尿病视网膜病变medicine information services玻璃体切割术患者的SAS评分与FPG、2hPG、FINS、C肽、HbA1c水平均呈正相关（r=0.468、0.509、0.538、0.609、0.637，均P<0.05）。结论：糖尿病视网膜病变玻璃体切割术患者焦虑发生率较高，文化selleckchem Naporafenib程度、收入水平、糖尿病病程是焦虑发生的影响因素，焦虑情绪会影响患者血糖控制水平，临床应针对性制定防治措施。

目的 观察左心室心肌功能参数评估2型糖尿病(T2DM)患者血清补体C3水平的价值。方法 纳入38例T2DM患者，按C3水平将其分为低C3(C3~-组，n=19)和高C3组(C3~+组，n=19),另以61例无糖尿病及心脑血管病史的甲状腺结节或乳腺结节患者为对照组；比较3组实验NN2211采购室指标、舒张末期室间隔厚度(IVSD)、舒张末期左心室后壁厚度(LVPWD)、舒张末期左心室内径(LVEDD)、收缩末期左心室内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、左心室心内膜下心肌整体圆周应变(GCS_(endo))、中层心肌整体圆周应变(GCS_(mid))及心外膜下心肌整体圆周应变(GCS_(epi)),分析GCS_(endo)、GCS_(mid)、GCS_(epi)与实验室指标的相关性，观察以之FUT-175采购评估患者血清补体C3水平的价值。结果 空腹血糖、糖化血红蛋白、单核细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、嗜碱性粒细胞百分比、补体C3水平、LVESD、IVSD、bone biologyE/e、e/a、GCS_(endo)、GCS_(mid)及GCS_(epi )3组总体差异均有统计学意义(P均<0.05)。GCS_(endo)、GCS_(mid)及GCS_(epi)均与空腹血糖(r=0.198、0.185、0.214,P均<0.05)和糖化血红蛋白(r=0.236、0.202、0.249,P均<0.05)呈正相关，与中性粒细胞百分比呈负相关(r=-0.162、-0.162、-0.165,P均<0.05);控制空腹血糖后偏相关分析结果显示，GCS_(endo)、GCS_(mid)及GCS_(epi)均与糖化血红蛋白和中性粒细胞百分比无明显相关(P均>0.05)。以GCS_(endo)、GCS_(mid)和GCS_(epi)评估T2DM患者血清补体C3水平的曲线下面积(AUC)分别为0.754、0.710和0.707,GCS_(endo)的AUC高于GCS_(mid)和GCS_(epi)(P均<0.05)。结论 GCS_(endo)可用于评估T2DM患者血清补体C3水平。

蛋白抗体聚集是影响药物质量的原因之一。体积排阻色谱 （SEC）技术是蛋白质药物聚集体表征的常用方法，但由于制剂配方与SEC流动相较难完全一致，会引起蛋白单体非共价聚集分布，影响聚集体测定结果。本研究采用分析超速离心-沉降速率技术与体积排阻-多角度静态光散射技术以及动态光散射技术相结合的方法，研究了单克隆抗体及抗体偶联药物在添加10%异丙醇的体积排阻色谱流动相体系中单Lapatinib临床试验体和二聚体百分含量的变化Bio-imaging application规律。结果表明，异丙醇有助于消除单体间相互作用，降低非共价二聚体形成，并起到稳定蛋白单体形态及蛋白构象的作用，为体积排阻色谱法分析易聚集蛋白提供了更加准确的结果。在高盐添加10%异丙醇的流动相体系中，分析超速离心分析得到的分子质量、单体纯度、蛋白摩擦系数、水合半径、轴长比等水力学参数均可达到与制剂缓冲液一致的结果，说明流动相中添加低比例的异丙醇可以得到DS-3201分子量更高的单体含量，与实际治疗的制剂状态具有等同意义。本研究表明，将体积排阻色谱-多角度静态光散射与分析超速离心技术相结合可以有效地分析抗体蛋白的纯度和聚集形态，是抗体蛋白质量分析及制剂筛选的可靠手段。

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）痰证患者体质量指数、脂代谢指标与常见病性证素的关系。方法采集326名T2DM痰证患者的临床资料及四诊信息，将符合纳入标准的T2DM痰证患者按照超重、肥胖的诊断标准分为正常组、超重组和肥胖组，分析3组一般资料、常见病性证素selleck AZD6738积分和脂代谢指标[体质量指数（BMI）、腰围（WC）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）]的情况，采用Spearman相关分析探讨3组脂代谢指标与痰证素积分的关系，并应用多元logistic回归分析方法探讨超重和肥胖与常见病性证素的关系。结果 (1)与正常组比较，超重组和肥胖组BMI、WC明显升高（P<0.01），肥胖组升高程度优于超重组（P<0.01）。(2)肥胖组的BMI、WC、TG与痰证素积分呈正相关（P<0.05,P<0.01）,TC、HDL、LDL与痰证素积分不相关（P>0.05）；正常组、超重组的脂代谢指标与痰证素积分均不相关（P>0.05）。(3)与正3-Methyladenine试剂常组比较，超重组热盛、阴虚和气虚证素积分明显降低（P<0.05），肥FcRn-mediated recycling胖组血瘀、阴虚和气虚证素积分明显降低（P<0.05）。(4)将正常体质量、超重、肥胖作为目标应变量，以正常体质量为参照，痰兼热盛者较常发生肥胖[（OR=1.007,95%CI(1.000,1.013)]，痰兼阴虚者较少发生超重或肥胖[（OR=0.988,95%CI(0.982,0.994);OR=0.989,95%CI(0.984,0.995)](P<0.05)。结论 BMI、WC、TG可为诊断T2DM痰证提供参考依据，不同体质量与痰证病性兼杂存在一定关系。