目的:小分子靶向药物是复发性及晚期肾癌患者主要的治疗策略,癌细胞对靶向药物耐药是晚期肾癌患者死亡的主要原因。铁死亡是一种新型的细胞死亡方式,广泛参与了多种实体肿瘤中小分子靶向药物耐药的调控。SPARC在肾癌的发生、侵袭转移中发挥重要作用,但在癌细胞耐药方面极少报道。方法:1.通过递增梯度浓度的肾癌小分子靶向药物舒尼替尼逐步诱导建立人肾癌细胞耐药株,CCK-8检测细胞活率。结合生物信息学筛选影响人肾癌细胞发生靶向药物耐药的关键基因,通过分子生物学在耐药细胞株中检测SPARC的表达情况。明确SPARC与人肾癌细胞的靶向药物耐药相关。2.运用生物信息学分析人肾癌细胞对小分子靶向药物耐药的相关通路。通过分子生物学方法,检测耐药组与对照组间铁死亡关键分子GPX4、NRF2及SAPRC的mRNA、蛋白水平变化;检测两组间氧化应激水平的改变。结合通过铁死亡抑制剂Fer-1设计挽救实验,验证舒尼替尼Alpelisib采购治疗的人肾癌细胞发生铁死亡。阐明SPARC通过调节细胞铁死亡影响人肾癌细胞靶向药物耐药性。3.生物信息学发现SPARC与PI3K/AKT通路之间的相关性,通过体内体外实验,运用qStarch biosynthesisPCR、Western blot、免疫组化等方法,以及引入通路抑制剂LY294002,验证PI3K/AKT通路可以调节人肾癌细胞中SPARC的表达及铁死亡,且通过慢病毒转染建立稳定敲低SPARC的肾癌细胞株及裸鼠模型,探究SPARC可以通过PI3K/AKT通路调节肾癌细胞铁死亡增强靶向Q-VD-Oph试剂药物耐药性。4.结合临床数据库验证SPARC通过影响细胞铁死亡调控肾癌对小分子靶向药物的耐药性。结果:1.对小分子靶向药物舒尼替尼耐药的人肾癌细胞中SPARC基因丰度较高,明显上调;2.舒尼替尼能够促使人肾癌细胞铁死亡水平升高,耐药后这一趋势被抑制,铁死亡水平显著降低;3.SPARC可以通过PI3K/AKT通路调控肾癌细胞的铁死亡水平;4.PI3K/AKT通路能够调控肾癌细胞的SPARC表达。结论:在本研究中,我们通过生物信息学分析不同的数据库,依托分子生物学体内体外实验,结合临床实际。发现在对小分子靶向药物耐药的人透明细胞性肾癌细胞中,SPARC通过PI3K/AKT反馈环路调控肾癌细胞的铁死亡,从而实现逆转肾癌细胞对靶向药物的耐药。