PDK1信号通路

目的 探讨敲低CCCTC结合因子（CTCF）对5-氟尿嘧啶（5-Fu）、顺铂（DDP）耐药结直肠癌（CRC）细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 体外传代培养CRC耐药细胞株HT29/5-Fu、HT29/DDP，筛选HT29/5-Fu、HT29/DDP细胞半数抑制活性（IC_(50)）时5-Fu或DDP浓度进行后续实验。选择HT29/5-Fu、HT29/DDP细胞，随机分为HT29/5-Fu shCTCF组与HT29/5-Fu shControl组、HT29/DDP shCTCF组与HT29/DDP shControl组，分别转染shCTCF或shControl，采用Western blotting法检测CTCF蛋白表达。取各组转染后细胞，采用MTT法检测细胞存活率，采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Western blotting法检测Hedgehog信号通路补缀同源物1(PTCH1)、补缀同源物2(PTCH2)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(GLI1)、音猬因子（SHH）蛋白表达。结果 5-Fu对HT29/5-Fu细胞IC_(50)的浓度为（13.0±1.6）Cell Cycle抑制剂mg/L,DDP对HT29/DDP细胞IC_(50)的浓度为（15.Puromycin体外2±1.3）mg/L。选择13.0 mg/L 5-Fu、15.0 mg/L DDP进行后续实验。HT29/5-Fu shCTCF组、Hprebiotic chemistryT29/DDP shCTCF组CTCF蛋白相对表达量均显著低于其shControl组（P均<0.05）。HT29/5-Fu shCTCF组、HT29/DDP shCTCF组培养24、48、72 h细胞存活率均显著低于其shControl组（P均<0.05）。HT29/5-Fu shCTCF组、HT29/DDP shCTCF组细胞侵袭能力均显著低于其shControl组，细胞凋亡率均显著高于其shControl组（P均<0.05）。HT29/5-Fu shCTCF组和HT29/DDP shCTCF组Hedgehog信号通路PTCH1、PTCH2、GLI1、SHH蛋白相对表达量均显著低于其shControl组（P均<0.05）。结论 敲低CTCF可抑制5-Fu、DDP耐药CRC细胞增殖、侵袭并诱导其凋亡，其机制可能与抑制Hedgehog信号通路有关。

目的 探讨活性维生素D3对糖尿病肾病(DN)大鼠血脂代谢、肾脏形态及转化生长因子(TGF)-β1 mRNA水平的影响。方法 将实验大鼠平均分为正常对照(NC)组、DN组和活性维生素D3(VDR)组，分别比较3组大鼠的体重、肾指数、血糖、血脂指标和肾功能指标；用苏木素-伊红(HE)染色对肾组织形态进行观察比较；用Western印迹和免疫荧光聚合酶链反应(PCR)检测各组TGF-PLX3397纯度β1蛋recurrent respiratory tract infections白和mRNA的表达。结果 和NC组相比，DN组体重明显减轻，血糖和肾指数明显升高(P<0.05);治疗后VDR组和DN组相比，体重明显回升，且血糖和肾指数均显著降低(P<0.05)。与NC组血脂指标比较，DN组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显升高，高密度脂蛋白胆因醇(HDL-CSB431542配制)水平显著降低，且DN组尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、肌酐清除率(CCr)和24 h尿蛋白指标均明显升高(P<0.05);治疗后VDR组血脂指标和肾功能指标均明显改善(P<0.05)。DN组肾组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达均显著高于NC组(P<0.05);与DN组相比，VDR组肾组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。结论 活性维生素D3可改善DN大鼠血脂代谢和肾组织形态，对肾组织中TGF-β1 mRNA的表达进行抑制，从而发挥对DN肾组织的保护作用。

目的 分析硫酸镁联合拉贝洛尔对妊娠期高血压疾病（Hypertensive disorders in pregnancy 获悉更多HDP）患者血管内皮功能、妊娠结局影响。方法 将福建省福州市长乐区妇幼保健院2020年1-10月28例HDP患者作为对比组，接受硫酸镁联合硝苯地平治疗；将福建省福州市长乐区妇幼保健院2021年1-10月22例HDP患者作为观察组，接受硫酸镁联合拉贝洛尔治疗，对比两组临床疗效、血压指标、血管内皮功能指标、不良妊娠结局总发生率。结果 观察组临床总有效率（95.45%）高于对比组（67.86%），观察组治疗后收缩压（Systolic blood pressure,SBP）(121.06±5.25)mmHg、舒Dynamic biosensor designs张压（Diastolic blood pressure,DBP）(80.26±1.52)mmHg、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)(39.26±1.54)ng/L均低于对比组（138.62±10.49）mmHg、（85.26±3.11）mmHg、（58.62±4.46）ng/L，观察组治疗后一氧化氮（Nitric oxide,NO）(70.62±10.64)mol/L高于对比组（58.62±5.37）mol/L，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组不良妊娠总发生率（13.64%）与对比组（21.43%）比较，差异selleck激酶抑制剂无统计学意义（P>0.05）。结论 硫酸镁联合拉贝洛尔可有效降低HDP患者血压，减轻血管内皮功能受损程度，改善妊娠结局。

脑肿瘤核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging， MRI)的准确分割对制定手术方案和PR-171体内放疗计划具有重要意义。UNet作为脑肿瘤分割领域应用最广泛的网络，取得了良好表现，但存在跳跃连接中语义差距较大、MRI图像中跨通道信息利用不足的问题。为对脑肿瘤各区域进行准确分割，提出一种基于特征融合与注意力机制的改进UNet模型，即FFCA-UNet(Feature Fusion Coordinate Attention UNet)：在跳跃连接中设计特征融合(Feature Fusion， FF)模块来替代UNet中的直接拼接操作，以有效融合不同层次、不同尺度的特征信息，concomitant pathology减小语义差距并调整感受野，增强网络对肿瘤特征的学习能力；在编码器中引入改进后的三维坐标注意力(Coordinate Attention， CA)机制，沿MRI图像的三个方向捕获跨通道信息，增强网络对脑肿瘤边界信息的感知能力，获得肿瘤子区域更精确的位置；此外为快速获得肿瘤的相对位置、减少网络学习冗余，增加掩码图像与MRI图像一起作为网络输入。在MSD(Medical Segmentation Decathlon)数据集上的实验结果表明，FFCA-UNet在增强Regorafenib IC50肿瘤区域、非增强肿瘤区域和水肿区域的Dice系数分别是80.34、62.86和79.93，平均Dice是74.38，优于TransBTS、UNetr等其他先进网络。

目的：探讨柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及叉头pathology of thalamus nuclei框蛋白O1（FoxO1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）通路的影响。方法：以高脂饮食联合小剂量链脲佐霉素腹腔注射诱导建立2型糖尿病大鼠模型，随机分为模型组、柴胡皂苷D低剂量（50mg/kg）组、柴胡皂苷D中剂量（100mg/kg）组、柴胡皂苷D高剂量（150mg/kg）组、二甲双胍（24.2mg/kg）组，每组12只，另取12只SD大鼠以基础饲料喂养，并腹腔注射同剂量生理盐水，设为对照组。大鼠经药物分组处理后，测定大鼠空腹胰岛素水平（FINS）、空腹血糖水平（FBG），计算胰岛素抵抗指数（IRI）、胰岛素敏感指数（ISI）；行口服葡萄糖耐量试验（OGTT），计算血糖曲线下面积（AUC）；检测大鼠肝糖原及肝脏脂肪合成情况；酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清致炎因子水平；蛋白免疫印迹法检测大鼠肝组织FoxO1/PGC-1Barasertib采购α通路蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组大鼠肝糖原显著减少，脂肪合成显著增多，FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平显著升高，ISI显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，柴胡皂苷D各剂量组与二甲双胍组大鼠肝糖LY2835219使用方法原增多，脂肪合成减少，FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平降低，ISI升高，且柴胡皂苷D各剂量组之间呈剂量依赖性（P＜0.05）；柴胡皂苷D高剂量组与二甲双胍组比较，大鼠各指标无明显差异（P＞0.05）。结论：柴胡皂苷D可降低血糖，抑制炎症，降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，可能是通过抑制FoxO1/PGC-1α信号通路激活实现。

蛋白赖氨酸乙酰化修饰在物种中广泛分布,参与蛋白质翻译、转录复制、新陈代谢、信号转导等多个重要的生物学过程,该修饰调控的分子机制是当前生物大分子修饰机理研究的热点问题。一方面,蛋白可以通过酶促或者非酶的化学反应将蛋白赖氨酸残基进行乙酰化修饰;另一方面,蛋白需要特异的赖氨酸去乙酰化酶(KDACs)对乙酰化修饰蛋白的功能进行可逆调控。目前,细菌中已确定功能的KDACs均与真核同源,包括Zn~(2+)依赖型Rp Lda(与II型KDACs同源)、Zn~(2+)依赖型Acu C(与I型同源)以及NAD~+依赖型Sirtuins(与III型同源)3种,是否还有其他类型的KDACs目前尚不可知。不同物种中蛋白赖氨酸乙酰化修饰的位点多达上百至数千个,确认细节而当前已知的细菌去乙酰化酶种类明显与修饰底物数量相差甚远,细菌内很可能还有一些未知的KDACs对特异的蛋白底物起作用以维持细胞的正常生理功能。因此,寻找新的细菌蛋白赖氨酸去乙酰化酶,研究其分子调控机制与其功能,是当前蛋白质乙酰化修饰调控领域一个重要研究内容之一。本论文以在水产养殖业中引起鱼类爆发性流行病感染的人-畜-鱼共患重要病原菌嗜水气单胞菌为研究材料,发现该菌的Cob Q蛋白(Ah Cob Q,Uniport ID A0KI27,基因名AHA＿1389)是一类不依赖于Zn~(2+)、NAD~+以及ATP的去乙酰化酶,该蛋白与当前已知的所有KDACs没有同源性,且只在原核生物中存在,是一类新鉴定的去乙酰化酶。主要研究内容如下;(1)构建了ahcob Q缺失菌株,以野生型及经典去乙酰化酶ahcob B基因缺失菌株为对照,对ahcob Q突变株全菌蛋白的乙酰化修饰水平进行检测。结果发现,Δahcob Q与Δahcob B均能引起全菌蛋白乙酰化修饰水平升高,初步怀疑Ah Cob Q是去乙酰化酶;(2)生物信息学分析发现Ah Cob Q由一个NTPase的domain(4-179aa)和一个未知功能区域(180-265aa)组成。同源比对分析发现该蛋白与目前已知的KDACs没有同源性,且在真核生物中没有同源蛋白,提示Ah Cob Canagliflozin作用Q可能是一类新型KDAC;(3)对缺失菌生理表型的检测发现,缺失ahcob B后细菌生物被膜生成能力增强,而Δahcob Q则显著提高细菌运动能力以及铁离子利用能力、减弱生物被膜生成能力,两者对细菌生理表型的影响有显著不同;(4)通过体外去乙酰化修饰实验,发现Ah Cob Q可以在体外不依赖Zn~(2+)、NAD~+以及ATP对乙酰化修饰BSA蛋白(Kac-BSA)进行去乙酰化修饰,并可能依赖铁离子执行去乙酰化酶功能;(5)合成乙酰化修饰肽段,利用质谱技术确认Ah Cob Q确实可以将合成的乙酰化修饰肽段去乙酰化,从而排除其可能是水解酶的可能性;(6)利用定点突变等分子生物学技术手段确定Ah Cob Q的去乙酰化酶活性区域在195-245aa的未知功能区域内,并发现L196为Ah Cob Q关键酶活性位点之一。以上结果说明Ah Cob Q不需要依赖Zn~(2+)与NAD~+辅助就可以显著地去除Kac-BSA乙酰化修饰,且与目前已知的去乙酰化酶没有明显的同源性,是一类新的去乙酰基化修饰酶。(7)为进一步确认Ah Cob Q蛋白的去乙酰化酶活性及其生物学功能,本论文利用定量修饰蛋白质组学技术手段,比较ahcob B、ahacu C和ahcob Q分别缺失后,其乙酰化修饰蛋白底物及修饰位点的异同,结果发现Ah Cob Q共调控47个修饰蛋白的52个乙酰化修饰位点发生上调变化,其中与Ah Cob B共同调控的位点6个,与Ah Acu C共同修饰位点9个,三个蛋白共同调控的修饰位点共4个;(8)生物信息学分析发现,Ah Cob Q主要影响能量代谢以及转录翻译相关蛋白的乙酰化修饰变化;(9)通过蛋白定点乙酰化修饰和Western blotting等方法,发现Ah Cob Q确实可以在体外将上述乙酰化修饰底物蛋白去乙修饰。值得注意的是,Ah Cob Q不仅可以单独去除特定位点的乙酰化修饰,还可以与其他KDACs合作,共同调控同一个蛋白不同修饰位点或者相同位点的去乙酰化修饰;(10)进一步通过酶活测定实验发现,Ah Cob Q可以去除TCA循环中限速酶-异柠檬酸脱氢酶ICD的K388位点的乙酰化修饰,增强酶活性,从而参与细菌能量代谢的调控过程;(11)medical simulation最后,通过缺失菌的斑马鱼攻毒实验发现,Ah Cob Q参与嗜水气单胞菌毒力的调控。进一步利用酶活测定与竞争ELISA技术手段,发现Ah Cob Q并不影响细菌毒力因子-烯醇化酶ENO的代谢酶活性,但可以通过去除ENO K195位点乙酰化修饰,增强ENO与人源纤溶酶原(PLG)的相互作用,提示Ah Cob Q可能通过正调控ENO-PLG之间的相互作用,促进病原菌降解破坏宿主细胞外基质进入胞内,从而入侵宿主。综上所述,本论文发现Ah Cob Q是一种新型去乙酰化酶,可以调控多种关键酶的活性,影响细菌的能量代谢、转录翻译与细菌毒力等多个生物学过程;同时确定了Ah Cob Q的活性区域与活性位点,提出调控细菌乙酰化修饰蛋白的分子新机制。以上研究拓展了对细菌去乙酰化酶的种类和依赖类型的认识,加深了对细菌蛋白乙酰化修饰如何调控蛋白的代谢与入侵宿主等重要生物学功能的理解,为更好地研究细菌如何通过调控蛋白的功能,适应外界环境变化并保持细菌生态位的动态平衡提供了新的方向,并为防治该致病菌的感染提供新的靶标与思路。

为研究柠檬精油提取的最佳VX-445抑制剂工艺条件及抗氧化、抑菌、抗肿瘤等生物活性，以尤力克柠檬皮为原料，通过单因素实验和响应面实验优化柠檬精油提取条件并采用气质联用技术对精油成分进行分析。以抗坏血酸为对照，进行抗氧化活性测定，运用滤纸片扩散法测定柠檬精油抑菌活性，通过methyl thiazolyl blue tetrazolium bromide（MTT）比色法及蛋白免疫印迹法（western bloselleckchem SB431542tting，WB）分析柠檬精油的抗肿瘤活性。结果表明，柠檬精油提取的最佳工艺为液料比为12∶1、超声时间29 min、蒸馏时间133 min、氯化钠添加量5.20 g/L在此条件下提取率可达2.72%，精油中含有102种化合物，其中烯类物质相对含量最高，达62.89%。柠檬精油对DPPH自由基具有较好的清除能力，当精油质量浓度为343 mg/mL时，清除率可高达92.68%。抑菌活性试验表明，柠檬精油对4种受试菌均有抑制作用，其中对维氏气单胞菌抑制效果最佳。通过MTT试验并结合半数抑制浓度（IC50）发现，柠檬精油表现出显著的抗癌活性，其中对结直肠癌细胞增殖活力的影响尤为明显，对结直肠癌细胞周期和自噬相关蛋白进行WB检测发现，柠檬精油通过周期阻滞及促进自噬抑制结直肠癌细胞增殖。该研究可为万州区柠檬深加工产Non-aqueous bioreactor业以及废渣利用的发展提供理论依据，并且为精油活性成分深度开发提供理论参考。

目的 探究在高血压脑出血患者护理中运用认知干预与康复护理的效果，及对其心理状态与生活质量的影响分析。方法 选择本院2021年6月～2022年3月收治的高血压脑出血患者64例，并按照随机数字表法将其均分为采取常Biot’s breathing规护理干预的对照组，以及在此基础上联合运用认知干预与康复护理的研究组，比较两组患者护理干预前后心理状态、肢体功能及日常生活能力、生活质量评分以及护理满意度。正态计量资料采用 t 检验，计数资料采用 x~2 检验。结果 护理干预前，两组焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分比较不存在显著差异(P>0.05)，护理干预后，两组SAS、SDS评分均有不同程度的下降，且研究组患者两项评分均显著低于对照组(P<0.05)；护理干预前，两组Fugl-Meyer运动功能评估量表(FMAS)、日常生活活动量表(ADLS)评分比较不存在显著差异(PBYL719>0.05)，护理干预后，两组FMAS、ADL评分均有不同程度的增高，且研究组患者两项评分均显著高于对照组(P<0LY2835219说明书.05)；护理干预前，两组躯体疼痛、生理机能、精神健康、精力及社会功能等生活质量评分比较不存在显著差异(P>0.05)，护理干预后，两组各方面的生活质量评分均有不同程度的增高，且研究组患者各方面评分均显著高于对照组(P<0.05)；研究组患者满意度显著高于对照组(P<0.05)。结论 在高血压脑出血患者护理中运用认知干预与康复护理的效果更为明确，可有效帮助患者改善心理状态，并促进其肢体运动功能和日常生活自理能力的提升，进而利于患者预后生活质量和护理满意度的提高。

目的 探讨凝血功能、血栓前状态及炎症反应指标在妊娠期高血压疾病患adjunctive medication usage者中的变化情况与临床意义，为防治该病的发生、发展提供依据。方法 回顾性分析2019年5月至2020年10月呼和浩特市第一医院收治的100例妊娠期高血压疾病患者的临床资料，根据疾病严重程度分为妊娠期高血压组（34例），轻度子痫前期组（36例），重度子痫前期组（30例），另回顾性分析120例同期进行正常产检的妊娠晚期孕妇的临床资料作为健康参照组。对比4组研究对象入院后的凝血功能、血栓前状态、炎症反应相关指标水平selleckchem AZD9291变化，并采用Pearson相关性分析法分析各指标之间的相关性。结果 与健康参照组比，妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组患者凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）水平均显著缩短，而血浆纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D-D）、血管性假性血友病因子（VWF）及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白（CRP）水平均显著升高，且组间两两比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）；血清PT、APTT与IL-6、TNF-α、CRP、VWF均呈负相关，D-D、FIB与IL-6、TNF-α、CRP、VWF均呈正相关（均P <0.05）。结论 妊娠期高血压疾病患者凝血功能、血栓前状态及炎症反应指标异常，且各指标均www.selleck.cn/products/dinaciclib-sch727965具有明显的相关性，临床监测上述指标有助于判定、评估妊娠期高血压疾病患者的病情，以降低产妇不良妊娠结局的风险，保障母婴安全健康。

目的 总结血栓弹力图(TEG)检查在长期服用抗血小板药物的高血压性脑出血患者治疗及预后评估方面的价值。方法 回顾性分析2017年1月—2021年12月南京市第一医院及南京脑科医院神经外科收治的因ABT-263 IC50术前长期口服抗血小板药物的高血压性脑出血患者服用的抗血小板药物种类及TEG检查结果，根据花生四烯酸(AA)抑制率高低，分为抑制组及非抑制组。比较抑制组和非抑制组入院的格拉斯哥评分(GCS评分)、影像血肿扩大征(HE征)、血肿扩大或术后再出血、手术例数、手术时间及神经功能恢复情况，并进行统计学分析。结果 共纳入具备TEG结果高血压脑出血患者67例，其中服用阿司匹林32例，服用氯吡格雷25例，联合服用阿司匹林和氯吡格雷10例。TEG检查结果显Berzosertib示，AA抑制组39例，未抑制组28例。其中，抑制组HE征13例，未抑制组HE征3例，两组比较有统计学差异(P=0.031);抑制组手术35例lung viral infection，未抑制组手术19例，两组比较有统计学差异(P=0.026)。抑制组术后血肿扩大或术后再出血5例，非抑制组未出现血肿扩大或术后再出血，两组比较有统计学差异(P=0.037)。抑制组手术时长平均(3.3±0.43)h;未抑制组平均(3.9±0.40)h,两组比较有统计学差异(P<0.001)。非抑制组患者入院GCS评分及3个月后随访ADL评分量表均优于抑制组。结论 对于服用抗血小板药物的高血压脑出血患者，TEG检查AA抑制率与血肿扩大、手术时间正相关，与患者神经功能障碍恢复结果负相关，可以作为服用抗血小板药物的高血压性脑出血患者预后的独立判断因素。